本文關(guān)鍵詞：丹皮酚對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)及遷移、侵襲能力的影響

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【摘要】：目的：研究丹皮酚對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和侵襲能力的影響及其相關(guān)機(jī)制。方法：先常規(guī)培養(yǎng)人胃癌BGC823細(xì)胞,當(dāng)其處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),再用不同濃度的丹皮酚干預(yù)培養(yǎng),進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。1.先通過(guò)CCK-8法檢測(cè)用含有不同濃度丹皮酚(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/ml)的培養(yǎng)液干預(yù)24h和48h后的人胃癌BGC823細(xì)胞的增殖能力。2.把人胃癌BGC823細(xì)胞分成四組：對(duì)照組(丹皮酚濃度為Omg/ml),丹皮酚低、中、高濃度組；根據(jù)CCK-8法檢測(cè)結(jié)果,將丹皮酚低、中、高濃度的具體值分別確定為0.1、0.2、0.4mg/ml。3.通過(guò)流氏細(xì)胞儀Annenin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)各組人胃癌BGC823細(xì)胞用含有相應(yīng)濃度丹皮酚(0、O.1、0.2、0.4mg/ml)的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后的細(xì)胞凋亡情況。4.通過(guò)細(xì)胞劃痕傷口愈合法檢測(cè)各組用含有相應(yīng)丹皮酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h和48h后的細(xì)胞遷移能力。5.通過(guò)Transwell小室法研究各組用含有相應(yīng)丹皮酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)24h后的細(xì)胞侵襲能力。6.應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡(Western blot)技術(shù)檢測(cè)比較各組用相應(yīng)丹皮酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)48h后的人胃癌BGC823細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)水平。結(jié)果：1.CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示：隨濃度的增加,丹皮酚對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞的24h及48h抑制率逐漸升高；丹皮酚濃度為0.4mg/ml時(shí),對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞的24h及48h抑制率分別為53.3±2.1%、56.1±2.4%；而丹皮酚濃度達(dá)到0.6mg/ml時(shí),對(duì)人胃癌BGC823細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用則非常顯著,24h及48h抑制率分別為68.3+1.6%、80.1士6.0%,表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性。根據(jù)CCK-8法檢測(cè)結(jié)果,將丹皮酚低、中、高濃度組的丹皮酚具體濃度分別確定為0.1、0.2、0.4mg/ml。2.鏡下觀察可見(jiàn),對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)清晰、排列整齊規(guī)則；與對(duì)照組比較,丹皮酚各濃度組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變；尤其丹皮酚高濃度組細(xì)胞形態(tài)改變最明顯,可明顯觀察到該組細(xì)胞有較多漂浮,且形態(tài)異常、邊界不清晰、排列稀疏紊亂。3.流氏細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,丹皮酚各濃度組的細(xì)胞凋亡率明顯升高,且丹皮酚高濃度組明顯高于其低、中濃度組(P0.05或P0.01)。4.細(xì)胞劃痕傷口愈合法結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,丹皮酚各濃度組的24h及48h劃痕愈合率明顯降低,且丹皮酚中、高濃度組明顯低于其低濃度組(P0.05或P0.01)。5. Transwell小室法結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,丹皮酚各濃度組穿過(guò)Transwell小室的細(xì)胞數(shù)明顯降低(P0.01)；且丹皮酚中、高濃度組均明顯低于其低濃度組(P0.05),丹皮酚高濃度組明顯低于其中濃度組(P0.05)。6. Western blot結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,丹皮酚各濃度組人胃癌BGC823細(xì)胞MMP-2、MMP-9的表達(dá)明顯降低,且丹皮酚中、高濃度組均明顯低于其低濃度組(P0.05或P0.01),丹皮酚高濃度組明顯低于其中濃度組(P0.05)。結(jié)論：丹皮酚能抑制人胃癌BGC823細(xì)胞的生長(zhǎng)及遷移、侵襲能力,并呈明顯的量效關(guān)系,其作用機(jī)制可能與下調(diào)人胃癌BGC823細(xì)胞MMP-2、MMP-9的表達(dá)有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.2

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