本文關鍵詞：沉默PRSS1對胃癌MGC803細胞遷移侵襲的影響

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【摘要】：[目的]通過沉默PRSS1基因的表達,觀察對胃癌MGC803細胞遷移侵襲的影響,探討PRSS1影響胃癌細胞增殖、遷移侵襲的分子機制。[方法]1.采用免疫組織化學染色結合組織芯片(含正常胃粘膜、癌旁、高分化、中分化、低分化胃腺癌及淋巴結轉(zhuǎn)移癌組織)檢測胃癌組織中PRSS1蛋白的表達,并分析其表達的意義。2.利用si RNA干擾技術,構建pc DNA6.2?-GW/Em GFP-mi Ri-PRSS1干擾質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染MGC803細胞,經(jīng)殺稻瘟菌素Blasticidin S HCl篩選,建立PRSS1穩(wěn)定低表達的MGC803/mi Ri-PRSS1細胞系。利用RT-PCR和Western blot檢測MGC803/mi Ri-PRSS1細胞中PRSS1 m RNA和蛋白的表達。3.運用MTT法、平皿克隆形成實驗、劃痕愈合實驗、Transwell遷移侵襲實驗和流式細胞術檢測PRSS1低表達對MGC803細胞增殖、細胞周期和遷移侵襲的影響。[結果]1.免疫組織化學染色結果顯示:高分化、中分化、低分化胃腺癌組織及淋巴結轉(zhuǎn)移癌組織中,PRSS1蛋白表達較正常胃粘膜組織、癌旁組織表達增加,且癌旁組織中的表達強于正常胃粘膜組織。2.構建pc DNA6.2?-GW/Em GFP-mi Ri-PRSS1干擾質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染MGC803細胞,篩選后建立PRSS1穩(wěn)定低表達的MGC803/mi Ri-PRSS1細胞系。RT-PCR和Western blot檢測結果顯示,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞中PRSS1 m RNA和蛋白表達量較空白組和載體對照組中m RNA和蛋白表達量均降低(P0.05)。3.PRSS1低表達對MGC803細胞增殖的影響:1)MTT結果顯示,空白組MGC803細胞的增殖率為0.814±0.003,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞的增殖率為0.501±0.002,載體對照組MGC803/mi Ri細胞的增殖率為0.791±0.002�？瞻捉MMGC803細胞增殖率明顯高于干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞(P0.05),表明PRSS1低表達后MGC803細胞的增殖活性降低(P0.05)。2)平皿克隆形成實驗顯示,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞的克隆數(shù)為23±2個,空白組MGC803細胞和載體對照組MGC803/mi Ri細胞的克隆數(shù)分別為98±5個和89±3個,分別較干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞多75±3個和66±4個(P0.05),表明PRSS1低表達后MGC803細胞集落形成能力減弱(P0.05)。4.PRSS1低表達對MGC803細胞遷移侵襲的影響:1)劃痕愈合實驗顯示,劃痕24h小時末空白組MGC803細胞的遷移距離為188±8um,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞和載體對照組MGC803/mi Ri細胞的遷移距離分別為105±3um和179±6um�？瞻捉MMGC803細胞和載體對照組MGC803/mi Ri細胞遷移距離分別較干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞多83±5um和74±3um(P0.05),表明PRSS1低表達后MGC803細胞遷移能力減弱(P0.05)。2)Transwell遷移實驗顯示,空白組MGC803細胞遷移數(shù)為267±36個,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞遷移數(shù)為60±8個,載體對照組MGC803/mi Ri細胞遷移數(shù)為245±32個。與空白組MGC803和載體對照組MGC803/mi Ri細胞比較,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞遷移數(shù)分別少207±28個和185±24個(P0.05),表明PRSS1低表達后MGC803細胞遷移能力降低(P0.05)。3)Transwell侵襲實驗顯示,空白組MGC803細胞和載體對照組MGC803/mi Ri細胞的穿膜細胞數(shù)分別為48±8個和40±7個,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞穿膜細胞數(shù)為15±4個。空白組MGC803細胞和載體對照組MGC803/mi Ri細胞分別與干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞比較,其穿膜細胞數(shù)分別多33±4個和25±3個(P0.05),表明PRSS1低表達后MGC803細胞侵襲能力降低(P0.05)。5.PRSS1低表達對MGC803細胞周期的影響:流式細胞術顯示,與空白組MGC803細胞和載體對照組MGC803/mi Ri細胞比較,干擾組MGC803/mi Ri-PRSS1細胞G0/G1期比率增加,而S期比率則降低(P0.05),表明PRSS1低表達后MGC803細胞的發(fā)生周期阻滯。[結論]1.PRSS1蛋白在胃癌組織中高表達,與胃癌的分化程度、淋巴結轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關。2.沉默PRSS1表達MGC803細胞的增殖與遷移侵襲能力降低。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Dong Yi Kim;Jae Kyoon Joo;Seong Yeob Ryu;Young Jin Kim;Shin Kon Kim;;Factors related to lymph node metastasis and surgical strategy used to treat early gastric carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2004年05期

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本文編號：1284054