發(fā)布時(shí)間：2017-11-24 10:07

  本文關(guān)鍵詞：PSMA在肝細(xì)胞性肝癌中的作用機(jī)制研究

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【摘要】：研究目的：前列腺特異性膜抗原(PSMA)是一種前列腺上皮細(xì)胞Ⅱ型跨膜糖蛋白,高度表達(dá)于前列腺上皮。既往研究表明,PSMA高度表達(dá)于前列腺癌、胰腺癌、腎癌、乳腺癌、胃腸道腺癌等。本研究初步研究PSMA在肝細(xì)胞性肝癌組織及正常肝組織中的表達(dá)情況,研究PSMA在肝細(xì)胞性肝癌組織血管及肝正常組織血管中的表達(dá)情況,并分析其相關(guān)性；進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析PSMA在肝癌組織及腫瘤血管中的表達(dá)情況與各臨床參數(shù)間的關(guān)系(如患者的年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期及AFP數(shù)值等)。在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步選取肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞系HepG2為研究對(duì)象,細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)研究PSMA在肝細(xì)胞性肝癌惡性增殖中的作用。研究方法：1.選取云南省腫瘤醫(yī)院病理標(biāo)本庫(kù)2011-2014年肝細(xì)胞性肝癌石蠟標(biāo)本76例,昆明醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院2011-2014年正常肝組織石蠟標(biāo)本40例。標(biāo)本使用ABCAM公司的PSMA抗體進(jìn)行免疫組化檢測(cè),并統(tǒng)計(jì)分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。2.復(fù)蘇并培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系HepG2和肝正常系QSG-7701, Western blotting檢測(cè)兩株細(xì)胞中PSMA基礎(chǔ)表達(dá)情況。3. 以HepG2細(xì)胞系作為研究對(duì)象,siRNA轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞系,敲除HepG2中的內(nèi)源性PSMA, Western blotting驗(yàn)證敲減后PSMA的蛋白表達(dá)水平。4.敲減HepG2細(xì)胞內(nèi)源性PSMA,采用MTS法檢測(cè)肝癌細(xì)胞的增殖,細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化情況,以研究PSMA與肝癌細(xì)胞系HepG2惡性增殖的關(guān)系。研究結(jié)果：1.免疫組化結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示：PSMA在肝細(xì)胞性肝癌石蠟標(biāo)本組織中肝癌細(xì)胞的陽(yáng)性表達(dá)率為93.4%(71/76),在肝正常組織肝細(xì)胞中僅為20%(8/40),兩者表達(dá)存在顯著差異(P0.01)；且PSMA在肝細(xì)胞性肝癌組織血管中的陽(yáng)性表達(dá)率為67.1%(51/76),在肝正常組織血管中的陽(yáng)性表達(dá)率為5%(2/40),兩者表達(dá)存在顯著差異(P0.01);PSMA在肝細(xì)胞性肝癌肝癌細(xì)胞及肝癌血管中共表達(dá)率為61.8%(47/76),但在肝細(xì)胞性肝癌組織肝癌細(xì)胞和血管中的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步與臨床病理參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析,PSMA與肝細(xì)胞性肝癌患者的年齡、性別、組織分化程度及分期均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但與患者AFP (400U/ML,400U/ML)及HbsAb水平之間存在差異(P0.05)。2. Western blotting結(jié)果顯示：PSMA在人肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞系HepG2中高表達(dá)；3. PSMA-siRNA轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞系后,Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示肝細(xì)胞性肝癌細(xì)胞系HepG2中內(nèi)源性PSMA的表達(dá)被抑制；4.阻斷內(nèi)源性PSMA表達(dá)后,MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞計(jì)數(shù)生長(zhǎng)曲線結(jié)果顯示HepG2細(xì)胞增殖能力被抑制(P0.05)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)周期結(jié)果顯示阻斷內(nèi)源性PSMA表達(dá)后,肝癌細(xì)胞出現(xiàn)了G0/G1期阻滯(P0.05)。結(jié)論：PSMA的異常表達(dá)可能與HCC的惡性增殖密切相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：1221871