本文關鍵詞： RhoGDI2 膀胱癌 信號通路 生物信息學　出處：《廣西醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:分析RhoGDI2基因對膀胱癌轉移、預后的影響,探索研究其參與調(diào)控的下游通路。方法:1.制作膀胱癌組織芯片,免疫組織化學法檢測組織芯片中RhoGDI2蛋白表達情況,分析其與膀胱癌病理、預后的相關性。2.從美國癌組基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)數(shù)據(jù)庫下載膀胱癌全基因組表達譜數(shù)據(jù)集合及患者臨床信息資料,分析RhoGDI2基因的表達與膀胱癌患者臨床病理、預后的相關性,再運用TCGA數(shù)據(jù)庫膀胱癌全基因表達譜及DAVID(The Database for Annotation,Visualization and Integrated Discovery,DAVID)在線工具富集RhoGDI2相關下游信號通路。3.利用慢病毒轉染技術構建立RhoGDI2正負表達細胞系,Western blotting驗證所富集RhoGDI2下游通路可能性。4.Western blotting驗證臨床18例膀胱癌組織中RhoGDI2表達與富集信號通路的節(jié)點蛋白相關性�？偣矙z測相關指標有16個:RhoGDI2、Cdc42、Rac123、Phosphor-Rac1/cdc42(ser71)、RhoA、Rho B、RhoC、Raf1、Ras、Rock2、MEK1/2、Erk1、Vav2、Vav3、MLC2、P-MLC2(s19)。結果:1.膀胱癌組織芯片分析結果:AJCC pTNM分期中T2~T3分期、T1-2~T3-4期、病理分級、轉移與RhoGDI2的表達存在顯著負相關(P0.05),預后則與RhoGDI2的表達存在顯著正相關(RhoGDI2高表達組中位生存時間5年生存率均明顯長于/高于低表達組,P0.05)。2.tcga數(shù)據(jù)分析結果:rhogdi2的表達在ajccptnm分期的t2-t3期、臨床分期的ii~iii期與分期呈負相關,在t3~t4期與分期顯著正相關(p0.05),與病理分級呈明顯負相關(p0.05),與肌層侵潤、轉移無明顯相關(p0.05)。預后則與rhogdi2的表達存在顯著正相關(rhogdi2高表達組中位生存時間、中位無瘤生存時間、3年生存率、5年生存率、3年無瘤生存率、5年無瘤生存率均明顯長于/高于低表達組,p0.05)。從tcga數(shù)據(jù)庫膀胱癌全基因表達譜中篩查出與rhogdi2相關差異表達基因5960個。納入david在線工具后富集出與rhogdi2相關信號通路共105條,其中涉及cdc42、rhoa、rac的有9條,其所含基因與rhogdi2的表達正向相關。另外,涉及ras基因的通路有18條,其所含基因與rhogdi2基因的表達存在負向關系。3.體外細胞westernblotting驗證rhogdi2調(diào)控通路,rhogdi2、cdc42、rac123、rhoa、ras、mlc2在t24-rhogdi2細胞中顯著高于對照組,而在t24-rhogdi2-rnai中明顯低于對照組(p0.05)。rock2、erk1、vav2、vav3僅在t24-rhogdi2-rnai細胞系中表達顯著降低(p0.05),mek1/2、p-mlc2則僅在t24-rhogdi2組中明顯降低(p0.05)。rhoc在t24-rhogdi2-rnai和t24-rhogdi2中表達都顯著高于對照組(p0.05),phosphor-rac1/cdc42(ser71)、rhob、raf1則在5種細胞系中無明顯表達。4.膀胱癌組織標本westernblotting驗證rhogdi2調(diào)控通路:(1)癌組中,cdc42、rac123、rhoa、ras、erk1、vav2、mlc2和rhogdi2的表達在spearmon相關分析中都呈顯著正相關(p0.05),而mek1/2、p-mlc2的表達情況則與上述指標相反,rock2與rhogdi2不存在明顯相關性(p0.05)。(2)正常組中各相關指標在rhogdi2高低表達組間也無明顯差異(p0.05)。(3)rhogdi2、rhoa在癌組的表達顯著低于正常組(p0.05),rock2、ras、mek1/2、Erk1、Vav2、MLC2、P-MlC2則是癌組的表達明顯上調(diào)(P0.05)。Rac123、Cdc42在癌組和正常組中表達無明顯差異(P0.05)。(4)RhoGDI2低表達組中癌組RhoGDI2、Cdc42、Rac123、RhoA的表達明顯低于正常組(P0.05),而MEK1/2則明顯高于(P0.05)。RhoGDI2高表達組中癌組Cdc42、Ras的表達相對于正常組表達明顯上調(diào)(P0.05),在癌組中Rock2、Erk1、Vav2、MLC2、P-MLC2無論在RhOGDI2高表達還是低表達組均相對于正常組表達上調(diào)(P0.05)。結論:1.RhoGDI2是膀胱癌病理分期、臨床分期、病理分級、轉移及預后的相關因素。2.Rho GDI2基因可通過調(diào)節(jié)RhoGTP酶間接對其下游信號通路:Vav-RhoA-ROCK-MLC和Ras-MEK-Erk起到主要的調(diào)節(jié)作用,最終發(fā)揮抑制膀胱癌發(fā)展及改善預后的生物學效應,所以該基因及其下游通路或可成為膀胱癌靶向治療的新型靶向位點。
[Abstract]:Objective : To investigate the effect of RhoGDI2 gene on the metastasis and prognosis of bladder cancer . The results showed that the expression of rhogdi2 was significantly correlated with stage ( P < 0.05 ) . The results showed that the expression of rhogdi2 was significantly correlated with stage ( P < 0.05 ) . The survival time , survival time , 3 - year survival rate , 5 - year survival rate , 3 - year tumor - free survival rate and 5 - year tumor - free survival rate of rhogdi2 were significantly longer than that of low - expression group ( p < 0.05 ) . 3 . The expression of rhogdi2 , cdc42 , rac123 , rhoa , ras and mlc2 was significantly lower in t24 - rhogdi2 - rnai than in the control group ( p . 05 ) . ( 4 ) The expression of RhoGDI2 , Cdc42 , Rac123 and RhoA in the cancer group was significantly higher than that in the normal group ( P0.05 ) .

【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R737.14

【參考文獻】

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本文編號：1470543