本文選題：肝細(xì)胞癌　切入點：癌胚基因　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC,以下簡稱肝癌)是世界范圍內(nèi)發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一。盡管針對肝癌病人的治療方法在不斷完善,治療策略在不斷提高,但是病人的5年生存率依然很低。一個很重要的原因就是人們對肝癌發(fā)生發(fā)展的具體機制認(rèn)識不清,缺乏肝癌早期診斷的有效手段,使得大量處于肝癌早期的病人不能得到及時診斷,從而失去了治療的最佳時機。因此,深入對HCC發(fā)生、發(fā)展過程中分子機制的研究,尋找可用于HCC診斷的更有效的標(biāo)志分子,是一件刻不容緩的工程。長鏈非編碼RNA(lncRNAs)是一類轉(zhuǎn)錄本長度大于200個核苷酸的RNA分子。近幾年的研究顯示,lncRNAs在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。此外,早在20世紀(jì)70年代,已經(jīng)有科學(xué)家提出腫瘤的發(fā)生過程模擬胚胎發(fā)育的過程,例如,在胚胎期特異性高表達(dá)的甲種胎兒球蛋白就是目前肝癌診斷和預(yù)后評估最有效的標(biāo)志分子。因此本課題以“癌胚性”為切入點,通過對小鼠胎肝組織和肝癌組織中同時高表達(dá)的lncRNAs進(jìn)行篩選和功能研究,尋找更多可用于肝癌診斷和治療的標(biāo)志性的lncRNAs分子。在本研究中,我們從小鼠的胎肝組織、成肝組織和肝癌組織的lncRNAs芯片中,發(fā)現(xiàn)了大量差異表達(dá)的lncRNAs分子。我們將在成年期不表達(dá),而在胚胎期和腫瘤期同時高表達(dá)的這一類lncRNAs分子稱為癌胚性的lncRNAs分子。從多個候選癌胚性的lncRNAs分子中,我們靶定了一個新的癌胚性的lncRNA分子,根據(jù)其與鄰近編碼基因(Pleiotrophin,Ptn)的位置關(guān)系,我們將其命名為lncRNA Ptn-dt(Pleiotrophin downstream transcript),以下簡稱為Ptn-dt。我們利用real-time PCR、Northern blot和RNA熒光原位雜交技術(shù)(RNA FISH),明確了Ptn-dt的癌胚特性,同時,Northern blot的結(jié)果顯示,Ptn-dt獨立存在于小鼠的轉(zhuǎn)錄組中,RNA FISH的結(jié)果顯示,Ptn-dt主要分布在細(xì)胞質(zhì)中。之后,我們利用5’,3’RACE技術(shù),獲得了Ptn-dt的轉(zhuǎn)錄本全長。在小鼠的肝癌細(xì)胞系Hepa1-6細(xì)胞中,分別構(gòu)建了Ptn-dt過表達(dá)和干擾Ptn-dt表達(dá)的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。通過一系列的體內(nèi)外功能實驗,發(fā)現(xiàn),Ptn-dt具有促進(jìn)小鼠肝癌細(xì)胞增殖的作用。在明確Ptn-dt促進(jìn)小鼠肝癌細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)上,我們又對Ptn-dt的作用機制進(jìn)行了初步探索。通過RNA pulldown實驗和RNA免疫共沉淀(RIP)實驗,發(fā)現(xiàn),Ptn-dt與HuR蛋白之間存在相互作用關(guān)系。研究報道,HuR是一個RNA結(jié)合蛋白,可以穩(wěn)定許多RNA分子,并調(diào)控其轉(zhuǎn)錄。同時RIP的結(jié)果證實,HuR蛋白與miR-96之間存在相互作用關(guān)系。而我們的研究發(fā)現(xiàn),Ptn-dt的過表達(dá)可引起miR-96下調(diào)表達(dá)。已有研究報道,真菌天然產(chǎn)物azaphilone-9與HuR的結(jié)合能夠在體外抑制HuR與RNA分子之間的相互作用。由此我們推測,Ptn-dt與HuR的結(jié)合,可能影響了HuR與miR-96的結(jié)合,從而使得miR-96的穩(wěn)定性降低,表達(dá)水平減低。隨后,在miR-96眾多的靶分子中,我們發(fā)現(xiàn)Alk(Anaplastic lymphoma kinase)是Ptn的受體蛋白。研究報道,Ptn對其受體Alk有激活作用,而且Ptn可通過Alk促進(jìn)腫瘤的生長和血管異常的發(fā)生。同時,我們的研究發(fā)現(xiàn),Ptn-dt的過表達(dá),可促進(jìn)Alk在mRNA水平以及蛋白水平的表達(dá)。因此,根據(jù)以上研究結(jié)果和研究報道,我們初步推斷:Ptn-dt與HuR的結(jié)合,可能影響了HuR與miR-96的結(jié)合,使得mi R-96的穩(wěn)定性降低,表達(dá)減少,從而減弱了miR-96對Alk的轉(zhuǎn)錄后抑制作用。最終,Alk表達(dá)增加,增強了Ptn的生物學(xué)功能,從而實現(xiàn)了Ptn-dt的促增殖作用。簡而言之,癌胚分子Ptn-dt可能是通過HuR/miR-96/Alk通路和pleiotrophin-Alk軸來實現(xiàn)自身的促增殖作用的。概括來講,本研究首次報道了Ptn-dt在肝癌中的促增殖作用,并對Ptn-dt的作用機制進(jìn)行了初步探索。因此,本研究補充了lncRNAs在肝癌中的功能和機制研究,為人類肝癌分子機制的研究提供一定的參考價值。
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【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1701385