本文關鍵詞：全人源抗Her2單克隆抗體的制備及其在乳腺癌細胞熒光標記中的應用　出處：《吉林大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：熒光單分子腫瘤標記技術主要針對腫瘤細胞的特定靶點,利用高特異性的抗體分子與非生物毒性的熒光聚合物量子點相偶聯(lián),組裝成具有特異性靶向特定腫瘤細胞的免疫熒光標記物。可以及時、準確的發(fā)現(xiàn)腫瘤,確定相關靶點的有效性。單分子腫瘤標記已經(jīng)成為了繼分子靶向藥物后的另一研究熱點。人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor2,Her2)是表皮生長因子受體家族的一員,研究表明其過表達會影響細胞生長、發(fā)育和分化,對多種腫瘤細胞的擴增和轉(zhuǎn)化起到關鍵作用。尤其在乳腺癌中,超過1/3的患者過表達Her2,因此,Her2是乳腺癌診斷和治療的一個重要靶點。目前,針對Her2開發(fā)出來的單克隆抗體已經(jīng)在乳腺癌疾病的診斷和治療中發(fā)揮了重要作用,但在臨床腫瘤標記研究中多使用鼠源抗體或人源化抗體,這類抗體在人體內(nèi)依然存在著人抗鼠抗體反應(HAMA)的風險。利用抗體工程技術開發(fā)高親和性的全人源單克隆抗體,將會克服這方面的問題。本研究以Her2作為靶點,從大容量噬菌體展示全人源Fab抗體庫中,利用固定偶聯(lián)的Her2抗原,經(jīng)過4輪篩選,獲得一株有高抗原結合能力的噬菌體克隆。經(jīng)表達得到Fab和Ig G1抗體蛋白,ELISA分析發(fā)現(xiàn)這兩種抗體可以特異結合Her2蛋白。SPR實驗結果表明,這兩種抗體對Her2抗原的親和力分別為15n M和1.01n M,表明該抗體具有高抗原親和力。流式細胞技術分析也證明抗體可以特異性的識別高表達Her2乳腺癌細胞SK-BR3(Her2+),而不結合MCF-7細胞(Her2-)。通過對該Ig G1抗體進行疊氮標記修飾,與一個新型高穩(wěn)定性熒光聚合物量子點(Pdots)上的DBCO官能團進行點擊化學連接,制備出可以特異性靶向結合乳腺癌細胞的免疫熒光標記物,并利用共聚焦顯微技術針對SK-BR3乳腺癌細胞進行單分子乳腺癌細胞標記學研究,發(fā)現(xiàn)其可以特異性的識別SK-BR3,并對細胞進行熒光標記。綜上所述,本論文篩選得到一株高親和性識別人Her2的全人源單克隆抗體,可以特異性的識別Her2+乳腺癌細胞,此抗體與Pdots偶聯(lián)之后,可以特異性結合乳腺癌細胞并實現(xiàn)對細胞的熒光標記。
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【參考文獻】

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本文編號：1330307