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假基因BMI1P1在AML中表達研究以及假基因POU5F1B調(diào)節(jié)HCC細胞功能研究

發(fā)布時間:2018-03-08 14:26

  本文選題:基因 切入點:BMI1P1 出處:《江蘇大學》2017年碩士論文 論文類型:學位論文


【摘要】:目的:一,假基因臨床研究B細胞特異性莫尼氏鼠白血病病毒插入點1基因1(BMI1P1)是干細胞基因BMI1的假基因之一,研究假基因BMI1P1在急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中的表達態(tài)勢并探討其相關性以及臨床意義。二,假基因功能研究POU結構域5類轉錄因子1B基因(POU5F1B)是干細胞基因OCT4的假基因之一,探索POU5F1B在肝細胞癌(HCC)中的致病機制。方法:1.應用RQ-PCR方法檢測36例對照和144例初診AML患者中BMI1P1假基因的轉錄本含量,并分析其臨床相關性。2.構建POU5F1B過表達的Hep3B穩(wěn)定細胞株以及POU5F1B敲除的Hep3B細胞株,應用RQ-PCR技術檢測轉染HCC細胞中的POU5F1B表達情況。3.進行細胞生長實驗、生存實驗、平板克隆形成實驗、凋亡實驗、劃痕實驗、腫瘤球形成實驗以及耐藥實驗,觀察POU5F1B轉染細胞的增殖、生存、遷移、抗凋亡、自我更新能力以及耐藥性能力。4.運用Target Scan、Miranda、DIANA以及mi RDB靶向預測程序預測可以靶向POU5F1B的mi RNA,并運用RQ-PCR技術檢測POU5F1B轉染細胞中mi RNA的表達差異,以及運用RQ-PCR檢測OCT4、NANOG以及MYC的表達水平,另采用Western blot技術檢測POU5F1B轉染細胞中OCT4以及MYC的表達狀況。結果:1.與對照組相比,AML患者存在BMI1P1的低表達,差異有顯著統(tǒng)計學意義(P0.001)。通過接收者操作特征曲線(ROC)分析表明BMI1P1表達水平能有效鑒別AML患病組和健康對照組(AUC=0.895)。BMI1P1高表達組的原始細胞計數(shù)明顯低于低表達組(P=0.008),高表達組化療后完全緩解率較低表達組顯著增高(P=0.023)。此外,Kaplan Meier生存分析表明,在所有AML病例以及非M3型AML病例中,與BMI1P1高表達組相比,低表達組有著較低的無病生存時間(LFS,P=0.002和P=0.01)和總體生存時間(OS,P0.001和P=0.011)。多因素分析也指示了BMI1P1的過表達可以作為所有AML病例以及非M3病例的獨立的預后影響因素(P=0.019和P=0.027)。26例初診AML患者在獲得完全緩解后BMI1P1表達水平均有所升高(P0.001)。2.POU5F1B在HCC細胞中的功能研究:(1)POU5F1B-Hep3B細胞和MockHep3B兩組細胞中,POU5F1B轉染細胞的POU5F1B表達量明顯高于對照組(P0.01)。(2)POU5F1B-Hep3B細胞生長速度均明顯快于Mock-Hep3B細胞(P0.01);POU5F1B-Hep3B細胞在營養(yǎng)不良的體外環(huán)境下的體外擴增能力明顯高于對照組(P0.01);平板克隆形成實驗也證實了POU5F1B-Hep3B組細胞增殖能力明顯比對照強(P0.01);(3)POU5F1B-Hep3B細胞的遷移能力明顯高于對照組細胞(P0.01),在36h時POU5F1B-Hep3B細胞已能愈合,而對照組則沒有。(4)Mock-Hep3B細胞比POU5F1B-Hep3B細胞更易發(fā)生凋亡(P0.01)。(5)POU5F1B-Hep3B組的細胞在干細胞培養(yǎng)液中能夠聚集形成較大腫瘤球,而對照組的細胞大多散在;干細胞腫瘤球形成率在POU5F1B組明顯升高(P0.01)。(6)POU5F1B-Hep3B細胞對于化療藥阿霉素以及5-氟尿嘧啶的抵抗顯著高于對照組(P0.05);但是卻不能增加對順鉑的抵抗性。(7)在POU5F1B轉染細胞中OCT4以及MYC的表達含量均顯著高于對照組(P0.01)。(8)Target Scan,Miranda,DIANA以及mi RDB預測程序預測可以靶向POU5F1B的共同mi RNA為hsa-mi R299-3p,POU5F1B的過表達可能競爭性捕獲hsa-mi R299-3p,使OCT4逃逸與mi R-299-3p等抑癌mi RNA的結合,從而使OCT4表達的增加。結論:1.假基因BMI1P1在AML中下調(diào)。假基因BMI1P1可作為生物標志物用于檢測AML。BMI1P1可作為AML的重要預后標志物以及療效評價的重要標志物。2.構建POU5F1B-Hep3B、Mock-Hep3B、si-POU5F1B-Hep3B以及si-Mock-Hep3B細胞株;3.POU5F1B能夠在體外促進Hep3B細胞的增殖、遷移、集落形成并具有抗凋亡作用,且能夠促進腫瘤球的形成并參與耐藥;4.POU5F1B可能充當競爭性誘餌通過捕獲mi R-299-3p等抑癌的mi RNA,使OCT4逃逸這些抑癌mi RNA的綁定,而表達增加,從而促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:......
【學位授予單位】:江蘇大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2017
【分類號】:R733.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 Qing Yang;Ren-Wen Zhang;Peng-Cheng Sui;Hai-Tao He;Lei Ding;;Dysregulation of non-coding RNAs in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2015年39期

2 Miriam J Alter;;Epidemiology of hepatitis C virus infection[J];World Journal of Gastroenterology;2007年17期

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本文編號:1584273

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