本文關(guān)鍵詞：TACC3表達對膀胱尿路上皮癌T24細胞系遷移和侵襲的影響　出處：《天津醫(yī)科大學》2016年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的:檢測轉(zhuǎn)錄相關(guān)酸性卷曲蛋白3(TACC3)在膀胱尿路上皮癌T24細胞系中的表達情況,同時探討下調(diào)TACC3表達水平通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的發(fā)生對膀胱癌T24細胞遷移和侵襲的影響。方法:采用Western blot方法檢測膀胱尿路上皮癌T24細胞系和膀胱上皮永生化細胞SV-HUC-1細胞系TACC3蛋白的表達情況;通過體外構(gòu)建shRNA表達載體并通過qPCR篩選有效靶點,用TACC3-shRNA相關(guān)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染膀胱癌T24細胞系來下調(diào)TACC3水平;采用Western Blot和熒光定量PCR技術(shù)驗證干擾效果,同時檢測TACC3和EMT相關(guān)mRNA和蛋白的表達水平,細胞劃痕試驗計算細胞24h修復(fù)率,Transwell侵襲試驗檢測細胞侵襲情況。結(jié)果:在膀胱尿路上皮癌T24細胞系及膀胱上皮永生化細胞SV-HUC-1細胞系兩組細胞系中,Western Blot結(jié)果表明TACC3蛋白相對灰度值分別為:0.22±0.02、0.99±0.05。膀胱癌T24細胞系中TACC3蛋白的表達量明顯高于膀胱上皮永生化細胞SV-HUC-1細胞系,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。體外構(gòu)建4個TACC3-shRNA干擾質(zhì)粒,qPCR檢測并篩選TACC3的mRNA表達,獲得了對TACC3干擾效率達到90.5%的pYr-LVX-TACC3-shRNA質(zhì)粒;下調(diào)TACC3水平后,熒光定量PCR技術(shù)檢測TACC3和EMT相關(guān)(E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9)的mRNA變化情況,結(jié)果示:EMT相關(guān)指標(E-cadherin、Vimentin、Twist、Snail、MMP-9)的相對mRNA表達量分別為1.11±0.13、0.26±0.04、0.38±0.06、1.11±0.04、0.41±0.03,相應(yīng)地采用WB方法驗證以上Maker的表達變化情況,我們所得到的驗證結(jié)論就是TACC3和EMT相關(guān)(E-cadherin、Twist、Vimentin、Snail、MMP-9)蛋白的相對灰度值分別為1.08±0.06、0.17±0.04、0.07±0.01、0.14±0.01、0.35±0.13。細胞劃痕試驗檢測膀胱T24細胞24h修復(fù)率,結(jié)果示TACC3-shRNA可抑制T24細胞的遷移達(25.50±0.9609)%(24h);Transwell侵襲試驗檢測膀胱T24細胞的侵襲程度變化,結(jié)果示光鏡下平均視野下control組、NC組及shRNA組的平均侵襲細胞數(shù)分別為326.8±14.09、311.3±8.664及143.3±10.62,差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:TACC3在膀胱尿路上皮癌T24細胞系中高表達,體外實驗證實通過誘導(dǎo)膀胱癌T24細胞的EMT的發(fā)生,導(dǎo)入構(gòu)建的干擾效率為90.5%的pYr-LVX-TACC3-shRNA質(zhì)粒,下調(diào)TACC3的表達后,膀胱癌T24細胞的遷移和侵襲能力下降。提示TACC3可能通過調(diào)節(jié)EMT的發(fā)生來抑制膀胱癌的遷移和侵襲能力,這在膀胱尿路上皮癌中發(fā)揮不可或缺的內(nèi)在作用。并有可能成為膀胱癌基因靶向治療的重要指標,同時為膀胱癌的新療法提供新思路。
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.14

【參考文獻】

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1 范瓊;鮑偉;楊婷婷;劉小奕;吳丹;;Twist、E-cadherin、N-cadherin在宮頸鱗癌中的表達及意義[J];上海交通大學學報(醫(yī)學版);2012年06期

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本文編號：1325858