本文選題：二甲雙胍　切入點：食管癌　出處：《鄭州大學》2015年碩士論文

【摘要】：研究背景:食管癌是世界上常見的惡性腫瘤之一,在我國的發(fā)病率和死亡率高達世界第1位,發(fā)病世標率第6位,死亡世標率位于第12位。早期食管癌癥狀輕微,當出現臨床表現而就醫(yī)時,大部分已處于中晚期,失去了手術治療的機會,而此時化療成為治療食管癌重要手段之一。但目前所用的化療藥物不良反應較大,病人耐受性差,且容易產生抗藥性.治療食管癌尋找新的有效的藥物是當今研究的熱點。研究顯示,二甲雙胍能抑制結腸癌、乳腺癌、肝癌以及神經膠質瘤等多種腫瘤細胞的生長,Kobayashi等研究顯示,二甲雙胍可以抑制TT、KYSE30及KYSE70 3種食管癌細胞系的增殖。本實驗旨在通過觀察不同濃度二甲雙胍作用于食管癌細胞系KYSE450,在細胞水平觀察藥物對食管癌細胞增殖的抑制作用以及凋亡,并在分子基因水平初步探討產生抑制作用可能的機制。目的:檢測食管癌細胞系KYSE450,觀察經不同濃度二甲雙胍藥物刺激,且在同一濃度不同時間作用下,m TOR通路下游蛋白4EBP1和S6K1含量的變化,探討二甲雙胍在食管癌惡性細胞中的過程及在其中的可能的作用及作用機制。方法:體外常規(guī)培養(yǎng)KYSE450細胞,分為對照組(不使用藥物刺激),不同濃度實驗組(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L,采用MTT法檢測不同濃度的二甲雙胍作用不同時間對食管癌細胞增殖的抑制情況,并使用流式細胞儀器檢測不同分組凋亡率的差異;同時在分子水平采用RT-PCR以及Western blot技術檢測藥物作用后KYSE450細胞中4EBP1和S6K1的m RNA和蛋白的表達的變化。結果:1.不同濃度二甲雙胍對食管癌KYSE450細胞的抑制作用:MTT法實驗結果顯示,不同濃度二甲雙胍對食管癌KYSE450細胞的增殖均有抑制作用,并且隨著二甲雙胍濃度的提高以及二甲雙胍處理時間的延長,抑制率逐漸上升,抑制作用逐漸增強。這一結果表明在一定濃度和時間范圍內,二甲雙胍對細胞產生的抑制作用呈現時間-劑量依賴性,差異均存在統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.不同濃度二甲雙胍對食管癌KYSE450細胞的凋亡的影響流式細胞儀檢測結果顯示,5,10,20m M的二甲雙胍作用于食管癌KYSE450細胞的48h后,細胞凋亡率分別為(20.8±1.35)%、(30.1±1.56)%、(39.7±1.44)%,而不加二甲雙胍空白對照組細胞凋亡率為(5.8±1.92)%,結果表明,隨著二甲雙胍藥物濃度的提高,食管癌KYSE450凋亡率也在逐漸上升,實驗組與空白對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.不同濃度二甲雙胍對食管癌KYSE450細胞4EBP1,S6K1 m RNA表達的影響。RT-PCR結果顯示,與對照組比較,不同濃度二甲雙胍作用后4EBP1和S6K1m RNA表達水平明顯下降(P0.05),并且與二甲雙胍的藥物濃度相關。4.二甲雙胍單藥對食管癌KYSE450細胞作用后4ebp1,S6K1蛋白表達的變化Western-blot檢測結果顯示。與對照組比較,不同濃度二甲雙胍作用48h后,4EBP1,S6K1蛋白表達水平明顯下降(P0.05)。結論:1.二甲雙胍能夠抑制人食管癌KYSE450細胞增殖并誘導凋亡2.其機制可能與4EBP1和S6K1基因和蛋白表達下調有關。
[Abstract]:Background: esophageal cancer is one of the most common malignancies in the world, in our country, the incidence and mortality rate as high as first in the world, the incidence of the world standard rate of sixth, the standard rate is twelfth deaths. Early esophageal cancer with mild symptoms, when clinical manifestations and medical treatment, most have been lost in the late. The chance of surgery, while chemotherapy has become an important means of treatment of esophageal cancer. But the chemotherapy adverse drug reaction is currently used in the larger, patients of poor tolerance, and easy to produce drug resistance. For the treatment of esophageal cancer is the focus of current research and effective new drugs. Studies show that metformin can inhibit colon cancer, breast cancer, liver cancer and glioma tumor cell growth, Kobayashi research showed that metformin can inhibit TT, KYSE30 and KYSE70 in 3 esophageal carcinoma cell line proliferation. This study is to observe the different The concentration of metformin in human esophageal cancer cell line KYSE450, in the inhibition of cellular level effects on the proliferation of esophageal cancer cells and apoptosis, and the preliminary mechanism of inhibition may study at the molecular level. Objective: to detect the esophageal cancer cell line KYSE450, to observe the different concentration of metformin drug stimulation, and at the same concentration at different time under the effect of changes of M TOR pathway downstream protein 4EBP1 and S6K1 content, to explore the process of metformin in malignant cells in esophageal carcinoma and the possible effect and mechanism of them. Methods: conventional in vitro cultured KYSE450 cells were divided into control group (without the use of drugs, stimulation) groups with different concentrations (5 mol/L, 10 mol/L, 20 mol/L, 40 mol/L, MTT was used to detect different concentrations of metformin effects on esophageal cancer cell proliferation inhibition, and using flow cytometry instrument To detect the apoptosis rate of different groups; at the same time at the molecular level by RT-PCR and Western blot m RNA and the detection of drug action of protein 4EBP1 and S6K1 in KYSE450 cells after the expression changes. Results: 1. different concentrations of metformin on human esophageal cancer KYSE450 cells inhibited by MTT method: the experimental results showed that the inhibitory effect of different concentration metformin has on human esophageal cancer KYSE450 cells proliferation, and increased with the increase of the concentration of metformin and metformin treatment time, the inhibition rate increased gradually, the inhibition gradually increased. The results show that in a certain range of concentration and time, effect of metformin on the cells showed time dose dependent, the differences were statistically significant (P0.05) test results showed that the effects of different concentrations of metformin on.2. apoptosis of esophageal cancer cell line KYSE450 by flow cytometry, 5,10 20m M, metformin in KYSE450 esophageal carcinoma cell 48h, cell apoptosis rates were (20.8 + 1.35)% and (30.1 + 1.56)% and (39.7 + 1.44)%, without metformin in blank control group apoptosis rate was (5.8 + 1.92)%. The results show that with two a biguanide drug concentration increased, the apoptosis of esophageal cancer KYSE450 rate is also rising, the experimental group compared with control group, the difference was statistically significant (P0.05.3.) with different concentrations of metformin on esophageal carcinoma cell line KYSE450 4EBP1,.RT-PCR S6K1 m influence RNA expression results showed that compared with the control group, the expression of RNA 4EBP1 and S6K1m different concentration levels were significantly decreased after metformin (P0.05), and the concentration of.4. metformin single drug effect on esophageal carcinoma KYSE450 cells after 4ebp1, Western-blot to detect changes in the expression of S6K1 protein. Compared with control group, different concentration After metformin treatment, the expression level of 4EBP1 and S6K1 protein decreased significantly (P0.05). Conclusion: 1. metformin can inhibit the proliferation and induce apoptosis of human esophageal cancer KYSE450 cells 2., the mechanism may be related to the downregulation of 4EBP1 and S6K1 gene and protein expression, 48h.

【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.1

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