發(fā)布時間：2017-12-06 19:28

  本文關鍵詞：小分子化合物MLN4924靶向NEDD8活化酶（NAE）抑制非小細胞肺癌增殖的研究

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【摘要】：背景和目的NEDD8是一種類泛素樣蛋白,與泛素化途徑相似,在細胞生理過程中主要參與穩(wěn)定蛋白、調(diào)節(jié)底物蛋白活性以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等功能[4,6,71。研究證實,抑制NEDD8通路將是一個新的抗腫瘤的方法和途徑。MLN4924是一種有效的、選擇性的NEDD8活化酶的小分子抑制劑,能夠與NEDD8活化酶(NAE)結(jié)合形成NAE-MLN4924復合物,抑制NEDD8活化酶活性,控制部分依賴于CRL酶的泛素化途徑,影響相關蛋白質(zhì)的降解。研究發(fā)現(xiàn),NAE有望成為研發(fā)抗腫瘤藥物的新靶點,MLN4924作為NAE的抑制劑具有成為新型抗腫瘤藥物的希望。本研究以非小細胞肺癌細胞為研究模型,觀察MLN4924對細胞生長的抑制作用,分析MLN4924干預后非小細胞肺癌細胞的增殖活性、周期分布和周期調(diào)控蛋白的表達,探討MLN4924對細胞增殖相關信號通路的調(diào)控,明確MLN4924抑制非小細胞肺癌細胞增殖的分子機制。實驗方法體外培養(yǎng)入非小細胞肺癌H1975細胞,MTT實驗分析不同濃度MLN4924作用細胞24、48和72h對其增殖的影響；集落克隆實驗分析MLN4924對細胞增殖能力的影響；PI單染法分析細胞周期分布；以及Western blot實驗檢測周期調(diào)控蛋白CDK4、cyclin D1和天然抑制蛋白p21、p27的表達。結(jié)果MLN4924呈劑量-時間依賴抑制非小細胞肺癌細胞的生長,其中H1975細胞對MLN4924較為敏感,不同濃度(5、10、20、40μM)的MLN4924作用48h后,存活率分別為91.3±2.6%、86.0±4.2%、82.4±4.1%、79.8±3.4%,作用72h后,存活率分別為39.3±5.7%、39.7±4.1%、35.9±2.8%、36.9±2.1%。5、10、20和40μM MLN4924作用細胞7d,均顯著抑制H1975細胞形成集落克隆。10和40μM MLN4924作用細胞48h,G0/G1期細胞比例顯著增加,周期調(diào)控蛋白CDK4、cyclin D1表達明顯下調(diào),其天然抑制蛋白p21、p27的表達水平顯著上調(diào)。結(jié)論MLN4924具有抑制非小細胞肺癌細胞增殖的作用效應,其分子機制是通過調(diào)控周期相關蛋白的表達,將細胞阻滯于G0/G1期。
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

【共引文獻】

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本文編號：1259716