本文選題：MRPL35　切入點：結(jié)直腸癌　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：背景及目標(biāo):線粒體核糖體蛋白(MRPs)于胞漿合成并經(jīng)靶向輸送至線粒體后,組裝為線粒體核糖體,參與線粒體蛋白的翻譯過程。相關(guān)的研究表明,MRPs在多種惡性腫瘤中的表達(dá)出現(xiàn)異常。我們前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌細(xì)胞中MRPL35的表達(dá)水平上調(diào),本文將初步分析MRPL35在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:1.收集2005-2006年的151例結(jié)直腸癌患者的組織蠟塊,制作組織芯片,通過免疫組化檢測MRPL35的表達(dá);分析26對結(jié)直腸癌患者組織中MRPL35 m RNA和蛋白的表達(dá)水平;運用Kaplan Meier方法繪制生存曲線;對變量進(jìn)行單因素/多因素COX回歸分析,篩選獨立預(yù)后因素。2.熒光定量PCR和Western blot檢測結(jié)直腸癌及癌旁組織以及4種結(jié)直腸癌細(xì)胞中MRPL35 mRNA和蛋白水平的表達(dá)。慢病毒介導(dǎo)的RNAi敲低細(xì)胞中MRPL35的表達(dá)水平,分別采用MTT實驗、克隆形成實驗以及流式細(xì)胞術(shù)的方法,觀察MRPL35對細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的作用。結(jié)果:1.組織芯片結(jié)果顯示MRPL35主要在胞漿表達(dá),且結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織(P0.05)。MRPL35的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期以及病理類型呈正相關(guān)(P0.05),與病人術(shù)后生存期呈負(fù)相關(guān)(P0.05)。2.qPCR及Western blot結(jié)果顯示癌組織中MRPL35的表達(dá)水平高于癌旁組織(P0.05);4種結(jié)直腸癌細(xì)胞中MRPL35表達(dá)水平均高于正常結(jié)直腸粘膜細(xì)胞FHC。3.RNAi敲低HCT116和SW480細(xì)胞的MRPL35,感染5天后,HCT116細(xì)胞的增殖能力減弱85%左右,SW480細(xì)胞的增殖能力減弱71%左右。HCT116細(xì)胞的凋亡率增加72%,SW480細(xì)胞的凋亡率增加100%。HCT116和SW480的細(xì)胞周期停滯在G2/M期。結(jié)論:MRPL35促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖,其表達(dá)水平升高與患者術(shù)后生存期有密切的關(guān)系,具體分子機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Background and objective: mitochondrial ribosomal protein (MRPs) was synthesized in cytoplasm and transported to mitochondria to form mitochondrial ribosomes. Participate in the translation of mitochondrial protein. Related studies show that the expression of MRPL35 is abnormal in many kinds of malignant tumors. Our previous study found that the expression of MRPL35 in colorectal cancer cells was up-regulated. In this paper, we will analyze the role of MRPL35 in the development of colorectal cancer. Methods: 1. Collect the tissue wax of 151 patients with colorectal cancer from 2005 to 2006, make tissue microarray, and detect the expression of MRPL35 by immunohistochemistry. The expression level of MRPL35 m RNA and protein in 26 pairs of colorectal cancer tissues was analyzed, the survival curve was drawn by Kaplan Meier method, and the single factor / multivariate COX regression analysis was performed on the variables. To screen independent prognostic factors .2. fluorescent quantitative PCR and Western blot were used to detect the expression of MRPL35 mRNA and protein in colorectal cancer and adjacent tissues and four kinds of colorectal cancer cells. The expression of MRPL35 in RNAi knockout cells mediated by lentivirus was detected by MTT assay. The effects of MRPL35 on cell proliferation, apoptosis and cell cycle were observed by clone formation assay and flow cytometry. Results: 1. Tissue microarray showed that MRPL35 was mainly expressed in cytoplasm. The expression level of P0.05P. MRPL35 and lymph node metastasis in colorectal cancer tissues were higher than those in adjacent tissues. There was a positive correlation between TNM staging and pathological type of distant metastasis, and a negative correlation between MRPL35 expression and survival time after operation. The results showed that the expression of MRPL35 in cancer tissues was higher than that in adjacent tissues. The expression of MRPL35 was higher than that in the adjacent tissues of colorectal carcinoma P0.05. 2. QPCR and Western blot showed that the expression of MRPL35 was higher than that of P0. 05 in the adjacent tissues of colorectal cancer. After 5 days of infection, the proliferative ability of HCT116 cells decreased by 85% or so. The proliferative ability of SW480 cells decreased by 71%. The apoptosis rate of HCT116 cells increased by 72%. The apoptosis rate of SW480 cells increased by 100%.HCT116. And SW480 cell cycle arrest in G _ 2 / M phase. Conclusion: MRPL35 can promote the proliferation of colorectal cancer cells. The increase of expression level is closely related to the survival time after operation, and the specific molecular mechanism needs further study.
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

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本文編號：1692532