發(fā)布時間：2018-03-01 01:16

  本文關(guān)鍵詞： Snail 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 鼻咽癌 侵襲遷移 Snail 鼻咽癌 放射抵抗 EGFR DNA-PKcs DNA損傷修復(fù) Snail 鼻咽癌 裸鼠皮下成瘤 放射治療 放療抵抗　出處：《華中科技大學(xué)》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分Snail對人鼻咽癌細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化特性的影響 目的：構(gòu)建Snail過表達(dá)鼻咽癌細(xì)胞系,驗證其在體外對鼻咽癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的影響。 方法：Western blot實驗檢測CNE-1、CNE-2、HNE-1細(xì)胞中Snail、E-cadherin蛋白的表達(dá)水平;利用過表達(dá)Snail的慢病毒載體轉(zhuǎn)染人鼻咽癌細(xì)胞系;Real-time PCR及Western blot檢測Snail及EMT相關(guān)蛋白表達(dá)變化；免疫熒光實驗檢測EMT標(biāo)志蛋白的細(xì)胞表達(dá)定位；細(xì)胞劃痕及Transwell實驗分別檢測細(xì)胞遷移、侵襲能力變化。 結(jié)果：人鼻咽癌低分化細(xì)胞系HNE-1及CNE-2中Snail表達(dá)量較CNE-2降低；經(jīng)Real-time PCR及Western blot實驗分別鑒定慢病毒轉(zhuǎn)染后的人鼻咽癌HNE-1和CNE-2細(xì)胞系,Snail mRNA及蛋白表達(dá)量均較空載體轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染對照組升高,Snail過表達(dá)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞系構(gòu)建成功；進(jìn)一步行Western blot實驗表明：Snail過表達(dá)組細(xì)胞E-cadherin表達(dá)下降,Vimentin、N-cadherin和MMP-2表達(dá)上升；免疫熒光實驗顯示：Snail表達(dá)上調(diào)后,細(xì)胞與細(xì)胞之間E-cadherin蛋白表達(dá)缺失,胞漿內(nèi)Vimentin蛋白表達(dá)升高；侵襲和遷移實驗顯示：上調(diào)Snail后鼻咽癌細(xì)胞侵襲和遷移能力較空載體對照組增強：差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論：特異性上調(diào)Snail表達(dá),能夠誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞獲得EMT樣特性,增加其體外遷移侵襲能力。 第二部分Snail對人鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性的影響 目的：探討上調(diào)Snail對鼻咽癌細(xì)胞系放射敏感性的作用及機制。 方法：克隆形成實驗檢測射線照射后的細(xì)胞克隆形成率,繪制劑量存活曲線,計算相關(guān)放射生物學(xué)參數(shù)；細(xì)胞凋亡實驗檢測射線照射后48h、72h的細(xì)胞凋亡率；免疫熒光實驗檢測射線照射后,細(xì)胞核內(nèi)殘留γ-H2AX熒光焦點數(shù)量；Western blot實驗分別檢測射線照射后核內(nèi)γ-H2AX、p-EGFR、p-DNA-PKcs蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果：梯度劑量射線照射后,Snail過表達(dá)組鼻咽癌細(xì)胞系克隆形成率增加,根據(jù)單擊多靶模型得出SF2、D0、Dq、N值均顯著高于其空載體對照組細(xì)胞；射線照射后48h和72h細(xì)胞凋亡率均較空載體對照組顯著下降：免疫熒光實驗提示射線照射后Snail過表達(dá)組核內(nèi)殘留γ-H2A熒光焦點數(shù)較空載體對照組減少,Western blot顯示γ-H2AX持續(xù)時間較空載體對照組縮短;Snail表達(dá)上調(diào)后,EGFR入核增加,p-EGFR、 p-DNA-PKcs表達(dá)增加,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05) 結(jié)論：上調(diào)Snail誘導(dǎo)射線照射后核內(nèi)γ-H2AX殘留時間縮短,促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞p-EGFR及p-DNA-PKcs表達(dá)增加,DNA損傷修復(fù)增加,最終誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞產(chǎn)生放射抵抗。 第三部分Snail誘導(dǎo)鼻咽癌放射抵抗的體內(nèi)研究 目的：通過體內(nèi)實驗驗證Snail誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性降低。 方法：分別建立CNE-2-Snail、CNE-2-vector裸鼠皮下移植瘤模型,在動物水平觀察移植瘤平均出瘤時間,并觀察給予10Gy射線照射后腫瘤體積變化,免疫組化實驗檢測鼻咽癌皮下移植瘤組織EMT、血管生成、凋亡等生物學(xué)特性的變化。 結(jié)果：裸鼠皮下移植瘤模型結(jié)果顯示：Snail過表達(dá)組平均出瘤時間快于空載體轉(zhuǎn)染組,成瘤體積顯著大于空載體轉(zhuǎn)染組；給予10Gy射線照射后,兩組腫瘤體積、增殖速度顯著受到抑制,其中空載體轉(zhuǎn)染組腫瘤體積無明顯增大,Snail過表達(dá)組腫瘤倍增速度減慢;免疫組化實驗提示：Snail過表達(dá)組的Snail棕色染色較空載體轉(zhuǎn)染組增加,胞內(nèi)可見Vimentin棕色染色,空載體轉(zhuǎn)染組細(xì)胞間隙可見E-cadherin棕色染色,Snail過表達(dá)組E-cadherin表達(dá)缺失。給予射線照射后各組皮下移植瘤組織內(nèi)caspase-3棕色染色均增加,空載體轉(zhuǎn)染組較Snail過表達(dá)組進(jìn)一步升高。與此同時,射線誘導(dǎo)各組VEGF表達(dá)下降,而空載體轉(zhuǎn)染組較Snail過表達(dá)組下降更為顯著。 結(jié)論：上調(diào)Snail表達(dá)水平后,鼻咽癌細(xì)胞皮下移植瘤成瘤速度加快,腫瘤組織表現(xiàn)出間質(zhì)樣細(xì)胞特性,并能進(jìn)一步誘導(dǎo)射線照射后的細(xì)胞凋亡減少,移植瘤放射敏感性降低。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.63

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本文編號：1549775