本文關(guān)鍵詞：HMGB1誘導(dǎo)乏氧人肺腺癌A549細(xì)胞順鉑耐藥及機(jī)制

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【摘要】：原發(fā)性支氣管肺癌(primary bronchopulmonary carcinoma),簡(jiǎn)稱肺癌(lung cancer),是全世界發(fā)病率及死亡率最高的惡性腫瘤之一。肺腺癌是其中一種常見(jiàn)的病理類(lèi)型,據(jù)統(tǒng)計(jì),近年來(lái)在世界許多國(guó)家和地區(qū)肺腺癌的發(fā)病率已超過(guò)鱗癌,成為肺癌最常見(jiàn)的病理類(lèi)型。然而,大多數(shù)患者確診時(shí)已屬晚期,因此,以鉑類(lèi)為基礎(chǔ)的聯(lián)合長(zhǎng)春瑞濱、吉西他濱、多西他賽以及培美曲塞等二聯(lián)化療方案是EGFR基因突變陰性及TKI治療失敗患者的首要選擇,然而,化療耐藥的出現(xiàn)嚴(yán)重影響化療效果和患者預(yù)后。腫瘤化療耐藥的機(jī)制極為復(fù)雜,其中由于實(shí)體腫瘤血管生成速度常滯后于瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的速度所形成瘤體內(nèi)乏氧微環(huán)境引起了重視。Co Cl2是乏氧實(shí)驗(yàn)中常用的化學(xué)乏氧模擬劑,它能夠使細(xì)胞線粒體內(nèi)呼吸用氧障礙達(dá)到細(xì)胞乏氧的作用,近年研究發(fā)現(xiàn)腫瘤乏氧微環(huán)境下氧自由基減少可以直接影響化療藥物的作用機(jī)制,而且低氧還可以通過(guò)上調(diào)和下調(diào)一些靶基因通過(guò)多種間接途徑影響腫瘤細(xì)胞的化療敏感性。高遷移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)是細(xì)胞在周?chē)ρ酢⒙匝准澳[瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞激活后產(chǎn)生的多種損傷相關(guān)模式分子中最重要的一種,不僅在多種腫瘤細(xì)胞中參與侵襲和轉(zhuǎn)移,而且近期有學(xué)者在白血病的一項(xiàng)研究中發(fā)現(xiàn),HMGB1可能通過(guò)活化P13KC3-MEK-ERK1/2信號(hào)途徑上調(diào)LC3-II表達(dá)及增加p62的降解調(diào)節(jié)自噬影響腫瘤細(xì)胞的化療耐藥性。實(shí)體瘤乏氧環(huán)境下HMGB1釋放明顯增多,而目前研究發(fā)現(xiàn)HMGB1與腫瘤化療耐藥關(guān)系密切,那么乏氧環(huán)境下肺癌細(xì)胞化療耐藥的產(chǎn)生是否與HMGB1相關(guān)及其具體機(jī)制目前尚不清楚。研究目的:本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)建立人肺腺癌A549細(xì)胞化學(xué)乏氧模型,探討乏氧條件下HMGB1對(duì)A549細(xì)胞順鉑化療敏感性的影響及其機(jī)制。研究方法:人肺腺癌A549細(xì)胞在Co Cl2(0、200μM)中培養(yǎng)24小時(shí)后,首先通過(guò)細(xì)胞免疫化學(xué)檢測(cè)HIF-1α的表達(dá)來(lái)驗(yàn)證乏氧模型是否成功建立。然后,通過(guò)倒置相差顯微鏡觀察A549細(xì)胞的形態(tài),MTT法檢測(cè)A549細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖情況,ELISA檢測(cè)化學(xué)乏氧條件下人肺腺癌A549細(xì)胞上清液中HMGB1蛋白的含量,CCK-8法測(cè)定化學(xué)乏氧條件下順鉑作用時(shí)A549細(xì)胞活性,進(jìn)一步通過(guò)Western-blot檢測(cè)自噬基因Beclin-1及LC3-II蛋白的表達(dá)。研究結(jié)果:1)Co Cl2乏氧組HIF-1α陽(yáng)性A549細(xì)胞陽(yáng)性積分及細(xì)胞核中HIF-1α蛋白表達(dá)均較常氧組增高;2)倒置相差顯微鏡下Co Cl2乏氧組與常氧組A549細(xì)胞均貼壁良好,Co Cl2乏氧組A549細(xì)胞數(shù)目較常氧組稀疏,部分形態(tài)不規(guī)則,可見(jiàn)多個(gè)偽足形成;3)與常氧組A549細(xì)胞相比,Co Cl2乏氧組A549細(xì)胞生長(zhǎng)曲線較為低平、增殖速度緩慢;4)經(jīng)順鉑處理后,Co Cl2乏氧組A549細(xì)胞存活率較常氧組A549細(xì)胞增高;5)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示Co Cl2乏氧組o Cl2組A549細(xì)胞上清液中HMGB1蛋白的表達(dá)較常氧組A549細(xì)胞增加;6)抑制HMGB1蛋白的活性能夠增加Co Cl2乏氧組A549細(xì)胞順鉑化療敏感性,而加入外源性HMGB1使Co Cl2乏氧組A549細(xì)胞順鉑化療敏感性降低;7)Co Cl2乏氧組A549細(xì)胞中Beclin-1及LC3-II蛋白的表達(dá)隨HMGB1蛋白的增加而增加,隨HMGB1蛋白的減少而減少。結(jié)論:乏氧條件下HMGB1的表達(dá)增加可能通過(guò)上調(diào)自噬誘導(dǎo)人肺腺癌A549細(xì)胞順鉑化療耐藥,然而自噬在多大程度上參與HMGB1誘導(dǎo)的化療耐藥及具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：HMGB1 乏氧 肺腫瘤 化療耐藥 自噬
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2
【目錄】：

• 摘要4-7
• abstract7-11
• 主要英文縮略詞表11-12
• 引言12-15
• 實(shí)驗(yàn)流程圖15-16
• 1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-26
• 3 結(jié)果26-32
• 4 討論32-35
• 5 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 綜述 肺癌化療耐藥的研究進(jìn)展39-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷及在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果54-55
• 致謝55

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本文編號(hào)：1110223