本文關(guān)鍵詞：雄激素受體與相關(guān)分子在乳腺癌中作用的研究

  更多相關(guān)文章： 雄激素受體 let-7a 人類表皮生長因子2 轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1 共表達(dá)

【摘要】：目的在不同雌激素受體(estrogen receptor,ER)狀態(tài)乳腺癌中分別探討雄激素受體(androgen receptor,AR)、轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1(metastasis-associated protein-1,MTA1)與人類表皮生長因子受體2(HER2)三者之間的表達(dá)關(guān)系,其表達(dá)與臨床病理特征的聯(lián)系和對預(yù)后產(chǎn)生的影響。在ER陰性乳腺癌細(xì)胞系中探究AR活性的變化對其下游分子表達(dá)的作用,及對ER陰性的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖的影響。方法收集天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院2008年1月至2009年12月經(jīng)手術(shù)切除、病理證實(shí)的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌,分別在ER陽性和陰性病例中各隨機(jī)抽取120例,共計(jì)240例。采用免疫組化方法檢測AR、MTA1表達(dá),ER、HER2、相關(guān)臨床病理特征及隨訪資料通過查閱存檔的臨床病歷資料獲得。本研究采用雌激素受體陰性的乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞體外培養(yǎng),利用免疫熒光驗(yàn)證AR在該細(xì)胞系中的表達(dá)狀態(tài)。通過向MDA-MB-231細(xì)胞中感染慢病毒得到AR低表達(dá)的細(xì)胞。隨后MTT和平板克隆實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證AR下調(diào)組與對照組的細(xì)胞增殖能力,并且通過實(shí)時(shí)定量PCR(real time PCR,RT-PCR)驗(yàn)證mi R-let-7a的表達(dá)是否隨AR的下調(diào)出現(xiàn)相應(yīng)的變化。應(yīng)用Western blot的方法檢測AR下調(diào)之后相應(yīng)的下游蛋白表達(dá)的變化。向AR下調(diào)的細(xì)胞中感染let-7a上調(diào)的慢病毒,進(jìn)而用MTT和平板克隆實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證let-7a上調(diào)組與對照組的細(xì)胞增殖能力,并且通過實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證mi R-let-7a的表達(dá)是否出現(xiàn)相應(yīng)的變化。應(yīng)用Western blot的方法檢測let-7a上調(diào)之后相應(yīng)的下游蛋白表達(dá)的變化,從而驗(yàn)證let-7a在AR對乳腺癌細(xì)胞生長增殖能力影響中的作用。本研究初步探討AR與let7a之間的作用關(guān)系及其對下游分子表達(dá)和細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果在240例患者中,AR陽性者占59.2%,MTA1過表達(dá)者占36.7%。MTA1的表達(dá)在ER陰性組中與AR/HER2共表達(dá)顯著相關(guān)。在中位隨訪時(shí)間為74個(gè)月的時(shí)間里,單因素生存分析顯示,ER陽性組中AR陽性者具有較好的預(yù)后(P0.05),MTA1的表達(dá)則與患者的預(yù)后無關(guān);ER陰性組中AR與HER2共表達(dá)的病例預(yù)后要差于其他病例(P0.05),MTA1過表達(dá)也預(yù)示著不良的預(yù)后(P0.05)。Cox多因素分析結(jié)果顯示AR表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況是影響ER+組的無瘤生存率的獨(dú)立因素;而在ER-組中,AR/HER2共表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響無瘤生存率的獨(dú)立因素。1.免疫熒光結(jié)果顯示AR在MDA-MB-231細(xì)胞中廣泛表達(dá)2.以慢病毒為載體感染MDA-MB-231細(xì)胞,并篩選擴(kuò)增得到AR下調(diào)細(xì)胞和對照組細(xì)胞。利用穩(wěn)定感染的細(xì)胞,MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)AR下調(diào)組的細(xì)胞增殖能力要明顯強(qiáng)于對照組;平板克隆實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也與MTT實(shí)驗(yàn)相同,AR下調(diào)組的細(xì)胞克隆數(shù)要多于對照組的細(xì)胞數(shù)。3.RT-PCR驗(yàn)證AR下調(diào)組與對照組間let-7a的表達(dá)差異,結(jié)果顯示AR下調(diào)組的細(xì)胞中l(wèi)et-7a相對于對照組有0.3倍的下調(diào)。Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AR下調(diào)組的AR相對于對照組有明顯下調(diào),而且let-7a下游分子HMGA2和磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3,p STAT3)的表達(dá)在AR下調(diào)組中有顯著的上調(diào)。4.以慢病毒為載體感染AR下調(diào)細(xì)胞,并篩選擴(kuò)增得到AR下調(diào)/let-7a上調(diào)的MDA-MB-231細(xì)胞。利用該細(xì)胞進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn)與平板克隆實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示AR下調(diào)/let-7a上調(diào)的細(xì)胞系相比于AR下調(diào)的對照細(xì)胞細(xì)胞增殖能力明顯被抑制,平板克隆實(shí)驗(yàn)也有相同趨勢的結(jié)果。5.RT-PCR驗(yàn)證AR下調(diào)/let-7a上調(diào)的細(xì)胞與AR下調(diào)的對照細(xì)胞之間let-7a的表達(dá)差異,結(jié)果顯示let-7a相對于對照組有約9倍的上調(diào)。而且實(shí)驗(yàn)組中l(wèi)et-7a下游分子HMGA2和p STAT3的表達(dá)相對于對照組有顯著下調(diào)。結(jié)論ER陽性組中AR是影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素,而在ER陰性組中MTA1的表達(dá)與AR/HER2共表達(dá)顯著相關(guān)。我們的結(jié)果表明AR在ER陽性的乳腺癌中可能成為內(nèi)分泌治療的新靶標(biāo),在ER陰性乳腺癌中AR/HER2的相互作用有可能通過MTA1分子調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的惡性行為。雄激素是通過與其相應(yīng)的受體來發(fā)揮生物學(xué)作用的。研究顯示AR信號的抑制使得細(xì)胞增殖能力增強(qiáng),同時(shí)細(xì)胞內(nèi)HMGA2和p STAT3蛋白上調(diào)。AR下調(diào)之后let-7a的表達(dá)同時(shí)出現(xiàn)下調(diào),同時(shí)可以使let-7a下游的蛋白表達(dá)產(chǎn)生相應(yīng)變化。且當(dāng)let-7a上調(diào)之后原本AR下調(diào)的細(xì)胞增殖能力下降,同時(shí)let-7a下游的蛋白表達(dá)出現(xiàn)抑制,提示AR可能通過let-7a作用于其下游分子。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9
，

本文編號：1207577