本文選題：肝癌　切入點：抑癌基因　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究目的:探索新的有價值的肝癌(Liver Cancer)分子生物學標志物,研究肝癌中PCDH8基因啟動子的甲基化狀態(tài)及其蛋白的表達,并且分析PCDH8甲基化與肝癌臨床病理各參數(shù)的關聯(lián)。研究方法:(1)運用甲基化特異性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)法檢測42例肝細胞肝癌(HCC)、8例肝內(nèi)膽管細胞癌(CC)和50例正常肝組織中3個抑癌基因PCDH8、HIN1、RAR-β2啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。(2)運用免疫組織化學(immunohistochemistry,IHC)技術檢測肝癌組織和正常肝組織中PCDH8蛋白的表達水平。(3)評估PCDH8啟動子甲基化與肝癌患者臨床病理特征的關系。(4)運用單變量和多變量Cox比例分析來確定肝癌獨立預后因素,評估PCDH8甲基化與肝癌患者的總生存期的關系,評估甲胎蛋白(Alpha fetoprotein,AFP)水平、腫瘤的大小(體積或最大徑)、腫瘤的分化程度(或異型性)等與肝癌患者的總生存時間的相關性。結(jié)果:(1)在肝癌中,PCDH8存在著較高的甲基化率(37/42(88.1%)HCC,7/8(87.5%)CC),但是只有16/50(32%)的正常肝組織發(fā)生甲基化,PCDH8基因啟動子的甲基化率在肝癌患者和正常肝組織之間具有顯著性差異,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.001)。而其他抑癌基因HIN1和RAR-β2的甲基化率在肝癌患者和正常肝組織之間無顯著差異,無統(tǒng)計學意義。(2)肝癌組織PCDH8蛋白表達減少。大部分的正常肝組織PCDH8蛋白表達呈強陽性(43/50,86%),但是在肝癌組織中,大部分病例PCDH8蛋白表達缺失(35/42HCC病例,83.3%;7/8 CC病例,87.5%)。(3)PCDH8啟動子甲基化與其蛋白表達缺失顯著相關。在正常肝組織的組織切片中,43/50例檢測到PCDH8蛋白的表達。然而在50例肝癌組織(42例HCC,8例CC)中,有42例PCDH8蛋白的表達缺失,并且其中的40例發(fā)生PCDH8基因啟動子甲基化。因此PCDH8啟動子發(fā)生甲基化時,其蛋白表達往往缺失,啟動子甲基化與其蛋白表達缺失存在著顯著相關關系,差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.004)。(4)肝癌組織中PCDH8的異常的甲基化狀況與甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)水平顯著相關(P=0.008)。肝癌中PCDH8基因啟動子甲基化和其他臨床病理特征,如年齡、性別、腫瘤的大小、腫瘤的分化程度等均沒有顯著相關關系(P0.05)。(5)肝癌病例中發(fā)生PCDH8甲基化的患者,其總體中位生存時間為15個月,而PCDH8未甲基化患者往往預后較好(該組患者在隨訪結(jié)束時均存活),兩組差異經(jīng)統(tǒng)計學分析P=0.041,具備差異意義。此外,腫瘤大小、腫瘤分化和AFP水平也與肝癌患者的生存時間相關。COX分析顯示PCDH8甲基化可能不是一個獨立的影響預后的因子(P0.05),同樣腫瘤的大小、腫瘤的分化程度也不是獨立的預測因子(P0.05)。多因素Cox比例分析顯示,只有AFP水平這一項指標可以作為一個獨立的肝癌預后因子。結(jié)論:肝癌中PCDH8存在著較高的甲基化率,而且PCDH8往往因為基因啟動子的甲基化而失活,其蛋白表達受到啟動子甲基化的調(diào)控。PCDH8基因啟動子甲基化在肝癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到了非常重要的作用,可以作為一個有價值的診斷生物標志物用于早期發(fā)現(xiàn)肝癌以及預測臨床不良預后。肝癌組織中PCDH8的異常甲基化狀態(tài)與AFP水平顯著相關。肝癌中PCDH8未甲基化患者往往預后較好,但PCDH8可能不是一個獨立的影響預后的因子,只有AFP水平可以作為一個獨立的預后因素。
[Abstract]:Objective: To explore the new value of hepatocellular carcinoma (Liver Cancer) molecular markers of hepatocellular carcinoma, PCDH8 gene promoter methylation status and protein expression, and correlation analysis of PCDH8 methylation and clinicopathological parameters. Methods: (1) using methylation specific PCR (Methylation-specific PCR, MSP) were detected in 42 cases of hepatocellular carcinoma (HCC), 8 cases of intrahepatic cholangiocarcinoma (CC) in 3 tumor suppressor genes PCDH8, HIN1 and 50 cases of normal liver tissues, the methylation status of RAR- beta 2 promoter region. (2) by immunohistochemistry (immunohistochemistry, IHC) the expression level of PCDH8 protein in detection of hepatocellular carcinoma and normal hepatic tissue. (3) to evaluate the relationship between PCDH8 promoter methylation and clinicopathological characteristics of HCC patients. (4) using univariate and multivariate analyses Cox ratio to determine the factors of liver cancer and independent prognostic assessment, PCDH8 methylation The relationship between overall survival of patients with liver cancer, evaluation of alpha fetoprotein (Alpha fetoprotein, AFP), tumor size (volume or size), the degree of tumor differentiation (or atypia) and total survival time of patients with liver cancer correlation. Results: (1) in liver cancer, PCDH8 there is a higher rate of methylation (37/42 (88.1%) HCC, 7/8 (87.5%) CC), but only 16/50 (32%) methylation in normal liver tissues, PCDH8 gene promoter methylation rate has significant difference between HCC and normal liver tissues, the difference was statistically significant (P0.001) and the rest of the tumor suppressor gene HIN1 and RAR- beta 2 methylation rate had no significant difference between HCC and normal liver tissues was not statistically significant. (2) the decreased expression of PCDH8 protein in hepatocellular carcinoma. The expression of most of the normal liver tissue PCDH8 protein showed strong positive (43/50,86%), but in large hepatocellular carcinoma In some cases the expression loss of PCDH8 protein (35/42HCC cases, 83.3% CC cases; 7/8, 87.5%). (3) PCDH8 promoter methylation and protein expression. Significant correlation in normal liver tissues, the expression of 43/50 were detected PCDH8 protein. However, in 50 cases of hepatocellular carcinoma group (8 cases in 42 cases HCC, CC), the expression of PCDH8 protein in 42 cases, and 40 cases of PCDH8 gene promoter methylation. Therefore PCDH8 promoter methylation and its protein expression is often lack of promoter methylation and protein expression have significant correlation, the difference was statistically significant (P=0.004). (4) PCDH8 in hepatocellular carcinoma tissues and abnormal methylation status of alpha fetoprotein (alpha fetoprotein, AFP) significant level (P=0.008). The promoter methylation and other clinicopathological features of hepatocellular carcinoma PCDH8 gene, such as age, gender, tumor size, tumor The degree of differentiation were not significantly correlated (P0.05). (5) PCDH8 methylation in patients with liver cancer patients, the median overall survival time was 15 months, while PCDH8 patients without methylation (often a better prognosis in this group of patients were alive at the end of follow-up), two groups with statistical difference analysis of P=0.041, with significant differences. In addition, tumor size, tumor differentiation and the level of AFP is correlated with the survival time of liver cancer.COX analysis showed that PCDH8 methylation may not be an independent prognostic factor (P0.05), the same tumor size, tumor differentiation is not an independent predictor (P0.05). Multivariate Cox proportional analysis showed that only AFP level in this index can be used as an independent prognostic factor of HCC. Conclusion: hepatocellular carcinoma PCDH8 exists methylation rate is higher, but often because of PCDH8 gene promoter methylation and loss Live, its protein expression was regulated by promoter methylation of.PCDH8 gene promoter methylation in the occurrence and development of hepatocellular carcinoma has played a very important role, can be used as a valuable diagnostic biomarker for early detection of HCC and predict clinical adverse prognosis. PCDH8 was significantly correlated in HCC tissues and abnormal methylation the state and the level of AFP. PCDH8 in hepatocellular carcinoma patients without methylation are good prognosis, but PCDH8 may not be an independent prognostic factor, only AFP level could be used as an independent prognostic factor.

【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

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本文編號：1604086