發(fā)布時(shí)間：2017-11-12 21:26

  本文關(guān)鍵詞：GPER介導(dǎo)他莫昔芬對人乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的增殖、遷移及凋亡作用

  更多相關(guān)文章： G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(GPER) 慢病毒 人乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF) 他莫昔芬

【摘要】：目的：通過構(gòu)建G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(GPER)的慢病毒短發(fā)夾RNA(shRNA)表達(dá)載體,探討GPER介導(dǎo)他莫昔芬(tamoxifen, TAM)對人乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(Cancer-associated fibroblast, CAF)的細(xì)胞增殖、遷移與凋亡作用1。方法：1.設(shè)計(jì)4條長度為19 bp的針對GPER基因shRNA的寡核苷酸序列及陰性對照序列,合成相應(yīng)的siRNA序列。將GV1 15載體用AgeⅠ和EcoR I行雙酶切,將酶切產(chǎn)物和合成的成對的寡鏈氨基酸退火形成雙鏈DNA結(jié)構(gòu)混合,通過T4 DNA連接酶連接,用大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化后挑取轉(zhuǎn)化子,使用GV115載體通用引物,進(jìn)行菌落PCR及測序鑒定,在HEK293T細(xì)胞中包裝病毒及測定病毒滴度。通過實(shí)時(shí)定量PCR進(jìn)行內(nèi)源性篩靶,選取干擾效果最佳的病毒進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),Western blot法檢測慢病毒在靶細(xì)胞的蛋白表達(dá)。2.將CAF細(xì)胞分為4組,NC(negative control,NC)組、GPER-RNAi、NC聯(lián)合TAM組和GPER-RNAi聯(lián)合TAM組,CCK-8檢測法、流式細(xì)胞術(shù)及Transwell實(shí)驗(yàn)檢測經(jīng)他莫昔芬處理后各組CAF細(xì)胞的增殖、遷移及凋亡能力。結(jié)果：1.Lenti-GPER-siRNA慢病毒載體經(jīng)HEK293T細(xì)胞包裝成功,Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)入病毒后GPER在CAF細(xì)胞中的表達(dá)較NC組顯著降低(P0.05)。2.流式細(xì)胞術(shù)及CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖情況。各組PI分別為(30.76±7.4)%,(32.54±3.5)%,(43.61±4.4)%(P=0),(34.93±6.8)%。TAM處理72h后,NC聯(lián)合TAM組細(xì)胞數(shù)增加至NC組的(172.16±10.8)%(P=0)。GPER-RNAi組細(xì)胞數(shù)為NC組的(92.73±7.1%(P=0.10),GPER-RNAi聯(lián)合TAM組(96.58±4.2)%(P=0.43)。流式細(xì)胞術(shù)檢測NC組、GPER-RNAi組、NC聯(lián)合TAM組和GPER-RNAi聯(lián)合NC組細(xì)胞凋亡比率分別為：(29.10±1.4)%、(28.27±1.3)%、(9.62±0.91)%、(31.09±1.2)%。GPER-RNAi組細(xì)胞凋亡比率與NC組無明顯差異P0.05,。NC聯(lián)合TAM組凋亡低于對照組(P0.05)。Transwell實(shí)驗(yàn)提示加入TAM后,CAF遷移細(xì)胞數(shù)明顯增加(遷移細(xì)胞數(shù)由40.75±3.59個(gè)增加至99.50±4.80個(gè)),而GPER-RNAi聯(lián)合TAM組則無明顯變化。結(jié)論成功構(gòu)建Lenti-GPER-siRNA慢病毒載體,感染CAF后可有效沉默GPER表達(dá)；TAM通過GPER促進(jìn)CAF細(xì)胞增殖并抑制其細(xì)胞凋亡。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R737.9

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 WisemanH,徐積恩;他莫昔芬:膜介作用新機(jī)制和治療進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;1994年05期

2 郭利;慎用他莫昔芬[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;2001年02期

3 ;新基因位點(diǎn)可預(yù)測他莫昔芬的療效[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2004年04期

4 林旭豐;;中藥結(jié)合他莫昔芬治療男性乳房異常發(fā)育癥15例療效觀察[J];浙江臨床醫(yī)學(xué);2008年03期

5 朱余兵;張倩;于翠霞;鄒建軍;盧_";肖大偉;;離線紫外照射和高效液相熒光法測定他莫昔芬及代謝物在人血漿中的濃度[J];中國藥學(xué)雜志;2009年21期

6 劉朋;王芙榮;紀(jì)立偉;李可欣;;212例他莫昔芬不良反應(yīng)回顧性分析[J];中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測;2011年06期

7 張燕青;王連生;;基因多態(tài)對他莫昔芬療效影響研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2012年03期

8 溫蔭芬;;他莫昔芬用鈀催化交叉偶合一步合成法[J];國外醫(yī)藥.合成藥.生化藥.制劑分冊;1988年03期

9 孫衛(wèi)華;他莫昔芬的慢性不良反應(yīng)[J];中國醫(yī)院藥學(xué)雜志;1993年03期

10 徐積恩;他莫昔芬的新作用[J];國外醫(yī)藥.合成藥.生化藥.制劑分冊;1995年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張燕青;王連生;;基因多態(tài)對他莫昔芬療效影響研究進(jìn)展[A];第十五屆中國神經(jīng)精神藥理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2012年

2 卞衛(wèi)和;李琳;楊靜;;辨證治療乳腺癌患者口服他莫昔芬不良反應(yīng)[A];第十二次全國中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合乳房病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

3 王愛華;唐惠林;馮欣;;他莫昔芬治療多囊卵巢綜合征的系統(tǒng)評價(jià)[A];2012年全國醫(yī)院藥學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)暨第72屆世界藥學(xué)大會(huì)衛(wèi)星會(huì)論文集[C];2012年

4 焦莉;杜怡峰;郭守剛;;他莫昔芬在大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注海馬遲發(fā)性神經(jīng)元死亡和遠(yuǎn)期記憶功能中的作用及其機(jī)制的研究[A];山東省2013年神經(jīng)內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國神經(jīng)免疫大會(huì)2013論文匯編[C];2013年

5 郭人花;王同杉;孫靖;金時(shí)代;束永前;;他莫昔芬抑制肝癌細(xì)胞HepG2增殖和誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制研究[A];第三屆中國腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

6 毛曉丹;孫蓬明;林芬;董濱華;宋一一;;他莫昔芬,雷洛昔芬,XCT790作用于內(nèi)膜癌細(xì)胞的流式分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科腫瘤會(huì)場（婦科腫瘤學(xué)組、婦科病理學(xué)組）論文匯編[C];2012年

7 高德宗;唐魯兵;李亮;余之剛;;γ-干擾素增強(qiáng)他莫昔芬抗乳腺癌作用的體外實(shí)驗(yàn)研究[A];山東抗癌協(xié)會(huì)普外腫瘤專業(yè)委員會(huì)第三次學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

8 杜貴強(qiáng);周瓏;陳曉悅;賀銀燕;萬小平;;G蛋白偶聯(lián)受體GPR30介導(dǎo)了4羥基他莫昔芬誘導(dǎo)的子宮內(nèi)膜癌細(xì)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科腫瘤會(huì)場（婦科腫瘤學(xué)組、婦科病理學(xué)組）論文匯編[C];2012年

9 卞衛(wèi)和;李琳;楊靜;;調(diào)理陰陽——乳腺癌他莫昔芬毒副反應(yīng)的中醫(yī)治療思路[A];第十二次全國中醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合乳房病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

10 薛靜;田軍偉;張文;徐東;;原發(fā)性腹膜后纖維化九例臨床分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國風(fēng)濕病學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2003年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃燕;英揭示他莫昔芬耐藥原因[N];中國醫(yī)藥報(bào);2009年

2 本報(bào)特約撰稿人 徐錚奎;他莫昔芬涅i肹N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2008年

3 王寶龍；王宏杰;上海華聯(lián)制藥攻克他莫昔芬制備難題[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

4 麥迪信;他莫昔芬功不可沒！[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

5 方留民;他莫昔芬可減少乳腺良性病變[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

6 王伯秋;他莫昔芬副作用引起業(yè)內(nèi)關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報(bào);2004年

7 ;治療早期乳腺癌他莫昔芬和放療同時(shí)使用與序貫治療的療效均理想[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

8 ;挑戰(zhàn)治療“金標(biāo)準(zhǔn)”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

9 ;他莫昔芬預(yù)防乳腺癌存在風(fēng)險(xiǎn)[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2005年

10 ;他莫昔芬預(yù)防乳腺癌有講究[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王強(qiáng);他莫昔芬激活ERα36增強(qiáng)乳腺癌轉(zhuǎn)移及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 周賢孝;基于基因表達(dá)相對秩序預(yù)測ER+乳腺癌對他莫昔芬的敏感性[D];電子科技大學(xué);2014年

3 王龍強(qiáng);他莫昔芬對雌激素受體陰性乳腺癌細(xì)胞的殺傷能力的研究[D];華中科技大學(xué);2014年

4 陳多;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑對小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的損傷作用及機(jī)理研究[D];沈陽藥科大學(xué);2001年

5 孫雪波;他莫昔芬在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

6 王帥;SHG-44人膠質(zhì)瘤細(xì)胞的離子通道特性及他莫昔芬抗膠質(zhì)瘤作用的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

7 周艷;乳腺癌ERβ表達(dá)的臨床意義及其與他莫昔芬治療耐藥相關(guān)意義的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

8 袁霞;應(yīng)用基因芯片（Microarray）和實(shí)時(shí)監(jiān)測聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time PCR）技術(shù)檢測他莫昔芬和雌二醇對人類乳腺癌細(xì)胞基因表達(dá)的調(diào)控[D];吉林大學(xué);2005年

9 徐春園;Metadherin介導(dǎo)MCF-7乳腺癌細(xì)胞雌激素非依賴性生長和他莫昔芬耐藥機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2014年

10 阮勝男;新型IRE1-XBP1抑制劑在他莫昔芬治療耐藥的ER+乳腺癌中的作用及機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙明智;他莫昔芬對SK-BR-3乳腺癌細(xì)胞株荷瘤裸鼠血管生成的作用及機(jī)制研究[D];河北大學(xué);2015年

2 楊墨琳;PAX2、AIB1在人乳腺癌細(xì)胞生長及他莫昔芬治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 胡夢裳;~(18)F-FDG評價(jià)PI3K信號通路抑制劑聯(lián)合他莫昔芬治療乳腺癌的早期療效[D];蘇州大學(xué);2015年

4 駱廣濤;EZH2蛋白在他莫昔芬耐藥乳腺癌MCF-7細(xì)胞系的表達(dá)及對其細(xì)胞增殖的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

5 石統(tǒng)偉;利用基因表達(dá)的秩次關(guān)系預(yù)測他莫昔芬的治療效果[D];電子科技大學(xué);2014年

6 袁杰;探討ITGB1在GPER介導(dǎo)的乳腺癌他莫昔芬耐受中的作用機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

7 嚴(yán)玉釗;GPER介導(dǎo)他莫昔芬對人乳腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞的增殖、遷移及凋亡作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

8 張雪峰;OATP1B1與CYP2D6*10基因多態(tài)性對他莫昔芬治療乳腺癌療效的相關(guān)性研究[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2015年

9 盛文;加味地黃湯治療他莫昔芬所致子宮內(nèi)膜增生的臨床研究[D];云南中醫(yī)學(xué)院;2014年

10 楊靜;調(diào)理陰陽法對乳腺癌患者他莫昔芬治療毒副作用的影響[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

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本文編號：1177707