本文關(guān)鍵詞：黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-A家族在食管鱗癌和賁門腺癌中的表達(dá)及其意義

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【摘要】：腫瘤嚴(yán)重的威脅著人類健康,其中以胃癌、食道癌、大腸癌為代表的消化道癌癥威脅最為顯著。由于腫瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制的復(fù)雜性,尋找高效的治療方法也面臨著巨大挑戰(zhàn)。免疫療法的提出為腫瘤的治療指明了新的方向。該療法可通過增強(qiáng)腫瘤抗原的免疫原性以刺激自身特異性免疫應(yīng)答,進(jìn)而攻擊腫瘤細(xì)胞。因此尋找腫瘤特異性抗原成為免疫療法的關(guān)鍵。黑色素瘤相關(guān)抗原(Melanoma antigen,MAGE)正是這樣一群腫瘤特異性抗原。本課題組一直致力于MAGE-A家族在腫瘤中表達(dá)意義的研究。本研究利用免疫組織化學(xué)法分別檢測MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、MAGE-A9和MAGE-A11在食管鱗癌組織、賁門腺癌組織、相應(yīng)癌旁正常食管和胃組織中的表達(dá)及與其臨床生物學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系,特別是預(yù)后意義。并通過實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR(Real-time quantitative PCR,q RT-PCR)驗(yàn)證前期通過基因芯片篩選出的與MAGE-A11相關(guān)的多種基因,以期為MAGE-A家族成為食管癌和賁門癌的腫瘤特異性指標(biāo)提供理論依據(jù),并試圖闡述其作用機(jī)制。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:第一部分MAGE-A家族在食管鱗癌和賁門腺癌組織中的表達(dá)情況及臨床意義目的:探討黑色素瘤相關(guān)抗原MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、-A9和-A11在食管鱗癌組織、賁門腺癌組織,相應(yīng)癌旁正常組織中的表達(dá)及與其臨床生物學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系,特別是預(yù)后意義。方法:1應(yīng)用免疫組織化學(xué)法在睪丸組織中驗(yàn)證MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、-A9和-A11的特異性。2應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測60例食管鱗癌、30例賁門腺癌組織及相應(yīng)癌旁正常粘膜組織中MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、-A9和-A11蛋白的表達(dá),分析其與患者臨床生物學(xué)指標(biāo)及其預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:1 MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)蛋白正常睪丸組織,食管鱗癌和賁門腺癌中均有表達(dá)。在正常睪丸組織中尤其精原細(xì)胞和精母細(xì)胞核中均顯著表達(dá)。MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)蛋白在癌組織中主要定位于細(xì)胞質(zhì),部分定位于細(xì)胞核。60例食管鱗癌和30賁門腺癌旁正常組織中未發(fā)現(xiàn)MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)蛋白表達(dá),食管鱗癌組織中MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)的陽性率為68.33%(41/60);賁門腺癌組織中MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)的陽性率為56.67%(17/30)。在食管鱗癌組織中,MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)蛋白表達(dá)與食管鱗癌患者的年齡、臨床分期、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P0.05)。在賁門腺癌組織中,MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)蛋白與組織學(xué)分級(jí)(P0.05)呈正相關(guān),MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)蛋白表達(dá)與賁門腺癌患者的年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P0.05)。2 MAGE-A9蛋白正常睪丸組織,食管鱗癌和賁門腺癌中均有表達(dá)。在正常睪丸組織中尤其精原細(xì)胞和精母細(xì)胞核中均顯著表達(dá)。MAGE-A9蛋白在癌組織中主要定位于細(xì)胞質(zhì),部分定位于細(xì)胞核。60例食管鱗癌和30例賁門腺癌旁正常組織中未發(fā)現(xiàn)MAGE-A9蛋白表達(dá),食管鱗癌組織中MAGE-A9的陽性率為45%(27/60);賁門腺癌組織中MAGE-A9的陽性率為43.33%(13/30)。在食管鱗癌組織中,MAGE-A9蛋白表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)(P0.05)呈正相關(guān),MAGE-A9蛋白與食管鱗癌患者的年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P0.05)。在賁門腺癌組織中,MAGE-A9蛋白與組織學(xué)分級(jí)(P0.05)呈正相關(guān),MAGE-A9蛋白表達(dá)與賁門腺癌患者的年齡、臨床分期、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P0.05)。3 MAGE-A11蛋白正常睪丸組織,食管鱗癌和賁門腺癌中均有表達(dá)。在正常睪丸組織中尤其精原細(xì)胞和精母細(xì)胞核中均顯著表達(dá)。MAGE-A11蛋白在癌組織中主要定位于細(xì)胞質(zhì),部分定位于細(xì)胞核。60例食管鱗癌和30例賁門腺癌旁正常組織中未發(fā)現(xiàn)MAGE-A11蛋白表達(dá),食管鱗癌組織中MAGE-A11的陽性率為66.67%(40/60);賁門腺癌組織中MAGE-A11的陽性率為53.33%(16/30)。在食管鱗癌組織中,MAGE-A11蛋白表達(dá)與臨床分期和腫瘤大小(P0.05)呈正相關(guān),MAGE-A11蛋白與食管鱗癌患者的年齡、組織學(xué)分級(jí)、淋巴轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P0.05)。在賁門腺癌組織中,MAGE-A11蛋白與臨床分期和組織學(xué)分級(jí)(P0.05)呈正相關(guān),MAGE-A11蛋白表達(dá)與賁門腺癌患者的年齡、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性(P0.05)。4 60例食管鱗癌組織標(biāo)本中,MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、-A9和-A11蛋白表達(dá)呈均勻分布,三種蛋白同時(shí)表達(dá)的有19例,占31.67%(19/60)。60例食管鱗癌中三種蛋白陽性表達(dá)率之間有明顯差異(χ2=8.472,P=0.014)且MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)的表達(dá)率高。5 30例賁門腺癌組織標(biāo)本中,MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、-A9和-A11蛋白表達(dá)呈均勻分布,三種蛋白同時(shí)表達(dá)的有11例,占36.67%(11/30)。30例賁門腺癌中三種蛋白陽性表達(dá)率之間沒有明顯差異(χ2=1.156,P=0.561)。6 MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12),-A9和-A11蛋白表達(dá)陽性的食管鱗癌患者和賁門腺癌患者的生存期均顯著低于其表達(dá)陰性的患者。結(jié)論:MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、-A9和-A11蛋白是食管癌和賁門癌特異性抗原。MAGE-As(包括MAGE-A1、-A2、-A3、-A4、-A6、-A10和-A12)、-A9和-A11蛋白可作為食管鱗癌和賁門腺癌預(yù)后不良的指標(biāo)。第二部分對(duì)基因芯片中篩選出的MAGE-A11相關(guān)基因的初步驗(yàn)證目的:以期驗(yàn)證基因芯片篩選出的與MAGE-A11相關(guān)的多種基因,CEP295(centrosomal protein 295k Da,CEP295)、TRIM33(tripartite motif containing 33,TRIM33)、KIF23(kinesin family member 23,KIF23),FN1(fibronectin 1,FN1)、CKAP5(cytoskeleton associated protein 5,CKAP5)、PNN(pinin,desmosome associated protein,PNN),MMP13(matrix metallopeptidase13,MMP13)、MMP26(matrix metallopeptidase 26,MMP26)和MMP28(matrix metallopeptidase 28,MMP28)在轉(zhuǎn)染MAGE-A11質(zhì)粒組與轉(zhuǎn)染空載體組之間m RNA的表達(dá)水平的差異,探討MAGE-A11在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中可能的作用機(jī)制,為闡明MAGE-A11在食管癌中的作用提供初步理論依據(jù)。方法:實(shí)時(shí)免疫熒光定量PCR驗(yàn)證:引物的設(shè)計(jì):登錄GENEBANK網(wǎng)站,設(shè)計(jì)上、下游引物。嵌合熒光法(SYBR#174;Green I)PCR:采用ABI SYBR#174;Green熒光定量PCR方法(具體反應(yīng)體系見ABI SYBR#174;Green熒光定量PCR方法說明)。結(jié)果:1在轉(zhuǎn)染MAGE-A11質(zhì)粒的Eca109食管癌細(xì)胞系中,CEP295、TRIM33、KIF23、FN1、MMP13、MMP26和MMP28m RNA的表達(dá)水平顯著高于空轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組。MAGE-A11質(zhì)粒轉(zhuǎn)染上調(diào)了CEP295、TRIM33、KIF23、FN1、MMP13、MMP26和MMP28基因的轉(zhuǎn)錄水平,CKAP5和PNNm RNA的表達(dá)水平顯著低于空轉(zhuǎn)染組。MAGE-A9質(zhì)粒轉(zhuǎn)染下調(diào)了CKAP5和PNN基因的轉(zhuǎn)錄水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2在轉(zhuǎn)染MAGE-A11質(zhì)粒的TE-1食管癌細(xì)胞系中,CEP295、TRIM33、KIF23、FN1、MMP13、MMP26和MMP28m RNA的表達(dá)水平顯著高于空轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組。MAGE-A11質(zhì)粒轉(zhuǎn)染上調(diào)了CEP295、TRIM33、KIF23、FN1、MMP13、MMP26和MMP28基因的轉(zhuǎn)錄水平,CKAP5和PNN m RNA的表達(dá)水平顯著低于空轉(zhuǎn)染組。MAGE-A11質(zhì)粒轉(zhuǎn)染下調(diào)了CKAP5和PNN基因的轉(zhuǎn)錄水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3在轉(zhuǎn)染MAGE-A11質(zhì)粒的TE-13食管癌細(xì)胞系中,CEP295、TRIM33、KIF23、FN1、MMP13、MMP26和MMP28m RNA的表達(dá)水平顯著高于空轉(zhuǎn)染組及未轉(zhuǎn)染組。MAGE-A11質(zhì)粒轉(zhuǎn)染上調(diào)了CEP295、TRIM33、KIF23、FN1、MMP13、MMP26和MMP28基因的轉(zhuǎn)錄水平,CKAP5和PNNm RNA的表達(dá)水平顯著低于空轉(zhuǎn)染組。MAGE-A11質(zhì)粒轉(zhuǎn)染下調(diào)了CKAP5和PNN基因的轉(zhuǎn)錄水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:MAGE-A11通過調(diào)控泛素化相關(guān)基因(上調(diào)TRIM33),增殖凋亡的相關(guān)基因(上調(diào)CEP295和KIF23),腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移方面的相關(guān)基因(上調(diào)MMP13、MMP26、MMP28和FN1,下調(diào)CKAP5和PNN)在食管癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1252662