本文選題：膠質(zhì)瘤　切入點：腫瘤血管生成　出處：《蘇州大學(xué)》2016年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分膠質(zhì)瘤細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞體外融合實驗背景與目的:骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)因具有自我更新、多向分化的潛力,一直受到學(xué)者們的關(guān)注。最近發(fā)現(xiàn)BMSCs可以被招募到膠質(zhì)瘤微環(huán)境中,通過直接或間接作用對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生重要作用。但膠質(zhì)瘤細胞和骨髓間充質(zhì)干細胞是否可以通過細胞融合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)尚不明確。本部分擬研究體外共培養(yǎng)體系中的膠質(zhì)瘤細胞與骨髓間充質(zhì)干細胞,觀察兩者是否可以發(fā)生體外融合,及融合后細胞的生物學(xué)變化。方法:構(gòu)建表達紅色熒光蛋白(RFP)的膠質(zhì)瘤細胞SU3-RFP,同時獲取轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)基因裸小鼠的骨髓間充質(zhì)干細胞BMSCs,將SU3-RFP與BMSCs體外共培養(yǎng),熒光顯微鏡下動態(tài)觀察,用流式細胞分選技術(shù)篩選出RFP+/GFP+細胞,對其進行分子標(biāo)記物的鑒定,CCK-8法、軟瓊脂糖克隆形成實驗、劃痕實驗等分析融合細胞的增殖、遷移能力,皮下致瘤實驗比較融合細胞和親本膠質(zhì)瘤細胞的致瘤能力。結(jié)果:獲取的BMSCs穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白,高表達CD105、CD90、CD44,基本不表達CD45、CD11b,并具有成骨、成脂肪分化能力。SU3-RFP和BMSCs共培養(yǎng)后在熒光顯微鏡下觀察到RFP+/GFP+細胞,經(jīng)活細胞工作站可以觀測到細胞融合的過程。單克隆RFP+/GFP+細胞,經(jīng)RT-PCR及Western Blot鑒定其表達RFP、GFP、CD105、Nestin。體外生物學(xué)研究顯示融合細胞增殖速度快于SU3-RFP,克隆形成能力及遷移能力強于SU3-RFP。將融合細胞及SU3-RFP接種BALB/C裸鼠皮下,均致瘤(5/5),融合細胞移植瘤體積為779.6±177.78 mm2,重量為0.62±0.14g;SU3-RFP移植瘤的體積為414.01±105.04mm2,重量為0.33±0.08g。結(jié)論:膠質(zhì)瘤細胞SU3-RFP能與BMSCs在體外發(fā)生自發(fā)融合,融合細胞同時表達親本細胞的特征性基因和蛋白,且與親本膠質(zhì)瘤細胞相比惡性度更高。第二部分融合細胞體內(nèi)、體外成血管實驗研究背景與目的:腫瘤血管生成對腫瘤的生長至關(guān)重要,膠質(zhì)瘤內(nèi)豐富的血供、活躍的血管新生也是膠質(zhì)瘤惡性表現(xiàn)之一。本部分擬通過體外、體內(nèi)實驗研究融合細胞是否具有成血管能力,并通過檢測融合細胞與親本膠質(zhì)瘤細胞的干性基因表達差異,探尋可能的機制。方法:將三組細胞培養(yǎng)于Matrigel上,動態(tài)觀察細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)的變化。同時將三組細胞培養(yǎng)于內(nèi)皮細胞分化培養(yǎng)基內(nèi),并以培養(yǎng)在普通條件下的三組細胞作為對照,24小時后,通過RT-PCR、Western Blot、免疫細胞化學(xué)染色法檢測內(nèi)皮細胞標(biāo)志物CD31、CD34、VE-Cadherin的表達。通過SU3-RFP及融合細胞裸鼠顱內(nèi)原位致瘤,比較移植瘤的微血管密度,檢測體內(nèi)血管生成能力。用流式細胞術(shù)分析融合細胞和SU3-RFP細胞中CD133+細胞的比例,用RT-PCR檢測干性基因Nanog、Oct-4、Sox2的表達,驗證三株細胞的干性基因表達差異。結(jié)果:培養(yǎng)在Matrigel上的融合細胞逐漸形成管狀結(jié)構(gòu),在內(nèi)皮分化條件刺激下,多種血管內(nèi)皮細胞的標(biāo)志分子(CD31、CD 34、VE-Cadherin)在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平顯著上調(diào)。融合細胞和SU3-RFP裸小鼠原位移植均具有致瘤性,CD31免疫組織化學(xué)染色計算微血管密度(MVD),在融合細胞移植瘤為19.67±1.8/視野,SU3-RFP移植瘤為7.16±0.54/視野,融合細胞組明顯高于SU3-RFP組。檢測融合細胞和親代膠質(zhì)瘤細胞干性標(biāo)記物表達發(fā)現(xiàn),融合細胞中CD133+細胞比例、Nanog、Oct-4、Sox2表達水平均高于SU3-RFP。結(jié)論:融合細胞與親本膠質(zhì)瘤細胞相比,體內(nèi)、體外成血管能力均增強,可能與細胞融合后干性基因表達增強有關(guān)。第三部分利用雙色熒光示蹤裸小鼠移植瘤模型研究膠質(zhì)瘤血管生成中的細胞融合作用背景與目的:研究體內(nèi)腫瘤血管生成過程需要良好的示蹤模型,以顯示腫瘤細胞和宿主的相關(guān)作用關(guān)系。本部分擬采用雙色熒光示蹤的腫瘤模型,分析移植瘤中的血管結(jié)構(gòu),尋找融合細胞參與腫瘤血管生成的證據(jù)。方法:將膠質(zhì)瘤細胞株SU3-RFP細胞,接種于表達綠色熒光蛋白(GFP)的NC-C57Bl/6J-GFP裸鼠右側(cè)尾狀核,接種后4周,一部分移植瘤做切片觀察,一部分做原代培養(yǎng)。部分移植瘤組織采用厚切片壓片法觀察,部分移植瘤組織用OCT包埋后做5μm連續(xù)冰凍切片在熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察。荷瘤鼠無菌條件下完整取出腫瘤,消化后獲取原代細胞,流式細胞術(shù)檢測RFP+細胞、GFP+細胞、RFP+/GFP+細胞所占的比例。結(jié)果:熒光顯微鏡下可以區(qū)分表達RFP的腫瘤細胞和表達GFP的宿主細胞。組織壓片在熒光顯微鏡下觀察到共表達RFP和GFP的管腔樣結(jié)構(gòu),提示存在腫瘤細胞與宿主細胞融合產(chǎn)生的黃色血管。激光共聚焦顯微鏡下觀察腫瘤組織冰凍切片,發(fā)現(xiàn)血管壁上存在RFP+/GFP+細胞,因相鄰切片的相鄰位置細胞同時表達CD105、CD90,我們推測這些RFP+/GFP+/CD105+/CD90+細胞由腫瘤細胞和宿主骨髓間充質(zhì)干細胞融合而來。結(jié)論:雙色熒光蛋白示蹤的可移植性膠質(zhì)瘤模型,可清晰顯示腫瘤組織中的宿主血管、腫瘤血管和腫瘤細胞與宿主細胞共建的血管,從而證實了細胞融合是腫瘤血管生成的重要途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.41

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐俊杰;于洪泉;國巍;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;;西蘭花多肽對大鼠C6膠質(zhì)瘤細胞生長的影響[J];中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志;2012年11期

2 徐俊杰;于洪泉;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;劉興吉;;西蘭花多肽對C6膠質(zhì)瘤細胞的誘導(dǎo)凋亡作用[J];吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2013年01期

3 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質(zhì)瘤細胞化學(xué)增敏作用實驗研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

4 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質(zhì)瘤細胞體外生長的影響[J];解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年04期

5 梁一鳴,郭國慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮生長因子表達的調(diào)節(jié)[J];臨床與實驗病理學(xué)雜志;2001年02期

6 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內(nèi)皮細胞生長因子抗體對膠質(zhì)瘤生長的影響[J];山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2001年02期

7 黃強,董軍;膠質(zhì)瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經(jīng)外科雜志;2001年04期

8 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內(nèi)皮生長因子在膠質(zhì)瘤中的表達[J];腫瘤;2002年06期

9 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質(zhì)瘤對親細胞非均質(zhì)分子脂質(zhì)和幾種藥物敏感性的比較[J];復(fù)旦學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

10 王成偉 ,劉福生 ,曲元明 ,李桂林;血管內(nèi)皮生長因子抗體抑制膠質(zhì)瘤生長的實驗研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;2003年01期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質(zhì)微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質(zhì)瘤細胞侵襲和遷移的體外實驗研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質(zhì)瘤的生物治療-從實驗室到臨床[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書;李新軍;;與膠質(zhì)瘤代謝通路相關(guān)的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修飾膠質(zhì)瘤細胞疫苗的抗腫瘤免疫反應(yīng)[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

5 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強;陳鋒;杜權(quán);;骨橋蛋白在膠質(zhì)瘤細胞中的表達及其信號傳導(dǎo)途徑[A];2005年浙江省神經(jīng)外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

6 張震;徐克;;低強度超聲誘導(dǎo)C6膠質(zhì)瘤細胞凋亡的體外實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三次全國超聲醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

7 蔣偉峰;高方友;尹浩;;白細胞介素-17及其受體在膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[A];2013年貴州省神經(jīng)外科年會論文集[C];2013年

8 徐慶生;張小兵;周永慶;;膠質(zhì)瘤干細胞及其放療敏感性[A];2011年浙江省神經(jīng)外科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

9 楊孔賓;趙世光;劉炳學(xué);陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對大鼠膠質(zhì)瘤細胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經(jīng)外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

10 黃強;;膠質(zhì)瘤生成細胞研究[A];第三屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會教育論文集[C];2004年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質(zhì)瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報;2011年

2 記者 匡遠深;讓膠質(zhì)瘤干細胞不再“繁殖”[N];健康報;2011年

3 張獻懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報;2007年

4 白毅;人腦膠質(zhì)瘤基礎(chǔ)與應(yīng)用研究喜結(jié)“九大碩果”[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 王德江；劉藏；王貴懷；曹勇；王新生；肖新如;交流最新進展 提高診治水平[N];中國醫(yī)藥報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 董軍;CUL4B在神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤中的作用研究[D];山東大學(xué);2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質(zhì)瘤診斷與預(yù)后中的價值與基于CED的中樞神經(jīng)系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學(xué);2015年

3 許森林;ALDH1A1在膠質(zhì)瘤侵襲和結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移中的作用和機制[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

4 王嘯;靶向嵌段共聚物膠束在膠質(zhì)瘤磁共振成像、藥物輸送及治療的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 廖紅展;鋅指轉(zhuǎn)錄因子SNAI2在miR-203的影響下通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化參與膠質(zhì)瘤耐藥機制的調(diào)節(jié)[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 潘俊;IRG1促進膠質(zhì)瘤增殖的作用機制及臨床意義[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 鄭傳宜;膠質(zhì)瘤中GLUT3基因異常表達的意義及其相關(guān)調(diào)控機制[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

8 徐紅超;氬氦冷凍消融聯(lián)合GM-CSF治療膠質(zhì)瘤小鼠的療效及其對小鼠脾臟樹突狀細胞免疫功能影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

9 黃素寧;TNFRSF6B在膠質(zhì)瘤中的表達及對膠質(zhì)瘤細胞增殖及凋亡的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 熊偉;GBE1在人腦膠質(zhì)細胞瘤中的表達及干預(yù)實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張大慶;單核細胞趨化蛋白-1在骨髓間充質(zhì)干細胞向膠質(zhì)瘤細胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

2 黃俊龍;ADC值與膠質(zhì)瘤Ki-67、MGMT的相關(guān)性研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李明聰;下調(diào)Pygo2對U251及U251起源的膠質(zhì)瘤干細胞生物學(xué)特性的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 徐云峰;膠質(zhì)瘤干細胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

5 張靜文;T細胞過繼免疫治療小鼠腦膠質(zhì)瘤原位模型的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 洪宇;膠質(zhì)瘤瘤周水腫、病理級別、Ki-67表達三者相關(guān)性研究[D];石河子大學(xué);2015年

7 姬云翔;磷酸化Cx43蛋白在人膠質(zhì)瘤細胞中表達及其與腫瘤細胞增殖相關(guān)性研究[D];石河子大學(xué);2015年

8 朱峰;OPN的異常表達與膠質(zhì)瘤的相關(guān)性研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 劉兵;SENP1表達水平對人腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展的作用機制及其相關(guān)性[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 李文華;Slit2/Robo1在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

，

本文編號：1618812