發(fā)布時間：2018-02-09 09:02

  本文關鍵詞： TET1 腎癌 細胞增殖 細胞凋亡 細胞侵襲　出處：《蘇州大學》2015年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：腎癌,又稱腎細胞癌(renal cell carcinoma, RCC),是一種泌尿系統(tǒng)特有的惡性腫瘤,發(fā)病率次于膀胱癌,在泌尿系腫瘤中占據(jù)第二位。由于其不具備特異的臨床病癥狀,使得早期診斷和治療具有一定的難度。目前,RCC病例中有30%-50%屬于偶然發(fā)現(xiàn)的無癥狀患者,而且,約30%的患者在診斷時已經或將發(fā)生轉移病變。研究發(fā)現(xiàn),早期侵襲轉移是造成腫瘤預后不良的主要原因,而且,發(fā)現(xiàn)基因甲基化與腫瘤的侵襲轉移密切相關。TET1 (Ten Eleven Translocation 1)是體內一種高效催化DNA胞嘧啶的加氧酶,具有明顯的去甲基化作用,在多種腫瘤組織,如肝細胞癌、鱗狀細胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌中低表達。目前,關于TET1在RCC發(fā)病機制中作用尚不明確。因此,探討TET1在RCC侵襲轉移中的作用,對RCC的診斷、治療具有極其重要的意義。第一部分TET1在腎癌組織中的表達目的：檢測TET1在腎癌組織、癌旁組織的表達差異。方法：采用實時熒光定量PCR (Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)檢測82例腎癌患者的癌組織和癌旁組織TET1 mRNA的表達水平,同時采用免疫組化(Immunohi stochemi stry)和蛋白質印跡法(Western blot, WB)對癌組織和癌旁組織中的TET1蛋白表達水平進行檢測,對檢測結果進行對比、分析。結果：qRT-PCR結果顯示腎癌組織中TET1 mRNA的表達水平明顯低于癌旁組織(p0.05)。免疫組化與蛋白質印跡法的結果顯示,腎癌組織中TET1蛋白表達平明顯低于癌旁組織(p0.05)。結論：TET1 mRNA及蛋白表達水平在腎癌組織中均顯著下調,表明TET1可能直接或間接的參與腎癌的發(fā)生與發(fā)展。第二部分 腎癌TET1低表達在臨床中的意義目的：對比TET1在腎癌組織和癌旁組織的表達水平,并分析腎癌病理分級、臨床分期、淋巴結轉移、TET1表達與腎癌患者預后的關系。方法：對性別、年齡、分期、分級等臨床病理參數(shù)、TET1表達與術后生存進行相關性分析,采用Kaplan-Meier法對腎癌患者進行生存分析,以log rank比較生存率。p0.05或p0.01時認為具有統(tǒng)計學意義。結果：生存分析結果顯示,TET1表達越低,生存期越短。單因素及多因素分析表明,腫瘤分期、淋巴結轉移及TET1低表達導致的DNA高度甲基化與腎癌的預后有關。結論：TET1的表達水平與腎癌患者的預后密切相關。第三部分TET1對腎癌細胞功能及腫瘤進展的影響目的：通過細胞功能實驗,研究分析TET1表達與腎癌細胞功能及腫瘤進展的關系。方法：首先使用蛋白質印跡法(WB)測定腎癌細胞系ACHN和人胚腎細胞系293T中的表達水平,然后采用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法測定腎癌細胞ACHN和293T細胞的增殖能力,Transwell小室檢測腎癌細胞ACHN和293T的侵襲能力,對實驗結果進行比較分析。結果：與293T細胞相比,TET1在腎癌細胞系ACHN的表達顯著降低(p0.05)。CCK-8和Transwell小室檢測結果顯示,TET1低表達的腎癌細胞系ACHN的增殖能力和侵襲能力均顯著高于TET1高表達的293T。結論：TET1在腎癌細胞系中低表達,提示TET1可能參與腎癌的發(fā)生和發(fā)展。第四部分TET1過表達對腎癌細胞凋亡和侵襲能力的影響和可能的分子機制目的：研究分析TET1過表達對腎癌細胞凋亡和侵襲能力的影響及可能的分子機制。方法：首先轉染TET1過表達質粒于腎癌細胞ACHN,采用蛋白質印跡法(WB)檢測TET1在過表達質粒和對照質粒的腎癌細胞ACHN的表達水平,然后使用Annexin V和PI染色的方法通過流式細胞儀檢測兩種細胞的凋亡情況；Transwell法分析兩種細胞的侵襲能力,對結果進行比較分析。WB法檢測過表達TET1對Wnt信號信號通路相關蛋白表達水平的影響。結果：蛋白質印跡法顯示腎癌細胞ACHN成功表達了TET1蛋白,成功過表達TET1蛋白的腎癌細胞ACHN凋亡率增加,侵襲能力降低,Wnt相關蛋白β-catenin和C-myc等蛋白顯著下調。結論：TET1蛋白過表達能有效促進腎癌細胞的凋亡,抑制腎癌細胞侵襲,可能與Wnt信號通路的下調有關。
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【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R737.11

【參考文獻】

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