本文選題：膀胱癌　切入點：microRNA-379-5p　出處：《南京醫(yī)科大學》2017年博士論文

【摘要】：背景在我國,目前膀胱癌的發(fā)病率位居泌尿系統(tǒng)癌癥的首位。膀胱癌早期死亡率不高,但在出現(xiàn)浸潤或轉(zhuǎn)移的進展期膀胱癌患者中死亡率明顯升高。盡管膀胱癌的綜合治療措施不斷完善,當前的治療仍不能獲得滿意效果。因此,從分子水平上研究相關基因在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中的作用及分子機制,確立防治靶點,尋求新的干預策略對提高膀胱癌的療效具有特殊的重要性和迫切性。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是近年來發(fā)現(xiàn)的長度約21-25bp的非蛋白編碼 RNA,通過與耙 mRNA 的 3'非編碼區(qū)(3'-untranslated region,3'UTR)結合,在轉(zhuǎn)錄后水平促進靶mRNA降解和/或抑制其翻譯而發(fā)揮類似于小干擾RNA的基因沉默作用。在人類體內(nèi),近1/3的基因表達均有miRNAs參與。后續(xù)的功能研究也已證明,miRNAs參與幾乎所有的細胞生命活動,包括細胞的增殖、細胞周期、凋亡、遷移及侵襲等,并且研究發(fā)現(xiàn)miRNAs的異常表達存在于多種人類腫瘤中,包括肺癌、乳腺癌、胃癌及膀胱癌等。miRNAs在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能扮演著癌基因或抑癌基因的角色。然而對于miRNAs在膀胱癌中的作用機制、靶基因及調(diào)控機制等,還有待于進一步闡明。研究目的探討miRNA-379-5p(miR-379-5p)在膀胱癌中的表達、功能及其相關機制。方接首先我們檢測了 miR-379-5p在膀胱癌組織標本和膀胱癌細胞系(T24,EJ和TCCSUP)中的表達情況。在T24和EJ細胞中轉(zhuǎn)染miR-379-5p mimics和miR-NC后,通過RT-qPCR的方法檢測miR-379-5p的表達;通過CCK8和Transwell實驗檢測miR-379-5p對膀胱癌細胞增殖、遷移和侵襲的影響。通過生物信息學相關軟件預測發(fā)現(xiàn)MDM2是miR-379-5p的潛在靶基因,采用熒光素酶報告基因檢測驗證其是否靶向結合MDM2 3'-UTR;通過RT-qPCR和Western blot檢測miR-379-5p對膀胱癌細胞中MDM2 mRNA和蛋白表達水平的影響。緊接著,在T24和EJ細胞中敲低MDM2表達后檢測其對細胞的增殖、遷移和侵襲的影響。通過回復實驗(rescueexperiments)來驗證MDM2在miR-379-5p抑制膀胱癌細胞增殖、遷移和侵襲中的作用。最后,我們通過RT-qPCR和Western blot檢測MDM2在膀胱癌組織中的表達情況,并且分析MDM2和miR-379-5p之間的表達相關性。結果1、本研究發(fā)現(xiàn),與癌旁組織相比miR-379-5p在膀胱癌組織中表達下調(diào)。同時我們檢測了三種膀胱癌細胞T24,EJ和TCCSUP中miR-379-5p的表達。結果顯示,與正常人體膀胱上皮永生化細胞(SV-HUC-1)相比,miR-379-5p在三種膀胱癌細胞系中的表達均顯著下調(diào)。2、在T24和EJ細胞中轉(zhuǎn)染miR-379-5pmimics后,miR-379-5p的表達明顯上升。CCK8和Transwell實驗結果顯示miR-379-5p高表達明顯抑制T24和EJ細胞的增殖、遷移和侵襲。3、通過TargetScan和miRanda預測軟件,我們發(fā)現(xiàn)MDM2是miR-379-5p的潛在靶基因。通過熒光素酶報告基因檢測我們證實miR-379-5p可以靶向結合MDM2 3'-UTR。RT-qPCR 和 Western blot 結果顯示 miR-379-5p 可明顯抑制MDM2在T24和EJ細胞內(nèi)的mRNA和蛋白的表達水平。這些結果證實MDM2是miR-379-5p的靶基因。4、在T24和EJ細胞中敲低MDM2表達后,細胞的增殖、遷移和侵襲明顯受到抑制。5、回復實驗結果顯示共轉(zhuǎn)染MDM2高表達質(zhì)粒后可以將被miR-379-5p抑制的細胞增殖、遷移及侵襲能力恢復到miR-NC處理組的水平。結果表明,MDM2參與介導miR-379-5p抑制膀胱癌細胞增殖、遷移和侵襲過程。6、RT-qPCR結果表明,和癌旁組織相比,MDM2mRNA在膀胱癌組織中的表達水平顯著上升。利用Western blot檢測MDM2在膀胱癌組織和癌旁組織中MDM2蛋白的表達情況。結果顯示:在膀胱癌組織中,MDM2蛋白表達明顯上調(diào)。同時分析發(fā)現(xiàn)miR-379-5p與MDM2 mRNA在膀胱癌組織中表達呈負相關關系結論miR-379-5p在膀胱癌組織及細胞中的表達顯著下調(diào)。miR-379-5p通過靶向調(diào)控MDM2的表達來抑制膀胱癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力。
[Abstract]:The expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer , including lung cancer , breast cancer , gastric cancer and bladder cancer , has been detected by RT - qPCR . The expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer tissues was significantly lower than that of normal human bladder epithelial cells ( SV - HUC - 1 ) . The results showed that the expression of miR - 379 - 5p in bladder cancer tissues was significantly lower than that of normal human bladder epithelial cells ( SV - HUC - 1 ) .

【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

【參考文獻】

相關期刊論文 前1條

1 王智宇;張巍;楊錦建;宋東奎;魏金星;;Expression of mi RNA-630 in Bladder Urothelial Carcinoma and Its Clinical Significance[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2016年05期

相關碩士學位論文 前1條

1 李鵬超;人膀胱腫瘤中miR-200c和miR-141功能的初步研究[D];南京醫(yī)科大學;2010年

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本文編號：1692211