本文關(guān)鍵詞： 肝臟局灶性結(jié)節(jié)性增生 全外顯子組測(cè)序 TRPS1　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2015年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景肝臟局灶性結(jié)節(jié)性增生(Focal nodular hyperplasia, FNH)是臨床中第二高發(fā)的良性肝臟腫瘤,僅次于肝血管瘤,女性人群的發(fā)病率明顯高于男性,男/女比例在1：8-1：12,并且女性患者的年齡主要分布于30至50歲之間。大多數(shù)FNH患者無明顯臨床癥狀,相應(yīng)病灶通常是在腹部影像學(xué)篩查時(shí)偶然發(fā)現(xiàn),即使部分患者有腹痛癥狀,但其與病變本身是否有直接關(guān)系目前尚無定論。經(jīng)典FNH組織病理學(xué)特點(diǎn)為：以纖維瘢痕為中心,由呈放射狀的纖維板性隔膜分割而成的無包膜性肝細(xì)胞增生性結(jié)節(jié)。中央纖維瘢痕區(qū)通常含有管徑大小不同的異常血管以及增生膽小管。而非典型FNH約占到總病例數(shù)的20%,共同特點(diǎn)為無中央纖維瘢痕性結(jié)構(gòu),其中包含三種亞型分別為毛細(xì)血管擴(kuò)張型(Telangiectatic FNH, tFNH)、增生腺瘤混合型和非典型細(xì)胞型。FNH的病生理機(jī)制考慮是由已有的血管結(jié)構(gòu)紊亂所致的增生性改變,目前認(rèn)為其本身并無潛在惡變風(fēng)險(xiǎn)。分子生物學(xué)方面的研究認(rèn)為100%典型FNH具有多克隆性,75-100% tFNH與100%肝細(xì)胞腺瘤具有單克隆性。臨床上,非典型FNH與肝細(xì)胞腺瘤、纖維板層狀肝細(xì)胞肝癌較難鑒別。二代測(cè)序技術(shù)是新一代高通量測(cè)序技術(shù),具有高靈敏度、高測(cè)序效率、相對(duì)低成本的優(yōu)勢(shì)。全外顯子組測(cè)序基于二代測(cè)序技術(shù)平臺(tái),可以全面篩查具有編碼蛋白功能的全外顯子組內(nèi)的突變情況,對(duì)腫瘤學(xué)研究有重要的突破作用。實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^全外顯子測(cè)序技術(shù),對(duì)FNH病變的全外顯子組進(jìn)行全面篩查,期望可以發(fā)現(xiàn)特異的突變,對(duì)FNH的病因、病生理機(jī)制、生物學(xué)特性或者與其他肝臟病變的鑒別中有一定提示作用。FNH雖為第二高發(fā)的肝臟良性腫瘤,但其發(fā)病率仍相對(duì)較低。少見腫瘤中可能會(huì)發(fā)現(xiàn)特異的基因突變。以少見腫瘤的特異突變?yōu)榍腥朦c(diǎn),研究特異基因的功能,進(jìn)而推廣到其他腫瘤中驗(yàn)證該基因在腫瘤發(fā)生機(jī)制中的作用,期望對(duì)腫瘤學(xué)機(jī)制研究能有一定的提示作用。實(shí)驗(yàn)材料和方法1.病例收集2011年至2014年由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院腹部肝膽外科手術(shù)切除肝臟局灶病變,術(shù)后病理診斷為FNH的病例5例。收集相應(yīng)腫瘤組織標(biāo)本及對(duì)照全血標(biāo)本。2.全外顯子組測(cè)序?qū)嶒?yàn)根據(jù)全外顯子組測(cè)序的規(guī)范流程,完成gDNA提取、配對(duì)驗(yàn)證、建立DNA文庫(kù)、外顯子富集、上級(jí)測(cè)序、生物信息學(xué)分析的實(shí)驗(yàn)步驟。3.數(shù)據(jù)分析通過復(fù)習(xí)文獻(xiàn),根據(jù)生物學(xué)功能、突變頻率等因素進(jìn)一步總結(jié)選出感興趣的候選基因。4.驗(yàn)證對(duì)候選基因進(jìn)行PCR/Sanger驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果全外顯子組測(cè)序生物信息分析結(jié)果顯示5例FNH標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)158個(gè)突變,選出4個(gè)候選基因：ARID2、EGFR、TRPS1、DAXX,其中TRPS1在2例標(biāo)本中檢測(cè)到2個(gè)不同突變。對(duì)這5個(gè)突變進(jìn)行了PCR/Sanger驗(yàn)證,得到了其中4個(gè)突變的陽(yáng)性驗(yàn)證結(jié)果,包括ARID2基因14號(hào)外顯子的錯(cuò)義突變、EGFR基因6號(hào)外顯子的移碼突變、TRPS1基因3號(hào)外顯子的錯(cuò)義突變及其5號(hào)外顯子的終止密碼子獲得突變。結(jié)論TRPS1基因在2例標(biāo)本中均發(fā)現(xiàn)突變,突變頻率較高,與FNH發(fā)病機(jī)制相關(guān)可能性大。相關(guān)研究提示TRPS1基因的表達(dá)具有抗纖維化的作用,而典型FNH的主要病理表現(xiàn)是中央纖維瘢痕,兩者之間可能存在相關(guān)性,需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量以及相關(guān)功能學(xué)研究進(jìn)行作證。
[Abstract]:Background : Focal nodular hyperplasia ( FNH ) is a benign liver tumor with high sensitivity , high sequencing efficiency and low cost . The results of PCR / Sanger analysis showed that there were 158 mutations in 5 cases of FNH , 4 candidate genes were identified as AR2 , EGFR , TRl and DAXX .

【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1492060