本文關(guān)鍵詞：YAP1促進(jìn)前列腺癌EMT表型及機(jī)制研究

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【摘要】：目的:通過(guò)測(cè)定人前列腺疾病患者不同階段前列腺組織的YAP1及EMT靶標(biāo)的蛋白水平以及相關(guān)的細(xì)胞和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),重點(diǎn)研究YAP1對(duì)于前列腺癌發(fā)生EMT的影響以及對(duì)其發(fā)生機(jī)制作初步探討。方法:1、對(duì)從良性前列腺增生到去勢(shì)抵抗性前列腺癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色,檢測(cè)YAP1、E-Cadherin和N-Cadherin的表達(dá)水平并對(duì)三種蛋白水平差異進(jìn)行分析比較。2、通過(guò)細(xì)胞實(shí)驗(yàn),沉默YAP1基因,進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn)并觀察細(xì)胞遷移生長(zhǎng)情況;其次,進(jìn)行YAP1基因沉默和過(guò)表達(dá),比較處理后的前列腺癌細(xì)胞中YAP1、E-Cadherin和Vimentin的表達(dá)差異;再次,雙氫睪酮和恩雜魯胺處理后檢測(cè)AR、YAP1、磷酸化Smads表達(dá)差異及相互關(guān)系并對(duì)上述細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)蛋白分離,分別對(duì)胞核和胞質(zhì)蛋白進(jìn)行上述三個(gè)指標(biāo)的比較分析;最后,用TGF-β處理細(xì)胞后觀察YAP1表達(dá)及細(xì)胞表型轉(zhuǎn)變。3、通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證上述實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物體內(nèi)影響并研究YAP1的抑制劑維替泊芬對(duì)異種移植腫瘤生長(zhǎng)、腫瘤內(nèi)YAP1表達(dá)及腫瘤EMT表型的影響。結(jié)果:1、免疫組化結(jié)果顯示YAP1和N-Cadherin在BPH,L-ADPC,H-ADPC,ADT以及CRPC組織中表達(dá)量及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均依次升高,而E-Cadherin在五個(gè)疾病階段顯示出降低趨勢(shì)。2、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在C4-2細(xì)胞中,敲除YAP1后細(xì)胞在培養(yǎng)24h后遷移距離顯著縮短,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在C4-2細(xì)胞中,沉默YAP1之后E-Cadherin表達(dá)顯著升高,Vimentin表達(dá)顯著降低;反之,過(guò)表達(dá)YAP1之后,E-Cadherin表達(dá)顯著降低,Vimentin表達(dá)量顯著升高;在LNCaP細(xì)胞中,對(duì)DHT處理及DHT+MDV3100處理,胞漿中未見(jiàn)AR、YAP1及P-Smads三個(gè)指標(biāo)的顯著性改變;然而在細(xì)胞核中,MDV3100處理后,胞核內(nèi)的AR顯著減少,YAP1顯著增高,以及P-Smads升高明顯;在C4-2細(xì)胞中,si5YAP1沉默YAP1效果良好,control+TGF-β組與control組對(duì)比,表明TGF-β顯著促進(jìn)YAP1基因轉(zhuǎn)錄,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、在BALB/c裸鼠皮下種植C4-2細(xì)胞,敲除YAP1的瘤體較小并且未見(jiàn)明顯腫瘤轉(zhuǎn)移;將正常C4-2細(xì)胞種植于小鼠皮下,VP藥物實(shí)驗(yàn)組小鼠瘤體顯著小于DMSO對(duì)照組;對(duì)上述腫瘤進(jìn)行免疫組化,發(fā)現(xiàn)VP藥物組YAP1表達(dá)量減低,E-Cadherin表達(dá)升高顯著,N-Cadherin表達(dá)降低明顯;Brdu實(shí)驗(yàn)顯示VP藥物組腫瘤增殖較少,而DMSO對(duì)照組腫瘤增殖旺盛,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在BALB/c裸鼠皮下種植LNCaP細(xì)胞,進(jìn)行手術(shù)去勢(shì),發(fā)現(xiàn)隨著手術(shù)去勢(shì)時(shí)間的延長(zhǎng),YAP1蛋白表達(dá)逐漸增多,E-Cadherin表達(dá)逐漸減少并且N-Cadherin表達(dá)量也呈現(xiàn)增多趨勢(shì)。結(jié)論:該研究初步證實(shí)YAP1能夠促進(jìn)前列腺癌EMT表型改變,能夠增強(qiáng)細(xì)胞遷移能力。其機(jī)制可能是隨著AR功能異�；蛘R水平減低,YAP1逐漸激活并促進(jìn)Smads磷酸化,二者一起協(xié)同進(jìn)入細(xì)胞核,除此之外,經(jīng)典的TGF-β也可以促進(jìn)YAP1的上述作用。最后,VP藥物能夠抑制YAP1對(duì)前列腺腫瘤細(xì)胞促EMT轉(zhuǎn)變及其安全性尚可;總之,通過(guò)初步的探索,探究出部分信號(hào)通路或PCa EMT發(fā)生發(fā)展機(jī)制,在預(yù)防和治療CRPC甚至mCRPC方面,YAP1也許會(huì)有很好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：Yes 相關(guān)蛋白 1 前列腺癌 上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化 雄激素受體 表型 核移位
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R737.25
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明10-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、YAP1蛋白及EMT marker在前列腺疾病表達(dá)情況研究15-24
• 1.1 對(duì)象和方法15-19
• 1.1.1 研究對(duì)象15
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)耗材及儀器15-16
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 1.2 結(jié)果19-21
• 1.3 討論21-22
• 1.4 小結(jié)22-24
• 二、YAP1通過(guò)P-Smads促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT24-47
• 2.1 對(duì)象及方法24-37
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象24
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)材料24-27
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)方法27-37
• 2.2 結(jié)果37-42
• 2.3 討論42-46
• 2.4 小結(jié)46-47
• 三、YAP1促進(jìn)前列腺癌發(fā)生EMT的體內(nèi)驗(yàn)證47-56
• 3.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及方法47-50
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象47
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料47-48
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)方法48-50
• 3.2 結(jié)果50-53
• 3.3 討論53-55
• 3.4 小結(jié)55-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-67
• 發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明67-68
• 綜述 YAP1蛋白與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展68-81
• 綜述參考文獻(xiàn)72-81
• 致謝81-83
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷83

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 柯炳虎;前列腺癌AR復(fù)合體通過(guò)甲基化抑制YAP1的表達(dá)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

2 晏濱;YAP1促進(jìn)前列腺癌EMT表型及機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2016年

3 李達(dá);綿羊YAP1基因與肌肉生長(zhǎng)相關(guān)基因表達(dá)相關(guān)分析以及載體構(gòu)建的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

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本文編號(hào)：1026963