本文關(guān)鍵詞：抑制Paip1表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞遷移、增殖影響的研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞性肝癌 Paip1 PDCD4 遷移 增殖

【摘要】：目的:前期我們實(shí)驗(yàn)小組使用芯片技術(shù)篩選,通過(guò)對(duì)肝癌和癌旁肝組織檢測(cè)發(fā)現(xiàn)了肝癌中Paip1蛋白表達(dá)量是上調(diào)的。本研究擬通過(guò)應(yīng)用慢病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù),使肝癌細(xì)胞中Paip1基因的蛋白表達(dá)量下調(diào),觀察沉默Paip1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞遷移、增殖能力影響,進(jìn)而探索Paip1基因在肝癌的發(fā)生發(fā)展中所起的作用。研究方法:1.通過(guò)Western Blot方法在蛋白水平檢測(cè)Paip1在四種不同人肝癌細(xì)胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中和人肝細(xì)胞株L02細(xì)胞中的表達(dá)差異;2.在肝癌Hep G2細(xì)胞和SMMC-7721細(xì)胞中采用慢病毒介導(dǎo)的RNA干擾技術(shù)沉默Paip1基因表達(dá),用倒置熒光顯微鏡下觀察感染效率,通過(guò)Western blot方法檢驗(yàn)沉默效果。并且通過(guò)使用嘌呤霉素篩選出慢病毒感染的穩(wěn)定細(xì)胞(SMMC-7721-LV-sh-Paip1和HepG2-LV-sh-Paip1,SMMC-7721-sh-eGFP和HepG2-sh-eGFP),通過(guò)細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)、CCK-8實(shí)驗(yàn)觀察Paip1基因沉默后細(xì)胞遷移和細(xì)胞增殖能力的變化;采用Western blot方法檢測(cè)Paip1基因沉默后PDCD4蛋白水平變化。研究結(jié)果:1.Paip1蛋白表達(dá)水平在人肝癌細(xì)胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細(xì)胞株L02明顯高(P0.05),我們從中選出兩株肝癌細(xì)胞株(HepG2和SMMC-7721)完成接下來(lái)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。2.采用慢病毒介導(dǎo)RNAi干擾人肝癌細(xì)胞株HepG2和SMMC-7721細(xì)胞后,用熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況,約90%細(xì)胞發(fā)出綠色熒光,感染效率高;Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示HepG2和SMMC-7721細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組均能能有效的下調(diào)Paip1蛋白水平。3.劃痕24小時(shí)后,感染LV-sh-Paip1慢病毒(目的組)的肝癌HepG2細(xì)胞的遷移面積變化較陰性對(duì)照組小(P0.01);劃痕24小時(shí)后,感染LV-sh-Paip1慢病毒(目的組)的肝癌SMMC-7721細(xì)胞遷移面積變化較陰性對(duì)照組減小(P0.01)。4.感染LV-sh-Paip1慢病毒組(目的組)肝癌HepG2細(xì)胞的增殖能力較相應(yīng)的陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組亦下降(抑制率為48.60%);感染LV-sh-Paip1慢病毒組(目的組)肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖能力較相應(yīng)的陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組下降(抑制率為52.32%)。5.Western Blot檢測(cè)感染LV-sh-Paip1慢病毒組(目的組)肝癌SMMC-7721細(xì)胞的PDCD4蛋白相對(duì)表達(dá)量,與陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組相比有明顯升高(P0.01)。結(jié)論:1.Paip1蛋白表達(dá)水平在人肝癌細(xì)胞株HepG2,HepG2.2.15,SMMC-7721,Hep3B中較人肝細(xì)胞株L02明顯高,說(shuō)明Paip1可能在肝癌中高表達(dá)。2.利用RNAi干擾Paip1基因表達(dá)后,肝癌Hep G2細(xì)胞和SMMC-7721細(xì)胞遷移和增殖能力明顯下降。3.沉默Paip1,肝癌細(xì)胞SMMC-7721的PDCD4蛋白相對(duì)表達(dá)量升高,而PDCD4目前被公認(rèn)為在肝癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起抑制作用,初步驗(yàn)證了Paip1可能通過(guò)PDCD4發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞性肝癌 Paip1 PDCD4 遷移 增殖
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-10
• 第1章 引言10-13
• 第2章 材料與方法13-25
• 2.1 材料13-16
• 2.1.1 細(xì)胞株、慢病毒13
• 2.1.2 主要材料及試劑13-14
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備14-15
• 2.1.4 自配試劑15-16
• 2.2 方法16-25
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)技術(shù)16-19
• 2.2.2 Western blot檢測(cè)相應(yīng)蛋白表達(dá)19-22
• 2.2.3 細(xì)胞篩選22-23
• 2.2.4 慢病毒篩選23
• 2.2.5 嘌呤霉素篩選穩(wěn)定細(xì)胞株23
• 2.2.6 細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)檢測(cè)遷移能力23-24
• 2.2.7 CCK8檢測(cè)細(xì)胞的增殖水平變化24
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析24-25
• 第3章 結(jié)果25-31
• 3.1 細(xì)胞篩選結(jié)果25
• 3.2 慢病毒篩選結(jié)果25-27
• 3.2.1 確定MOI值25-26
• 3.2.2 根據(jù)Western blot檢測(cè)結(jié)果選擇最適合的LV-sh-Paip1慢病毒26-27
• 3.3 嘌呤霉素篩選穩(wěn)定細(xì)胞株結(jié)果27-28
• 3.4 CCK8數(shù)據(jù)分析結(jié)果28-29
• 3.5 細(xì)胞劃痕愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-30
• 3.6 PDCD4的表達(dá)結(jié)果30-31
• 第4章 討論31-34
• 第5章 結(jié)論34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果39-40
• 綜述40-46
• 參考文獻(xiàn)45-46

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