本文關鍵詞：殼寡糖減輕幽門螺桿菌對胃癌AGS細胞的誘導凋亡作用　出處：《青島大學》2015年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：研究目的:觀察殼寡糖(Chitooligosaccharide,COS)體外抑制幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,HP)增殖的活性,觀察殼寡糖對AGS細胞和HP感染的AGS細胞的誘導凋亡的作用,探討殼寡糖在治療HP感染及治療胃癌中的潛在應用價值。實驗方法:1.培養(yǎng)HP菌株并傳代。37℃微需氧環(huán)境中培養(yǎng)48h后,向BHI培養(yǎng)基表面滴加100u L COS溶液,對照組不做處理,繼續(xù)培養(yǎng)48h,肉眼及顯微鏡下觀察兩組HP菌落形成情況。制備含殼寡糖培養(yǎng)基,HP傳代培養(yǎng)48h,觀察細菌菌落狀態(tài)。2.觀察殼寡糖減輕HP對AGS細胞的誘導凋亡作用:細胞共分2組進行:AGS細胞組和HP感染的AGS細胞。按照感染復數(shù)MOI=200建立HP感染AGS細胞的模型。分別向兩組細胞中分別加入按比例0.5:100、1:100、2:100、4:100稀釋的COS原液,37℃,5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后固定細胞,10ug/ml Hoechst33258工作液染色,熒光顯微鏡下觀察AGS細胞的凋亡情況和細胞核的形態(tài)學改變。3.向AGS細胞中加入按比例稀釋的殼寡糖與100mol/L,200mol/L,300mol/L和400mol/LBi Cl3混合溶液,37℃,5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后固定細胞,Hoechst33258染色,熒光顯微鏡下觀察AGS細胞的凋亡情況和細胞核的形態(tài)學改變。實驗結(jié)果:1.肉眼觀,對照組細菌形成良好的無色透明的菌落形成,布滿培養(yǎng)皿表面的接種區(qū)域,加入殼寡糖的區(qū)域細菌菌落明顯稀少,散在分布;顯微鏡下觀察,與未加殼寡糖的區(qū)域相比,加入殼寡糖區(qū)域內(nèi)的菌落明顯稀少。2.我們通過Hoechst33258染色熒光染色觀察AGS細胞凋亡情況。結(jié)果顯示:(1)AGS細胞組:與對照組相比,隨著殼寡糖濃度的增加,細胞核呈均勻藍色的細胞比例明顯降低,而呈亮藍色顆粒塊狀熒光及核形態(tài)異常的細胞比例明顯上升,表明殼寡糖具有誘導AGS細胞凋亡的作用,其強度具有濃度依賴性。(2)感染HP的AGS組:HP感染的AGS細胞存在一定的凋亡現(xiàn)象,與其相比,加入低濃度的殼寡糖亮藍色顆粒塊狀熒光及核形態(tài)異常的細胞比例下降,繼續(xù)增加殼寡糖濃度,亮藍色熒光的比例上升,這表明在較低的濃度殼寡糖減弱HP對AGS細胞的誘導凋亡作用。(3)觀察Bi3+與殼寡糖聯(lián)合對AGS細胞凋亡的影響,我們發(fā)現(xiàn)Bi3+與殼寡糖聯(lián)合,其高亮染色的比例比單獨使用殼寡糖或的比例更高,即二者聯(lián)合比殼寡糖或Bi3+單獨具有更強的誘導AGS細胞凋亡作用。結(jié)論:1.殼寡糖具有一定的體外抑制HP增殖活性。2.殼寡糖具有誘導AGS細胞凋亡的作用,強度呈濃度依賴性,Bi3+可增強殼寡糖的促凋亡作用。3.殼寡糖在一定濃度可以減輕HP對AGS細胞促凋亡作用,即對HP感染的AGS細胞具有保護作用。
[Abstract]:Objective: To observe the chitosan oligosaccharide (Chitooligosaccharide, COS) in vitro inhibition of Helicobacter pylori (Helicobacter pylori HP) to observe the activity of proliferation, apoptosis induced by oligochitosan on AGS cells and HP AGS cells infected with the role of the potential application of chitosan oligosaccharide in the treatment of patients with HP infection and gastric carcinoma. Methods: 1. HP and 48h were cultured strains cultured.37 C micro aerobic environment, the surface of the medium adding 100u L COS solution to BHI, the control group without treatment, cultured 48h, two groups were observed under microscope and naked eye HP colony formation. The preparation of chitosan oligosaccharide containing culture medium, HP culture 48h, observe the bacteria.2. observation of chitosan reduced colony apoptosis inducing effect of HP on AGS cells: the cells were divided into 2 groups: AGS cell group and HP infected AGS cells. In accordance with the establishment of HP infected AGS cells model m.o.i.of MOI=200 respectively to two groups of cells. Were added by COS solution, the proportion of 0.5:100,1:100,2:100,4:100 diluted 37 DEG 5%CO2 saturated humidity in cultured 24h cells after fixed box, 10ug/ml Hoechst33258 staining and morphological observation of AGS cells apoptosis and cell under fluorescent microscope.3. adding chitosan oligosaccharide and 100mol/L, according to the proportion to AGS cells in 200mol/L, 300mol/L 400mol/LBi and Cl3 mixed solution, 37 DEG C, 5%CO2 saturated humidity in cultured 24h fixed cells, Hoechst33258 staining in the box, change the fluorescence microscope and the apoptosis of AGS cell and cell nuclear morphology. Results: 1. eye view group of bacteria to form a good transparent colony forming control, with cultured regional dishes the surface area of bacterial colonies adding chitosan oligosaccharide was scarce and scattered; under the microscope, compared with not added oligosaccharide, plus In the area of the colony of oligochitosan was rare.2. we stained by Hoechst33258 fluorescent staining observation the apoptosis of AGS cells. The results showed: (1) AGS group: compared with the control group, with the increase of chitosan concentration, the nuclei were uniform blue cell ratio was significantly lower, and have bright blue fluorescence and massive nuclear particles abnormal cell morphology ratio significantly increased, showed that the chitosan oligosaccharide has induced AGS cell apoptosis, its strength is concentration dependent. (2) AGS group HP infection: HP infected AGS cells apoptosis phenomenon, some contrast, adding chitosan oligosaccharide with low concentration of bright blue particulate fluorescence and nuclear morphological abnormalities the proportion of cells decreased, continue to increase the concentration of chitosan, the bright blue fluorescence ratio rise, suggesting that weakened the effect of apoptosis induced by HP on AGS cells in the lower concentration of chitosan oligosaccharide. (3) observation of Bi3+ and chitooligosaccharides it The effects on the apoptosis of AGS cells, we found that the combination of Bi3+ and chitosan, the bright staining proportion is higher than the single use of chitosan oligosaccharide and the proportion of the two combined ratio of chitosan or Bi3+ alone has a stronger effect induced apoptosis in AGS cells. Conclusion: 1. chitosan oligosaccharide has certain inhibition on proliferation of HP.2. chitosan oligosaccharide has induced AGS cell apoptosis, the intensity in a concentration dependent manner, Bi3+ can enhance the apoptosis inducing effect of.3. chitosan chitosan oligosaccharide in a certain concentration can reduce the HP induced apoptosis of AGS cells, which has protective effect on HP infected AGS cells.

【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

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本文編號：1396264