本文關(guān)鍵詞：基于表面等離子體共振技術(shù)和磁性微球免疫熒光技術(shù)對腫瘤標(biāo)志物的新型分析方法研究

  更多相關(guān)文章： 腫瘤標(biāo)志物 癌胚抗原 SPR技術(shù) 磁性微球 免疫熒光

【摘要】：與檢測腫瘤標(biāo)志物的傳統(tǒng)方法相比,表面等離子體共振技術(shù)(Surface Plasmon Resonance,SPR)技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)實時、在線檢測,實驗過程無需標(biāo)記,操作簡單,靈敏度高,而免疫磁珠(Immonumagnetic beads,IMBs)由于具有操作簡單、分離速度快、分離效率高、分離過程高保真等諸多優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域,在本文中,使用SPR生物傳感器對腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)進(jìn)行檢測,并引入生物素-鏈霉親和素納米金放大傳感信號,提高了檢測的靈敏度,并以磁性微球為載體,結(jié)合免疫熒光,使用夾心法對CEA進(jìn)行了定性和半定量檢測。第一章:本章分別介紹了腫瘤標(biāo)志物的檢測意義、概念、分類及其檢測方法,對SPR技術(shù)的原理、優(yōu)點、檢測方法及其應(yīng)用做了簡要的闡述,對免疫磁珠的組成、原理、優(yōu)點及其應(yīng)用等進(jìn)行了概述,在此基礎(chǔ)上闡述了本文研究的主要內(nèi)容。第二章:基于SPR技術(shù),分別采用直接法和雙抗體夾心法對癌胚抗原進(jìn)行檢測。對偶聯(lián)條件溶液pH、流速及抗體濃度進(jìn)行了考察和優(yōu)化,最后選擇在pH為4.5、流速為10μL/min、濃度為100μg/m L的條件下,對單克隆抗體mAbCEA-C3進(jìn)行偶聯(lián),偶聯(lián)量為8.475 ng?mm-2。使用直接法測CEA,檢測限為12.78 ng/mL。為了提高靈敏度,降低檢測限,使用雙抗體夾心模式對CEA進(jìn)行了檢測,得到檢測限為3.3 ng/m L。與直接法相比,夾心法使靈敏度提高了4.2倍。對人血清加標(biāo)樣品進(jìn)行檢測,樣品回收率為102.56%~106.86%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.96%~8.99%,實現(xiàn)了對CEA的快速靈敏檢測。第三章:為了進(jìn)一步提高靈敏度,在使用SPR生物傳感器時引入膠體金對信號進(jìn)行二次放大。首先對鏈霉親和素(Streptavidin,SA)標(biāo)記膠體金的最小蛋白量進(jìn)行了選擇,并對吸附在納米金顆粒上的SA的量及其活性位點進(jìn)行了定量檢測。結(jié)果表明在1 mL膠體金上偶聯(lián)了8.5μg SA,偶聯(lián)率為42.5%,每個納米金顆粒上平均連接了11.92個SA分子,可結(jié)合位點數(shù)為33.10個,每100 nm2納米金上的SA有4.69個可結(jié)合位點。使用納米金增強(qiáng)的夾心法檢測CEA,SPR響應(yīng)信號和CEA濃度在1 ng/mL~60 ng/mL具有良好的線性關(guān)系,線性方程為:Y=59.8100+6.8540X(ng/m L),R2=0.9772,與夾心法相比,靈敏度提高了3.3倍。結(jié)果表明:該方法準(zhǔn)確可靠,可用于人血清中CEA的檢測。第四章:利用磁性微球結(jié)合免疫熒光對CEA進(jìn)行了定性和半定量檢測。首先使用EDC/NHS法活化磁珠上羧基使之與CEA單克隆抗體進(jìn)行偶聯(lián),制成免疫磁珠,用于CEA的捕獲。對樣品的洗滌次數(shù)和免疫反應(yīng)時間進(jìn)行了優(yōu)化,最后選擇免疫時間為45 min,洗滌三次。在優(yōu)化條件下對混合樣品中的CEA進(jìn)行捕獲,再使用熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。結(jié)果表明,隨著CEA濃度的增加,磁性微球表面的熒光強(qiáng)度增強(qiáng),從而實現(xiàn)了對CEA快速準(zhǔn)確的定性和半定量檢測。
【關(guān)鍵詞】：腫瘤標(biāo)志物 癌胚抗原 SPR技術(shù) 磁性微球 免疫熒光
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.4;O657
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 引言11-28
• 1.1 腫瘤標(biāo)志物概述11-16
• 1.1.1 檢測腫瘤標(biāo)志物的目的與意義11
• 1.1.2 腫瘤標(biāo)志物的概念與特點11-12
• 1.1.3 腫瘤標(biāo)志物的檢測方法12-16
• 1.1.3.1 免疫分析法12-14
• 1.1.3.1.1 放射性免疫分析法12
• 1.1.3.1.2 酶聯(lián)免疫吸附分析法12-13
• 1.1.3.1.3 化學(xué)發(fā)光免疫分析法13-14
• 1.1.3.1.4 免疫熒光分析法14
• 1.1.3.2 免疫傳感器14-16
• 1.1.3.2.1 電化學(xué)免疫傳感器15
• 1.1.3.2.2 壓電免疫傳感器15-16
• 1.1.3.2.3 表面等離子體共振生物傳感器16
• 1.2 表面等離子體共振（SPR）技術(shù)概述16-24
• 1.2.1 SPR技術(shù)的基本原理16-17
• 1.2.2 SPR技術(shù)的主要優(yōu)勢17
• 1.2.3 SPR生物傳感器17-19
• 1.2.4 SPR技術(shù)的檢測方法19-21
• 1.2.5 SPR技術(shù)的應(yīng)用21-24
• 1.2.5.1 SPR技術(shù)在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用21-22
• 1.2.5.2 SPR技術(shù)在環(huán)境檢測中的應(yīng)用22-23
• 1.2.5.3 SPR技術(shù)在食品安全中的應(yīng)用23-24
• 1.3 免疫磁珠概述24-27
• 1.3.1 免疫磁珠的組成24
• 1.3.2 免疫磁珠分離富集原理24-25
• 1.3.3 免疫磁珠分離富集優(yōu)勢25
• 1.3.4 免疫磁珠應(yīng)用25-27
• 1.3.4.1 免疫磁珠在食品安全中的應(yīng)用25-26
• 1.3.4.2 免疫磁珠在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用26
• 1.3.4.3 免疫磁珠在生物分離中的應(yīng)用26-27
• 1.4 本文所進(jìn)行的研究27-28
• 第2章 基于SPR技術(shù)的癌胚抗原的檢測28-38
• 2.1 前言28
• 2.2 實驗部分28-30
• 2.2.1 主要儀器和試劑28-29
• 2.2.2 溶液的配制29
• 2.2.3 鼠抗癌胚抗原單克隆抗體抗體偶聯(lián)條件的選擇29-30
• 2.2.4 鼠抗癌胚抗原單克隆抗體偶聯(lián)過程30
• 2.2.5 選擇芯片再生條件30
• 2.2.6 癌胚抗原的檢測30
• 2.3 結(jié)果與討論30-37
• 2.3.1 鼠抗癌胚抗原的偶聯(lián)條件30-32
• 2.3.2 鼠抗癌胚抗原的偶聯(lián)結(jié)果32-33
• 2.3.3 再生條件33
• 2.3.4 直接法檢測CEA33-35
• 2.3.5 探尋合適的mAbCEA-B5的濃度35
• 2.3.6 夾心法檢測CEA35-36
• 2.3.7 回收率實驗36-37
• 2.4 結(jié)論37-38
• 第3章 基于納米金增強(qiáng)的SPR生物傳感器檢測癌胚抗原的研究38-50
• 3.1 前言38
• 3.2 實驗部分38-43
• 3.2.1 實驗儀器與試劑38-39
• 3.2.2 實驗原理39-40
• 3.2.3 溶液的配制40-41
• 3.2.5 鏈霉親和素修飾膠體金41-42
• 3.2.6 SA-GNPs的質(zhì)量鑒定42
• 3.2.7 納米金表面偶聯(lián)鏈霉親和素數(shù)目的測定42
• 3.2.8 膠體金增強(qiáng)的夾心法檢測癌胚抗原42-43
• 3.2.9 選擇性實驗43
• 3.3 結(jié)果與討論43-49
• 3.3.1 SA-GNPs的表征43
• 3.3.2 鏈霉親和素與膠體金結(jié)合的最小蛋白量的確定43-44
• 3.3.3 納米金表面偶聯(lián)鏈霉親和素數(shù)目及活性位點的測定44-45
• 3.3.4 bio-mAbCEA-B5與SA-GNPs的特異性結(jié)合45-46
• 3.3.5 SA-GNPs增強(qiáng)的夾心法檢測緩沖溶液中癌胚抗原46-48
• 3.3.6 選擇性實驗48
• 3.3.7 回收率實驗48-49
• 3.4 結(jié)論49-50
• 第4章 基于磁性微球的免疫熒光法對癌胚抗原的檢測50-58
• 4.1 前言50
• 4.2 實驗部分50-54
• 4.2.1 實驗儀器與試劑50-51
• 4.2.2 溶液的配制51-52
• 4.2.3 免疫磁球的制備52
• 4.2.4 夾心熒光免疫分析法對CEA的檢測52-53
• 4.2.5 選擇性實驗53-54
• 4.3 結(jié)果與討論54-57
• 4.3.1 免疫結(jié)合時間選擇54
• 4.3.2 洗滌次數(shù)對陰性對照的影響54-55
• 4.3.3 熒光顯微檢測與熒光強(qiáng)度分析55-57
• 4.3.4 選擇性實驗57
• 4.4 結(jié)論57-58
• 致謝58-59
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果66

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王佳穎;寧勇;劉湘;;表面等離子共振技術(shù)在抗原抗體相互作用中的研究[J];國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志;2015年05期

2 Jing-jing WANG;Wei-hui LIU;Da CHEN;Yan XU;Lu-yin ZHANG;;A micro-machined thin film electro-acoustic biosensor for detection of pesticide residuals[J];Journal of Zhejiang University-Science C(Computers & Electronics);2014年05期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 崔香;基于功能化納米粒子的光學(xué)生物傳感體系的研究[D];陜西師范大學(xué);2013年

2 薛瑞;納米材料電化學(xué)傳感界面的構(gòu)建及農(nóng)藥殘留檢測應(yīng)用[D];北京工業(yè)大學(xué);2014年

3 雷春陽;超電荷綠色熒光蛋白在生化傳感中的研究與應(yīng)用[D];湖南大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 姚桂紅;基于納米材料放大效應(yīng)的表面等離子共振傳感器的構(gòu)建及其應(yīng)用[D];南昌大學(xué);2013年

2 張肖會;SPR傳感器的構(gòu)建及對敵敵畏和莠去津的快速檢測[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

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本文編號：1097215