本文選題：TRIP4　切入點：黑色素瘤　出處：《大連醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:黑色素瘤作為一種惡性的皮膚腫瘤,放化療的效果差且具有不良預(yù)后的情況,因此新的治療靶點的發(fā)現(xiàn)仍然是亟待解決的問題。本研究利用SiRNA文庫篩選技術(shù),在黑色素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375細(xì)胞中進(jìn)行篩選,發(fā)現(xiàn)敲低甲狀腺激素受體相互作用因子4(Thyroid Hormone Receptor Interactor 4,TRIP4)能夠影響黑色素瘤細(xì)胞的生長,而該基因在黑色素瘤中的功能及相關(guān)機(jī)制的研究尚不明確。因此,我們在確定該基因在黑色素瘤細(xì)胞及病人組織中的表達(dá)水平后,選擇不同黑色素瘤細(xì)胞系,敲低或過表達(dá)TRIP4之后,探索TRIP4對黑色素瘤生長的調(diào)控機(jī)制及生物學(xué)功能;并在裸鼠體外成瘤模型中進(jìn)一步驗證TRIP4調(diào)控黑色素瘤生長的的相關(guān)機(jī)制,深入研究TRIP4調(diào)控黑色素瘤生長的的分子機(jī)制并明確TRIP4的臨床意義。本論文擬在此基礎(chǔ)上確立TRIP4作為黑色素瘤治療新靶點提供理論和實驗依據(jù)。方法:(1)以siRNA library screen為實驗新技術(shù),尋找影響黑色素瘤細(xì)胞中的潛在靶基因。(2)應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)來過表達(dá)或敲低TRIP4,研究其對細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡等生物學(xué)功能,以及相關(guān)分子信號通路的變化。(3)應(yīng)用免疫印跡、免疫組化等技術(shù)檢測人腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞以及組織芯片標(biāo)本中TRIP4的表達(dá)水平,并結(jié)合細(xì)胞特性和臨床資料分析TRIP4的腫瘤特異性表達(dá)和它們在預(yù)測臨床預(yù)后上的價值。(4)應(yīng)用Pull down方法及染色質(zhì)免疫共沉淀(Ch IP)技術(shù)檢測TRIP4與炎癥因子COX-2/iNOS啟動子區(qū)結(jié)合情況。(5)使用免疫共沉淀(Co-IP)技術(shù)檢測TRIP4與p300的相互作用。(6)利用細(xì)胞活性實驗檢測TRIP4對BRAF抑制劑的影響。(7)建立黑色素瘤裸鼠動物模型,進(jìn)一步驗證TRIP4對腫瘤生長,對COX-2/iNOS表達(dá)以及藥物敏感性的影響。結(jié)果:(1)在本實驗中,我們通過siRNA library screen篩選鑒定出TRIP4基因,發(fā)現(xiàn)TRIP4在黑色素瘤細(xì)胞和組織中高表達(dá)。(2)敲低TRIP4能夠抑制黑色素瘤細(xì)胞的生長。(3)通過體內(nèi)和體外實驗證明TRIP4靶向炎癥因子調(diào)控黑色素瘤的生長。(4)TRIP4可以通過NF-κB通路調(diào)控黑色素瘤細(xì)胞中炎癥因子COX-2和iNOS的表達(dá)。(5)TRIP4可直接與COX-2和iNOS的啟動子區(qū)結(jié)合進(jìn)一步調(diào)控二者的表達(dá)。(6)TRIP4可協(xié)同p300靶向炎癥因子調(diào)控黑色素瘤細(xì)胞的生長進(jìn)程。(7)體內(nèi)和體外實驗證明敲低TRIP4可增強(qiáng)BRAF抑制劑的抗黑色素瘤生長作用。(8)黑色素瘤病人組織中,TRIP4與COX-2和iNOS的表達(dá)成正相關(guān),并與黑色素瘤病人的不良預(yù)后呈正相關(guān)。結(jié)論:TRIP4在黑色素瘤病人組織中具有高的表達(dá)水平,并與病人的不良預(yù)后呈正相關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TRIP4能夠協(xié)同p300靶向炎癥因子調(diào)控黑色素瘤的生長進(jìn)程,此外,我們還發(fā)現(xiàn)TRIP4能夠影響黑色素瘤靶向藥物的敏感性。綜上所述,我們目前的研究結(jié)果為TRIP4作為一個潛在的預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點提供了基礎(chǔ)理論依據(jù),而TRIP4和BRAF的雙靶向作用為黑色素瘤治療的臨床策略提供了可能性。
[Abstract]:Objective: melanoma is a malignant skin tumor, radiotherapy and chemotherapy have poor effect and poor prognosis, so new therapeutic target discovery is still a problem to be solved. This study used SiRNA library screening technology, were screened in the melanoma cell line A375, found that knockdown of thyroid gland hormone receptor interaction factor 4 (Thyroid Hormone Receptor Interactor 4, TRIP4) can affect the growth of melanoma cells, and study the function of this gene in melanoma and its mechanism is not clear. Therefore, we determine the expression level of the gene in melanoma cells and tissues of patients. Choose different melanoma tumor cell lines, after knockdown or overexpression of TRIP4, to explore the regulatory mechanism and biological function of TRIP4 on the growth of melanoma; and to further verify the regulation of TRIP4 tumor model in nude mice in vitro The growth of melanoma related mechanisms, in-depth study of the clinical significance of TRIP4 regulates the growth of melanoma and clear the molecular mechanism of TRIP4. This thesis is based on the establishment of TRIP4 as a new target for the treatment of melanoma and provide theoretical and experimental basis. Methods: (1) siRNA library screen to new technology experiment. Looking for potential target genes in melanoma cells. (2) the application of gene transfection to expression or knockdown of TRIP4 on cell proliferation, migration, invasion, apoptosis and other biological functions, and the related molecular signaling pathway changes. (3) by Western blot, immunohistochemistry human tumor cells and normal cells and TRIP4 microarray expression levels, combined with the characteristics and clinical data analysis of tumor cell specific expression of TRIP4 and their roles in predicting the clinical prognosis value. (4) by Pull down Assay and chromatin immunoprecipitation (Ch IP) detection of TRIP4 and inflammatory factors in the promoter region of COX-2/iNOS. (5) combined with immunoprecipitation (Co-IP) interaction detection of TRIP4 and P300. (6) the effect of cell activity assay of TRIP4 BRAF inhibitors. (7) the establishment of melanin nude mice animal model, further validation of TRIP4 on tumor growth and influence on the expression of COX-2/iNOS and drug sensitivity. Results: (1) in this experiment, we through the siRNA library screen were identified in the TRIP4 gene, found high expression of TRIP4 in melanoma cells and tissues. (2) knockdown of TRIP4 inhibited black melanoma cell growth. (3) by in vivo and in vitro experiments show that TRIP4 target control to the inflammatory factor in the growth of melanoma. (4) TRIP4 by COX-2 and iNOS NF- expression of inflammatory factor kappa B pathway in melanoma cells. (5) TRIP4 The promoter region of COX-2 directly with the combination of iNOS and the expression of further regulation of the two. (6) TRIP4 can cooperate with P300 targeting inflammatory factors regulate melanoma cell growth process. (7) in vivo and in vitro experiments show that knockdown of TRIP4 can enhance the anti melanoma effect of BRAF inhibitor (8) black. Patients with melanoma tissues, the expression of TRIP4 and COX-2 and iNOS are positively correlated, and was related to the poor prognosis of melanoma patients. Conclusion: TRIP4 has high expression levels in patients with melanoma tissues, and was related to the poor prognosis of patients. Further study found that TRIP4 co P300 targeting inflammation the process of growth factor, regulation of melanoma in addition, we also found that TRIP4 can influence melanoma targeting drug sensitivity. In summary, we present results for TRIP4 as a potential prognostic marker and therapeutic target. The basic theoretical basis is provided, and the dual targeting effect of TRIP4 and BRAF provides a possibility for the clinical strategy of melanoma treatment.

【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.5

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