本文關(guān)鍵詞：葉酸在甲基硝基亞硝基胍致哈薩克族食管上皮永生化細(xì)胞表遺傳改變中的作用

  更多相關(guān)文章： 哈薩克族 食管上皮細(xì)胞 葉酸 MNNG 表觀遺傳

【摘要】：目的:探討葉酸在甲基硝基亞硝基胍(MNNG)對哈薩克族正常食管上皮細(xì)胞一般生物學(xué)及表觀遺傳學(xué)指標(biāo)改變中的作用,為哈薩克族食管癌的防治提供理論依據(jù)。方法:采用3*3析因設(shè)計將體外培養(yǎng)的哈族食管正常上皮細(xì)胞暴露于不同濃度葉酸(0.00μg/ml、0.40μg/ml、0.80μg/ml)和MNNG(0.00μg/ml、0.75μg/ml、1.50μg/ml)的培養(yǎng)液中作用48h、72h和96h后,1.采用噻唑藍(lán)(MTT)法測定不同葉酸濃度下MNNG對哈族食管上皮細(xì)胞增殖的影響;2.采用高效液相色譜法(HPLC)測定基因組DNA整體甲基化水平改變;3.采用亞硫酸氫鹽測序(BSP)法檢測MTHFR、FRα基因甲基化狀態(tài);4.采用RT-PCR及Western Blot法檢測MTHFR、FRα、DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA及蛋白表達(dá)。結(jié)果:隨著葉酸濃度的降低、MNNG濃度的增加以及作用時間的延長,(1)哈族食管正常上皮細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了明顯的變化,即死細(xì)胞數(shù)目逐漸增多,細(xì)胞核出現(xiàn)不同程度的破裂,胞質(zhì)不勻和細(xì)胞完整性損傷,細(xì)胞對MNNG損害的敏感性明顯增加,96h時尤為嚴(yán)重;(2)哈族食管正常上皮細(xì)胞的抑制率升高,存在顯著性差異(P0.01);(3)哈族食管正常上皮細(xì)胞的整體甲基化水平降低,存在顯著性差異(P0.01);(4)哈族食管正常上皮細(xì)胞的DNMT1、DNMT3a、DNMT3b酶活性均升高,均存在顯著性差異(P0.01);(5)哈族食管正常上皮細(xì)胞的MTHFR、FRα甲基化頻率均升高,其中MTHFR啟動子區(qū)P1-1片段、P1-2片段及FRα啟動子區(qū)P2-1片段表現(xiàn)較為明顯,均存在顯著性差異(P0.01);(6)哈族食管正常上皮細(xì)胞的DNMT1、DNMT3a、DNMT3b基因mRNA及蛋白表達(dá)水平均升高,MTHFR、FRα基因mRNA及蛋白表達(dá)水平則均降低,均存在顯著性差異(P0.01)。結(jié)論葉酸濃度降低對MNNG致哈族食管正常上皮細(xì)胞損傷有一定的促進(jìn)作用,而保持充足的葉酸則對MNNG的損害起到一定的保護(hù)作用。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R735.1

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