本文關(guān)鍵詞：沉默hARD1基因?qū)?-Fu抑制大腸癌SW620細胞株增殖的影響

  更多相關(guān)文章： hARD1 RNA干擾 5-Fu 大腸癌 細胞增殖

【摘要】：研究目的：本研究探討在人大腸癌細胞系SW620中,抑制hARD1的表達后,5-Fu抑制細胞增殖的效果是否受到影響,從而為基因治療配合化療的大腸癌治療方法提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。研究方法：1. SW620、siRNA-SW620和siCON-SW620三株細胞的復(fù)蘇和培養(yǎng)。2.應(yīng)用Q-PCR法檢測siRNA干擾效率及用5-Fu刺激后的ARD 1表達情況。3.采用MTT法檢測使用5-Fu刺激后細胞的增殖情況。4.應(yīng)用流式細胞儀檢測三株細胞使用5-Fu刺激后細胞周期變化情況。5.進行細胞劃痕實驗來觀察三組細胞用5-Fu刺激后遷移能力的變化。6.進行Transwell侵襲實驗來觀察三組細胞用5-Fu刺激后侵襲能力的變化。7.應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理,資料用均數(shù)±標準差(x±S)表示；兩組均數(shù)的比較用t檢驗；多組均數(shù)的比較用單因素方差分析；方差不齊時先進行變量轉(zhuǎn)換,再行分析。顯著性水準α=0.05。實驗結(jié)果：1. SW620、siRNA-SW620和siCON-SW620三株細胞培養(yǎng)成功且生長狀態(tài)良好；2. Q-PCR法檢測細胞ARD1表達水平,發(fā)現(xiàn)干擾穩(wěn)定的siRNA-SW620細胞的mRNA水平降低,與原始細胞比較,差異有統(tǒng)計學意義。用不同濃度5-Fu刺激后并不影響siRNA對SW620細胞ARD1的沉默效果。3.采用MTT法檢測5-Fu作用后細胞增殖的情況,發(fā)現(xiàn)沉默hARDl使5-Fu抑制SW620細胞增殖的效果增強。4.應(yīng)用流式細胞儀檢測三株細胞應(yīng)用5-Fu刺激后細胞周期變化情況,發(fā)現(xiàn)當5-Fu低濃度時可使G0/G1細胞比例升高,高濃度時誘導(dǎo)凋亡。5.細胞劃痕實驗結(jié)果顯示,RNA干擾后細胞遷移能力降低,用5-Fu刺激三株細胞后細胞的遷移能力較未用5-Fu刺激明顯下降,抑制ARD1的表達可和5-Fu協(xié)同降低細胞的遷移能力。6. Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示,RNA干擾SW620 ARD1表達后細胞的侵襲能力下降,5-Fu作用SW620細胞后細胞侵襲能力下降,5-Fu作用ARD1被沉默的SW620細胞后細胞的侵襲能力下降更明顯。結(jié)論：1.5-Fu降低了大腸癌細胞ARD1 mRNA的表達量。2. shRNA沉默ARD1后可提高5-Fu抑制大腸癌SW620細胞增殖的效果,增加了大腸癌對化療藥物5-Fu的敏感性。3. shRNA沉默ARD1基因后,聯(lián)合5-Fu低濃度作用可以阻滯大腸癌細胞的細胞周期于G0/G1期,而聯(lián)合5-Fu高濃度則誘導(dǎo)了大腸癌細胞的凋亡。4. shRNA干擾ARD1后可以與5-Fu協(xié)同降低SW620細胞的遷移能力。5. shRNA干擾ARD1后可以與5-Fu協(xié)同降低SW620細胞的侵襲能力。
【關(guān)鍵詞】：hARD1 RNA干擾 5-Fu 大腸癌 細胞增殖
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文縮略詞9-11
• 引言11-14
• 實驗材料及方法14-26
• 結(jié)果26-38
• 討論38-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻43-46
• 文獻綜述46-53
• 參考文獻50-53
• 攻讀學位期間發(fā)表的文章情況53-54
• 致謝54

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本文編號：1044119