本文關(guān)鍵詞：MCP-1影響乳腺癌MCF-7細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換和遷移的分子調(diào)控機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： MCP-1 EMT Snail MEK/ERK 細(xì)胞遷移 侵襲

【摘要】：乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康的常見惡性腫瘤,而腫瘤轉(zhuǎn)移則是導(dǎo)致癌癥患者死亡的最主要原因。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),有報(bào)道表明腫瘤微環(huán)境中的趨化因子參與到了腫瘤轉(zhuǎn)移的過程中。炎癥趨化蛋白因子MCP-1,屬于CC趨化家族成員,為單基因編碼,在人類、大鼠、小鼠及兔等物種中高度保守,被證實(shí)與其特異性受體CCR2結(jié)合后在乳腺癌的轉(zhuǎn)移中起重要作用,但其誘導(dǎo)腫瘤轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制并不清楚。本研究中,首先通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell小室實(shí)驗(yàn)證實(shí)MCP-1促進(jìn)了乳腺癌MCF-7細(xì)胞的遷移及侵襲,并且通過Western blot、免疫熒光實(shí)驗(yàn)及共聚焦實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),MCP-1可以改變細(xì)胞形態(tài),誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排,抑制E-cadherin的表達(dá),上調(diào)Fibronectin、Vimentin表達(dá),從而引發(fā)MCF-7細(xì)胞EMT的發(fā)生。而RS102895(CCR2拮抗劑)處理之后,抑制了MCP-1誘導(dǎo)的遷移、侵襲、細(xì)胞骨架重排及EMT發(fā)生。隨后通過Western blot、免疫熒光實(shí)驗(yàn)及熒光定量PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn),MCP-1可以在轉(zhuǎn)錄后水平穩(wěn)定調(diào)轉(zhuǎn)錄因子Snail的表達(dá),并促進(jìn)其入核轉(zhuǎn)運(yùn)。通過Western blot實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)MCP-1可以通過活化MEK/ERK信號(hào)通路促進(jìn)GSK-3β(ser9)磷酸化來抑制GSK-3β的活化,從而穩(wěn)定Snail的表達(dá)水平,進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞的遷移和侵襲及EMT發(fā)生。U0126(MEK/ERK抑制劑)處理抑制了MCP-1介導(dǎo)的Snail的穩(wěn)定進(jìn)而反轉(zhuǎn)了MCP-1誘導(dǎo)的EMT發(fā)生,而LiCl處理后(GSK-3β抑制劑)促進(jìn)了snail的穩(wěn)定,促進(jìn)了MCF-7細(xì)胞的EMT發(fā)生。最后我們通過熒光定量PCR、明膠酶譜實(shí)驗(yàn)及ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí)MCP-1可以通過ERK/GSK-3β信號(hào)通路上調(diào)MMP-2/9及VEGF的表達(dá)。結(jié)果說明MCP-1與CCR2特異性結(jié)合后可通過MEK/ERK/GSK-3β信號(hào)通路來促進(jìn)snail的穩(wěn)定從而誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞發(fā)生間充質(zhì)轉(zhuǎn)換及促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的遷移和侵襲,并且促進(jìn)了基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs和VEGF的表達(dá),闡明了MCP-1在誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞中的可能機(jī)制,并為相關(guān)臨床研究提供了相應(yīng)的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：電子科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：1156770