發(fā)布時(shí)間：2018-02-28 02:00

  本文關(guān)鍵詞： Lfcin B 胃癌細(xì)胞 細(xì)胞凋亡 基因表達(dá) 荷瘤鼠　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的探究乳鐵蛋白抗菌肽(LfcinB)體外對(duì)人胃癌細(xì)胞系MGC803細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期,以及體內(nèi)對(duì)移植瘤生長(zhǎng)的影響,探討其相關(guān)分子機(jī)制,為研發(fā)治療胃癌的新手段和新方法提供基礎(chǔ)。方法從體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)兩個(gè)方面來(lái)探討LfcinB對(duì)胃癌的作用及其機(jī)制。在體外實(shí)驗(yàn),用LfcinB作用于胃癌細(xì)胞系MGC803,檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡和周期的影響,同時(shí)檢測(cè)其對(duì)相關(guān)基因表達(dá)的影響。具體程序如下,1.CCK-8法測(cè)定10~(-6)~10_(-2) mg/ml不同濃度梯度的LfcinB對(duì)胃癌細(xì)胞株MGC803作用24、48和72 h后細(xì)胞增殖的影響。2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)LfcinB處理胃癌細(xì)胞系MGC803后其細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡的變化。3.RT-PCR檢測(cè)凋亡相關(guān)基因bcl-2、bax和caspase-3的m RNA變化情況。4.Western blot檢測(cè)MGC803細(xì)胞中的Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白變化。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)構(gòu)建荷人胃癌裸鼠(BALB/cAnN-nu/nu)動(dòng)物模型,實(shí)驗(yàn)程序如下,1.將MGC803細(xì)胞接種到裸鼠皮下進(jìn)行造模,并分為4組:生理鹽水組,乳鐵蛋白抗菌肽高劑量組,乳鐵蛋白抗菌肽低劑量組,順鉑對(duì)照組。根據(jù)分組將不同劑量的LfcinB腹腔注射裸鼠腹部,觀察移植瘤生長(zhǎng)情況。2.將剝離的移植瘤組織用來(lái)做免疫組化實(shí)驗(yàn),觀察凋亡相關(guān)蛋白指標(biāo)變化情況。3.用適量瘤組織做TUNEL實(shí)驗(yàn),檢測(cè)不同濃度組的凋亡情況。4.用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)組織中不同蛋白變化情況。結(jié)果體外實(shí)驗(yàn),1.不同濃度LfcinB對(duì)胃癌細(xì)胞株MGC803的增殖均具有抑制作用,但在作用24 h時(shí),抑制效果不明顯,48 h以后有抑制效果,最高抑制率可達(dá)到(30.62±0.72)%,72 h的抑制率為(42.06±0.72)%,并且與陰性對(duì)照組比較,差異具有顯著性(P0.05,P0.01)。2.LfcinB能促進(jìn)胃癌細(xì)胞株MGC803細(xì)胞凋亡,作用24 h時(shí)已能促進(jìn)細(xì)胞凋亡,但效果不明顯,其中24 h以早期凋亡為主,48 h后開(kāi)始出現(xiàn)晚期凋亡,72 h總凋亡率最高可達(dá)到(25.78±1.74)%,DDP組則主要作用細(xì)胞早期凋亡。并且具有時(shí)間和劑量依賴性(P0.05,P0.01)。3.細(xì)胞周期結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照組比較,G0/G1期細(xì)胞數(shù)量略下降,S期細(xì)胞逐漸增多,說(shuō)明LfcinB在10~(-6)~10_(-2) mg/ml濃度范圍內(nèi)均能影響胃癌細(xì)胞的周期,這可能作用于S/G2期,使細(xì)胞阻滯在S期產(chǎn)生影響,并且隨作用延長(zhǎng)呈時(shí)間濃度依賴性,但整體來(lái)看作用趨勢(shì)不明顯。4.Lfcin B能顯著抑制胃癌細(xì)胞株MGC803bcl-2基因的mRNA表達(dá),同時(shí)促進(jìn)bax和caspase-3基因的mRNA表達(dá),并且隨著LfcinB濃度的增高相關(guān)基因下降或上升越明顯(P0.05,P0.01)。5.Western blot結(jié)果也顯示,LfcinB能抑制Bcl-2蛋白表達(dá),促進(jìn)Caspase-3和Bax蛋白表達(dá),其變化規(guī)律與mRNA相同(P0.05,P0.01)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn),1.根據(jù)瘤重、瘤體積變化結(jié)果可知,不同劑量的LfcinB均能抑制移植瘤的生長(zhǎng),但高劑量LfcinB雖是低劑量濃度一倍,但抑瘤作用不是等比增長(zhǎng),而是近似相同。2.免疫組化實(shí)驗(yàn)說(shuō)明,組織中Bax、Caspase-3的蛋白在陰性對(duì)照組中幾乎不表達(dá),在高、低劑量組中表達(dá)相對(duì)較高,而B(niǎo)cl-2在對(duì)照組中表達(dá)比較多,在低劑量組中呈散在分布,在高劑量組中幾乎不表達(dá)。3.TUNEL實(shí)驗(yàn)表明,高劑量LfcinB組中細(xì)胞凋亡明顯,低劑量凋亡程度較低,凋亡指數(shù)(AI)分別為(1.84±0.39)%,(8.46±1.01)%,(11.63±1.92)%,(16.54±2.81)%。4.Western-blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果趨勢(shì)與免疫組化一致,Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)量隨劑量升高而升高,Bcl-2蛋白表達(dá)隨劑量升高而降低,與陰性對(duì)照組比較,差異具有顯著性意義(P0.05,P0.01)。結(jié)論1.LfcinB能顯著抑制MGC803胃癌細(xì)胞株的生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,作用MGC803細(xì)胞周期的S/G2期,使其阻滯在S期。2.LfcinB顯著抑制移植瘤的生長(zhǎng),并能體內(nèi)介導(dǎo)移植瘤細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Objective To investigate the effect of LfcinB ( LfcinB ) on proliferation and apoptosis of gastric cancer cell line MGC803 . The effect of LfcinB on proliferation , apoptosis and apoptosis of gastric cancer cell line MGC803 was investigated by Western blot . The results showed that LfcinB could inhibit the expression of bax and caspase - 3 genes and promote the expression of bax and caspase - 3 genes . The results of Western blot showed that LfcinB could inhibit the expression of Bcl - 2 protein and promote the expression of Caspase - 3 and Bax protein . The expression of Bax and Caspase - 3 in high - dose LfcinB group was significantly higher than that in the control group . Conclusion 1 . LfcinB can significantly inhibit the growth of MGC803 gastric cancer cell line , induce apoptosis , inhibit the S / G2 phase of MGC803 cell cycle , arrest it in S phase . 2 . LfcinB significantly inhibits the growth of transplanted tumor and can mediate the apoptosis of transplanted tumor cells in vivo .

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 吳艷玲;夏麗潔;張富春;;新疆家蠶抗菌肽誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞AGS凋亡的研究[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2015年02期

2 胡祥;;2014年第4版日本《胃癌治療指南》更新要旨[J];中國(guó)實(shí)用外科雜志;2015年01期

3 石皖榮;鄧松華;秦宜德;徐文竹;;牛乳鐵蛋白抗菌肽抗肺癌細(xì)胞增殖及其作用機(jī)制研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年08期

4 方超;張曉鞏;周穎;白卉;侯征;;抗菌肽開(kāi)發(fā)與應(yīng)用的研究進(jìn)展[J];中國(guó)抗生素雜志;2010年11期

5 唐傳核,曹勁松,彭志英;乳鐵蛋白最新研究進(jìn)展——活性多肽以及生理功能(Ⅱ)[J];中國(guó)乳品工業(yè);2000年05期

6 竇非,謝維,董雪吟,徐賢秀;抗菌肽CMIV末端結(jié)構(gòu)對(duì)其活性的影響[J];中國(guó)科學(xué)C輯:生命科學(xué);2000年01期

，

本文編號(hào)：1545271