本文關鍵詞：GIPC2相互作用蛋白的研究

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【摘要】：研究背景與目的：GIPC2是一種天然的小分子蛋白,現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤中存在表達量的變化,如GIPC2在胃癌中上調(diào),在腎癌、急性淋巴細胞白血病和腎上腺皮質(zhì)癌中卻下調(diào)。然而到目前為止GIPC2在腫瘤發(fā)生中的功能尚不清楚,研究報道GIPC2的相互作用蛋白也很少。因此,本研究旨在尋找GIPC2的相互作用蛋白,從而為研究GIPC2的生物學功能提供有價值的線索。研究方法：以酵母雙雜交(H2Y)和免疫沉淀-質(zhì)譜聯(lián)用兩種方法進行GIPC2相互作用蛋白的初篩,主要從GIPC2 PDZ結(jié)構(gòu)域篩選PDZ配體文庫、GIPC2篩選cDNA文庫及GIPC2篩選293T細胞表達蛋白三條路線進行研究。首先通過生物學功能對初篩結(jié)果進行篩選得到候選蛋白,再根據(jù)蛋白表達的組織特異性和種屬特異性,在PC12和293T等細胞中通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)、免疫共沉淀(CO-IP)等方法進行相互作用蛋白的驗證。研究結(jié)果：在酵母雙雜交系統(tǒng)中,通過GIPC2 PDZ結(jié)構(gòu)域篩選PDZ配體文庫的方法,得到14個GIPC2的候選配體蛋白；通過GIPC2篩選cDNA文庫的方法得到4個GIPC2的候選配體蛋白。利用免疫沉淀-質(zhì)譜聯(lián)用的方法在293T細胞中篩選到上百種可能的配體蛋白。將以上得到的所有候選蛋白從生物學功能和亞細胞定位等方面進行進一步篩選,共得到19個候選蛋白。在PCI2細胞中,利用FRET的方法對GIPC2和19個候選蛋白的相互作用進行驗證,均呈陽性。在293T細胞中,通過CO-IP驗證,確定NONO為GIPC2的相互作用蛋白。研究結(jié)論：通過酵母雙雜交、免疫沉淀-質(zhì)譜聯(lián)用、熒光共振能量轉(zhuǎn)移、免疫共沉淀等方法,我們成功篩選并驗證得到GIPC2新的相互作用蛋白,為GIPC2相關生物學功能的研究提供重要的線索。
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.2

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本文編號：1143202