本文選題：腦膠質(zhì)瘤C細(xì)胞　切入點(diǎn)：縫隙連接　出處：《中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)》2017年07期

【摘要】：目的將p CMV-Cx43c DNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞,上調(diào)C6細(xì)胞Cx43表達(dá),進(jìn)而探討C6細(xì)胞Cx43過(guò)表達(dá)對(duì)其增殖能力的影響及機(jī)制。方法通過(guò)脂質(zhì)體將p CMV-Cx43c DNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入C6細(xì)胞,使C6細(xì)胞過(guò)表達(dá)Cx43,并用G418篩選出穩(wěn)定過(guò)表達(dá)Cx43的C6細(xì)胞;測(cè)定細(xì)胞倍增時(shí)間和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn),檢測(cè)各組細(xì)胞的增殖程度;分別用ERK1/2特異性阻斷劑PD98059(30μmol·L~(-1))、p38MAPK特異性阻斷劑SB20219(10μmol·L~(-1))處理各組細(xì)胞,Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞Cx43、p-Cx43、pERK1/2和p-p38MAPK的表達(dá);MTT比色法檢測(cè)各組細(xì)胞活性。結(jié)果成功將p CMV-Cx43c DNA重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入C6細(xì)胞,并篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Cx43基因的C6細(xì)胞;測(cè)定細(xì)胞倍增時(shí)間和軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)表明C6-Cx43組比C6組、C6-p CMV組細(xì)胞增殖速度減慢,細(xì)胞集落數(shù)明顯減少(P0.01);ERK1/2、p38MAPK特異性阻斷劑處理細(xì)胞后,Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)C6-Cx43+PD98059組、C6-Cx43+SB202190組較C6-Cx43組Cx43表達(dá)升高(P0.01)、pCx43(P0.05)表達(dá)下調(diào)。結(jié)論阻斷ERK1/2、p38MAPK通路,導(dǎo)致Cx43蛋白表達(dá)升高,從而抑制C6細(xì)胞的增殖。
[Abstract]:Objective to transfect the recombinant plasmid of p CMV-Cx43c DNA into C6 cells of rat brain glioma and up-regulate the expression of Cx43 in C6 cells, and to investigate the effect and mechanism of Cx43 overexpression on the proliferation of C6 cells. Methods the recombinant plasmid of p CMV-Cx43c DNA was transfected into C6 cells by liposome. C6 cells were overexpressed Cx43, and C6 cells stably expressed Cx43 were screened by G418. The cell doubling time and soft Agar colony forming test were measured to detect the proliferation degree of the cells in each group. ERK1/2 specific blockers, PD98059(30 渭 mol LPERK-1, p38MAPK-specific blocker, SB20219(10 渭 mol Lamp-1a) were used to detect the expression of Cx43, p-Cx43, pERK1 / 2 and p-p38MAPK, respectively. Results the recombinant plasmid p#en6# DNA was successfully transferred into C6 cells, and the expression of pERK1 / 2 and p-p38MAPK were detected by MTT colorimetric assay. The recombinant plasmid p38 MAPK was transfected into C6 cells successfully, and the expression of pERK1 / 2 and pERK1 / 2 were detected by MTT colorimetry. C6 cells stably transfected with Cx43 gene were screened, and cell multiplication time and soft Agar colony formation test showed that the proliferation rate of C6-Cx43 group was slower than that of C6 C6-p CMV group. The number of cell colonies decreased significantly after treatment with P0.01ERK1 / 2p38MAPK specific blocker. Western blot analysis showed that the expression of C6-Cx43 SB202190 in C6-Cx43 PD98059 group was higher than that in C6-Cx43 group. Conclusion blocking ERK1 / 2 p38 MAPK pathway leads to the increase of Cx43 protein expression and inhibits the proliferation of C6 cells.
【作者單位】： 南昌大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81660014,30760286) 江西省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 20142BAB205022)
【分類號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1662515