本文關(guān)鍵詞：抑癌基因miR137在子宮內(nèi)膜癌中高度甲基化及其機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 子宮內(nèi)膜癌 微小RNA 差異甲基化區(qū)域 CpG島

【摘要】：目的:子宮內(nèi)膜癌目前是全球女性常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和死亡率都在逐年升高。在西方的一些發(fā)達(dá)地區(qū),其發(fā)病率已位于婦科惡性腫瘤的首位。大多數(shù)子宮內(nèi)膜癌患者可被早期發(fā)現(xiàn),但仍有15%的患者初次診斷時(shí)已為中晚期病情,并且中晚期患者的療效均較差。但就目前關(guān)于子宮內(nèi)膜癌研究來看,其具體發(fā)病機(jī)制(尤其是具體到基因?qū)用娴臋C(jī)制)仍不是十分的明確,因此,通過我們的努力尋找到一個(gè)新的治療靶點(diǎn)來治療子宮內(nèi)膜癌是我們需要解決的問題。微小RNA(mi RNA的命名)是一類在腫瘤發(fā)生過程中的新起重要作用的內(nèi)源性非編碼的小分子RNA(18-25個(gè)核苷酸),在動(dòng)、植物中參與基因轉(zhuǎn)錄后的表達(dá)調(diào)控,導(dǎo)致m RNA降解或抑制蛋白質(zhì)的翻譯,能誘導(dǎo)發(fā)生轉(zhuǎn)錄后的基因沉默,出演著一個(gè)抑癌基因的角色。因此,我們的研究通過分析mi R-137對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的影響,探討它作用的可能機(jī)制。方法:通過體外實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)子宮內(nèi)膜樣腺癌細(xì)胞株HEC1A及AN3CA(EEC,grade 3),EN1078-D(grade 3),and ARK-2(Serous papillary carcinoma,grade 4b)等細(xì)胞株,利用焦磷酸測(cè)序發(fā)檢測(cè)mi R137甲基化水平;利用轉(zhuǎn)染技術(shù)將mi R137、PCMV-MIR導(dǎo)入癌細(xì)胞中,使mi R137過度表達(dá)。利用RT-q PCR技術(shù)檢測(cè)確保其穩(wěn)定表達(dá),并通過MTS法驗(yàn)證mi R137的表達(dá)MTT法觀察未經(jīng)處理的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株、mi R137過表達(dá)及對(duì)照組在3h、48h、96h時(shí)間后,檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞增殖、克隆有抑制作用;通過Western蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上述子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞在不同干預(yù)下下,信號(hào)通路相關(guān)蛋白及EZH2、H3K23me3、B-Caternin、EGFR、c-Myc等蛋白的表達(dá),以明確在不同的代謝環(huán)境下(非生理狀態(tài))細(xì)胞代謝的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路;根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果,將不同干預(yù)條件的穩(wěn)定性表達(dá)的細(xì)胞系種植于裸鼠體內(nèi),觀察各組小鼠腫瘤生長速度、大小等,進(jìn)一步驗(yàn)證了當(dāng)mi R137過度表達(dá)對(duì)腫瘤的抑制作用。結(jié)果:在子宮內(nèi)膜樣腺癌(EEC,I型)和非子宮內(nèi)膜樣腺癌(non-EEC,II型)中,mir137相對(duì)于正常細(xì)胞來說是存在高度甲基化的,并且甲基化程度與惡性程度成正比;在未經(jīng)處理的子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株(HEC1A,Ishikawa)、mi R137過表達(dá)及對(duì)照組中,mi R137的表達(dá)對(duì)癌細(xì)胞株的增殖及克隆有明顯抑制作用;Western蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)上述子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞在mi R137高表達(dá)情況下,信號(hào)通路相關(guān)蛋白及EZH2、H3K23me3、B-Caternin、EGFR、c-Myc等蛋白的表達(dá)明顯降低,證實(shí)了mi R137抑制Wnt/B-Caternin這一信號(hào)通路成立,具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用;體外小鼠實(shí)驗(yàn)mi R137過度表達(dá)使小鼠的腫瘤大小及重量都比對(duì)照組小的多(P0.05),與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,證明mi R137對(duì)人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株的增殖有顯著的抑制作用。結(jié)論:抑癌基因mi R137的正常表達(dá),能夠作用于它的下游靶基因,有抑制腫瘤生長的作用,而mi R137的甲基化導(dǎo)致它表達(dá)的缺失是腫瘤生長的原因之一。能夠選擇正確的藥物抑制DNA甲基化作用,使mi R137軸或者軸上的其他基因能正常表達(dá),對(duì)臨床治療有一定的指導(dǎo)意義。這樣說來通過靶向針對(duì)mi R137來治療子宮內(nèi)膜癌的前景甚廣。
【關(guān)鍵詞】：子宮內(nèi)膜癌 微小RNA 差異甲基化區(qū)域 CpG島
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 主要符號(hào)表10-11
• 第一章 前言11-15
• 第二章 材料與方法15-29
• 2.1 細(xì)胞系15
• 2.2 主要試劑和藥品15-16
• 2.3 主要儀器設(shè)備16
• 2.4 主要溶液的配制方法及試劑16-18
• 2.5 方法與步驟18-29
• 第三章 結(jié)果29-37
• 3.1 miRNA高度甲基化在人類子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中的鑒定29
• 3.2 在人類子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中miR137高度甲基化并表現(xiàn)為表達(dá)沉默29-31
• 3.3 在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系中miR137高度甲基化及脫甲基化藥物再激活31-32
• 3.4 miR137過表達(dá)抑制體外子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系的增殖與克隆形成32-34
• 3.5 miR137過表達(dá)抑制體內(nèi)子宮內(nèi)膜腫瘤的生長及相關(guān)蛋白變化34-37
• 第四章 討論37-43
• 第五章 結(jié)論43-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果49-50
• 致謝50

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張瑋;抑癌基因miR137在子宮內(nèi)膜癌中高度甲基化及其機(jī)制的研究[D];濟(jì)南大學(xué);2016年

，

本文編號(hào)：1035100