本文關鍵詞： COL11A1 胃癌 增殖 侵襲 作用機制　出處：《浙江大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：隨著診治手段的提高,胃癌的發(fā)病率和死亡率較前有所下降,但是胃癌依然是全球尤其是我國高發(fā)的惡性腫瘤之一,目前認為胃癌的發(fā)生發(fā)展與促癌基因的活化和抑癌基因的失活相關。尋找和驗證新的促癌基因不僅可以揭示胃癌新的發(fā)病機制以確定生物學靶標干預癌變,還有助于建立新的腫瘤標記物用于早期診斷和癌變監(jiān)測。作為XI型膠原組成成分之一的COL11A1,是本實驗室課題組前期通過胃組織cDNA微陣列分析篩選到的可能與胃癌相關的促癌基因。COL11A1屬于纖維膠原基因家族的一員,對維持恰當?shù)睦w維直徑起著重要的作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)COL11A1與腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關,在細胞增殖和侵襲等生物學過程中起著重要作用,如COL11A1在卵巢癌、頭頸部鱗狀細胞癌、甲狀腺癌、結(jié)腸癌和非小細胞肺癌中異常表達。然而,目前COL11A1在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的深入研究數(shù)量相對很少,其在胃癌中的作用和機制均不明確。在本課題中,我們通過實時定量PCR檢測配對的胃癌組織和癌旁正常胃組織COL11A1 mRNA的差異表達,并分析COL11A1表達水平與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關系;同時通過體外實驗研究干擾COL11A1后對胃癌細胞生物學行為(細胞增殖、遷移、侵襲、細胞周期和凋亡)的影響;采用cDNA微陣列技術(shù)篩選COL11A1可能調(diào)控的下游基因并進行實時定量PCR驗證,初步揭示COL11A1在胃癌中可能的分子調(diào)控機制。方法和材料1.COL11A1在胃癌組織和胃癌細胞株中的表達,及其與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關系①實時定量PCR檢測57例配對的胃癌和癌旁正常胃組織COL11A1 mRNA水平;②實時定量PCR和Western Blot檢測7株胃癌細胞和1株GES-1細胞COL11A1的表達水平;③分析COL11A1 mRNA水平與胃癌患者臨床病理參數(shù)的關系。2.COL11A1對胃癌細胞生物學行為的影響①構(gòu)建穩(wěn)定干擾COL11A1的胃癌細胞株;②平板克隆形成實驗和細胞活性實驗(MTS實驗)觀察干擾COL11A1后對細胞增殖的影響;③采用流式細胞儀檢測干擾COL11A1對凋亡和細胞周期的影響,并利用Western Blot檢測COL11A1對凋亡和細胞周期相關蛋白表達的影響;④Transwell實驗研究干擾COL11A1后對遷移和侵襲的影響。3.COL11A1可能調(diào)控的下游基因的篩選和驗證①利用cDNA微陣列技術(shù)在干擾/不干擾COL11A1的胃癌細胞中篩選COL11A1可能調(diào)控的下游基因;②對其中7個可能調(diào)控的下游基因在干擾COL11A1的胃癌細胞中進行實時定量PCR驗證。研究結(jié)果1.COL11A1在胃癌組織中表達顯著升高,但只在HGC-27胃癌細胞株上高表達;COL11A1表達水平的升高與年齡、腫瘤大小、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關①實時定量PCR結(jié)果顯示:COL11A1mRNA在胃癌組織中的表達水平較配對的癌旁正常胃組織顯著升高(p0.0001,Wilcoxon配對檢驗);②與GES-1相比,HGC-27胃癌細胞明顯高表達COL11A1,而其它6株常見的胃癌細胞株(SGC-7901,BGC-823,MGC-803,AGS,MKN-28,MKN-45)明顯低表達 COL11A1;③COL11A1 mRNA表達上調(diào)與胃癌患者的年齡、腫瘤大小、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關,而與性別和分化程度無關。2.穩(wěn)定干擾COL11A1能顯著抑制HGC-27胃癌細胞增殖、促進凋亡、阻滯細胞周期和抑制細胞遷移和侵襲①成功建立起穩(wěn)定干擾COL11A1的HGC-27胃癌細胞株;②穩(wěn)定干擾COL11A1能顯著減少HGC-27的克隆形成數(shù)目和存活細胞數(shù)(p0.01);③穩(wěn)定干擾COL11A1能促進HGC-27細胞凋亡,阻滯細胞周期在G1期(p0.01);穩(wěn)定干擾COL11A1后,p21和活化片段caspase3(cleaved caspase 3)蛋白表達水平升高,cyclinD1CDK6蛋白表達水平下降;④穩(wěn)定干擾COL11A1能在顯著抑制HGC-27細胞的遷移和侵襲(p0.01)。3.篩選到并初步證實一些COL11A1可能調(diào)控的下游基因①我們通過cDNA微陣列技術(shù)篩選到一系列COL11A1可能調(diào)控的下游基因,其中614個基因上調(diào),423個基因下調(diào)。這些基因主要參與細胞增殖、細胞凋亡、細胞遷移、粘附和信號轉(zhuǎn)導等重要細胞生命活動;②穩(wěn)定干擾COL11A1的HGC-27胃癌細胞中,實時定量PCR進一步證實了 CDK6、TIAM1、ITGB8、WNT5A和XIAP的mRNA表達水平顯著明顯下降,而RGS2和NEFL的mRNA表達水平顯著升高,其結(jié)果與基因芯片的數(shù)據(jù)相吻合。研究結(jié)論1.COL11A1mRNA在胃癌組織中表達顯著上調(diào),且與胃癌患者的年齡、腫瘤大小、浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關;在HGC-27胃癌細胞株中COL11A1呈現(xiàn)高表達。2.穩(wěn)定干擾COL11A1能在體外顯著抑制HGC-27胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲3.穩(wěn)定干擾COL11A1能導致HGC-27細胞周期阻滯和促進凋亡;其機制可能與調(diào)控 cyclin D1、CDK6、p21 和 casapase 3 有關;4.COL11A1可能通過調(diào)控多個參與細胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和信號轉(zhuǎn)導等生物學過程的下游基因而影響胃癌的發(fā)生發(fā)展。
[Abstract]:COL11A1 ( COL11A1 ) is a member of the family of collagen gene in gastric cancer . Conclusion : COL11A1 can significantly inhibit the proliferation of HGC - 27 gastric cancer cells , promote apoptosis , arrest cell cycle and inhibit cell migration and invasion . 4 . COL11A1 may influence the development of gastric cancer by regulating the downstream genes involved in the biological processes of cell proliferation , apoptosis , metastasis and signal transduction .

【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

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1 代敏;任建松;李霓;李倩;楊琳;陳玉恒;;中國2008年腫瘤發(fā)病和死亡情況估計及預測[J];中華流行病學雜志;2012年01期

2 KatherineDCrew;AlfredINeugut;;Epidemiology of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2006年03期

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本文編號：1537824