本文關(guān)鍵詞：GKN2在胃癌中的表達(dá)及對(duì)MKN28細(xì)胞的抑制作用

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【摘要】：[目的]GKN2(Gastrokin 2,胃動(dòng)蛋白2)在正常胃組織中特異表達(dá),而在胃癌中表達(dá)下降或缺失,被認(rèn)為可能發(fā)揮著抑癌基因的作用,GKN2常常與另一個(gè)分泌蛋白TFF1(Trefoil factor1)形成異質(zhì)二聚體,在正常胃部發(fā)揮保護(hù)胃上皮內(nèi)穩(wěn)態(tài)的作用。本研究首先檢測(cè)胃癌、癌旁組織以及胃癌遠(yuǎn)端胃粘膜組織中GKN2和TFF1蛋白的表達(dá),并分析GKN2和TFF1在胃癌表達(dá)中的相關(guān)性;接著觀察GKN2高表達(dá)對(duì)MKN28細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,以初步闡明GKN2作為抑癌基因的作用,為其用于胃癌的臨床預(yù)防和治療提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]我們首先運(yùn)用組織芯片和免疫組化SP法中檢測(cè)胃癌遠(yuǎn)端胃粘膜、癌旁組織和胃癌中GKN2和TFF1蛋白的表達(dá)情況,分析其臨床病理意義。其次,將構(gòu)建好的GKN2基因真核表達(dá)載體(Xhol_GKN3SP-h GKN2-TEV-SBP_Xhol),轉(zhuǎn)染人胃癌MKN28細(xì)胞,G418篩選,建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株,q RT-PCR和Western Blot驗(yàn)證GKN2在MKN28細(xì)胞中表達(dá)。采用MTT法分析GKN2高表達(dá)對(duì)MKN28細(xì)胞增殖的影響,Transwell遷移實(shí)驗(yàn)和侵襲實(shí)驗(yàn)分析GKN2高表達(dá)對(duì)MKN28細(xì)胞遷移和侵襲的影響。[結(jié)果]組織芯片和免疫組化結(jié)果發(fā)現(xiàn),GKN2在胃癌遠(yuǎn)端胃粘膜、癌旁胃組織和胃癌組織中的表達(dá)率分別為83.36%(19/22)、43.75%(21/48)和6.67%(6/90),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);TFF1在胃癌遠(yuǎn)端胃粘膜和癌旁胃組織的表達(dá)率分別為81.82%(18/22)、62.50%(30/48),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而胃癌組織中的表達(dá)率21.11%(19/90),明顯低于胃癌遠(yuǎn)端胃粘膜和癌旁胃組織(P0.05)。以上結(jié)果提示胃癌組織中GKN2、TFF1表達(dá)均明顯下調(diào),但相關(guān)性分析結(jié)果顯示胃癌組織中GKN2、TFF1表達(dá)沒(méi)有相關(guān)性(P0.05)。我們將Xhol_GKN3SP-h GKN2-TEV-SBP_Xhol表達(dá)載體轉(zhuǎn)染MKN28細(xì)胞,建立了GKN2高表達(dá)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染MKN28細(xì)胞株。Western blot結(jié)果顯示,GKN2轉(zhuǎn)染組GKN2蛋白表達(dá)(0.91±0.03)較未轉(zhuǎn)染組(0.17±0.01)和空載體組(0.20±0.01)明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果同樣顯示,轉(zhuǎn)染組MKN28細(xì)胞中GKN2的m RNA表達(dá)(1.00±0.01)明顯高于未轉(zhuǎn)染組(0.62±0.02)和空載體組(0.64±0.02)(P0.05),提示轉(zhuǎn)染成功。MTT結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染GKN2的人胃癌MKN28細(xì)胞,其在培養(yǎng)24h后的OD570值為(0.15±0.02),明顯低于未轉(zhuǎn)染組(0.24±0.03)和空載體組(0.25±0.03)(P0.05),培養(yǎng)48h、72h后也是一樣的變化,提示GKN2可抑制人胃癌MKN28細(xì)胞增殖。Transwell遷移實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),GKN2轉(zhuǎn)染組穿過(guò)膜的細(xì)胞數(shù)(26±5)相比未轉(zhuǎn)染組(110±4)及空載體組(109±7)明顯減少(P0.05);Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)顯示,GKN2轉(zhuǎn)染組穿過(guò)基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)(28±4)少于未轉(zhuǎn)染組(67±5)及空載體組(66±7)(P0.05),以上結(jié)果證明GKN2高表達(dá)可抑制MKN28細(xì)胞的遷移和侵襲能力。[結(jié)論]1.GKN2、TFF1在胃癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁胃組織和胃癌遠(yuǎn)端胃粘膜,說(shuō)明GKN2、TFF1蛋白表達(dá)水平下調(diào)與胃癌的發(fā)生相關(guān);2.GKN2高表達(dá)可抑制人胃癌MKN28細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.2

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1 劉姣;GKN2在胃癌中的表達(dá)及對(duì)MKN28細(xì)胞的抑制作用[D];南華大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：1260604