本文關鍵詞：TTF1-NP誘導人肝癌HepG-2細胞自噬的實驗研究

  更多相關文章： TTF1-NP HepG-2 細胞自噬 PI3K/Akt/mTOR JNK

【摘要】：目的 探討5,2',4'-三羥基-6,7,5'-三甲氧基黃酮(TTF1-NP)對人肝癌HepG-2自噬的影響及其相關的作用機制方法通過MTT法檢測不同濃度(15-240μM)的TTF1-NP作用不同時間(12 h,24 h,48h)后對HepG-2細胞存活率的影響；利用透射電子顯微鏡(transmission electron microscope, TEM)觀察細胞中自噬體的形成；Western Blot檢測TTF1-NP在不同濃度和不同時間下作用HepG-2細胞后自噬標志蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1的表達,及PI3K/Akt/mTOR通路中Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR和MAPK/JNK通路中p-JNK的蛋白表達情況。結果1.MTT法細胞活力檢測：TTF1-NP能夠降低HepG-2細胞的存活率,并且隨著藥物濃度和作用時間的增加,抑制增殖作用越明顯,且呈現一定的濃度-時間依賴性,差異具有統(tǒng)計學意義。2.透射電子顯微鏡檢測：TTF1-NP作用后,HepG-2細胞中有典型雙層膜結構的自噬體及單層膜的自噬溶酶體出現,提示TTF1-NP誘導HepG-2細胞自噬的產生。3.自噬標志蛋白檢測：利用Western Blot對LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白檢測得出,對照組中,兩種蛋白表達水平較低,隨著藥物濃度及作用時間的增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表達水平逐漸增加,自噬水平升高。4. PI3K/Akt/mTOR通路蛋白檢測：Western Blot檢測結果顯示,對照組細胞p-Akt, p-mTOR表達水平較高,隨著TTF1-NP藥物濃度和作用時間增加,二者的表達逐漸降低；加入PI3K/Akt/mTOR通路激動劑insulin后,與對照組相比,insulin+對照組中的p-Akt, p-mTOR表達升高(P0.05); TTF1-NP+insulin組中p-Akt, p-mTOR較TTF1-NP組表達升高(P0.01), LC3-Ⅱ表達降低(P＜0.01),差異具有統(tǒng)計學意義。5. MAPK/JNK通路蛋白檢測：Western Blot檢測發(fā)現,p-JNK隨著TTF1-NP藥物濃度和作用時間的增加表達逐漸升高。加入JNK抑制劑SP600125后,TTF1-NP+SP600125組中的p-JNK, LC3-Ⅱ的蛋白水平較TTF1-NP組降低,差異顯著,而與對照組相比,二組中的兩蛋白顯著升高(P0.01)。結論TTF1-NP可以誘導人肝癌HepG-2自噬。TTF1-NP誘導人肝癌HepG-2細胞自噬的作用機制可能與抑制PI3K/Akt/mTOR信號通路及激活MAPK/JNK信號通路有關。
【關鍵詞】：TTF1-NP HepG-2 細胞自噬 PI3K/Akt/mTOR JNK
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 中英文縮略詞9-12
• 第一章 引言12-16
• 第二章 材料16-18
• 2.1 實驗細胞16
• 2.2 實驗藥物16
• 2.3 實驗試劑16-17
• 2.4 實驗儀器17-18
• 第三章 方法18-24
• 3.1 細胞培養(yǎng)18
• 3.2 MTT法檢測細胞活力18
• 3.3 透射電子顯微鏡形態(tài)學觀察細胞自噬18-20
• 3.4 Western Blot法檢測蛋白表達20-22
• 3.5 數據處理與分析22-24
• 第四章 結果24-30
• 4.1 MTT法對細胞存活率檢測結果24
• 4.2 透射電子顯微鏡對自噬的形態(tài)學檢測結果24-25
• 4.3 Western Blot對自噬標志蛋白檢測結果25-26
• 4.4 TTF1-NP誘導HepG-2細胞自噬的作用機制26-30
• 第五章 討論30-35
• 第六章 結論35-36
• 參考文獻36-41
• 致謝41

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5 陳英;樸英杰;;人肝細胞自噬性凋亡的形態(tài)學觀察[A];第十二屆全國電子顯微學會議論文集[C];2002年

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