本文關(guān)鍵詞：應用重組腺病毒35型纖毛突蛋白增強單克隆抗體抗腫瘤的相關(guān)研究

  更多相關(guān)文章： CDC效應 西妥昔單抗 卵巢癌 Ad35K++ CD46分子

【摘要】：研究背景與研究目的：腺病毒(Adeno virus, Ad)是一種雙鏈DNA病毒。迄今為止,人們認識的腺病毒多達57種血清型。根據(jù)不同腺病毒的血凝特性,致癌性,基因分型以及系統(tǒng)發(fā)生分析結(jié)果,腺病毒總共可以分為從A到G七個亞型。其中B亞型又可以根據(jù)其生物學特性以及遺傳性狀分為B1和B2亞群,人腺病毒35型(Ad35)屬于其中的B2亞群。Ad35可以通過其C-末端三聚體纖毛突領(lǐng)域的殘端與人細胞膜表面膜輔助蛋白(membane cofactor protein, MCP, CD46)分子結(jié)合從而感染人體細胞。單克隆抗體(monoclonal antibodies, mAbs)作為一種新興的腫瘤治療藥物,近年來取得了快速的發(fā)展,引起了人們的廣泛關(guān)注和興趣。西妥昔單抗(Cetuximab)結(jié)構(gòu)為人鼠嵌合型,其主要作用于人上皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)。通過與EGFR分子結(jié)合,Cetuximab能誘導產(chǎn)生抗體依賴的細胞介導的細胞毒效應(antibody-dependent, cell-mediated cytotoxicity, ADCC)以及補體依賴的細胞毒效應(complement-mediated cytotoxicity, CDC)來殺傷腫瘤細胞。CD46分子廣泛表達在人體除紅細胞以外的所有組織細胞的表面。CD46分子主要作用是在Ⅰ因子誘導的C3b、C4b補體成分的降解過程當中作為一種輔助因子。有研究指出,多種腫瘤細胞能通過上調(diào)細胞表面的CD46分子水平逃避機體補體系統(tǒng)的攻擊,從而限制單克隆抗體的作用效果。其中,卵巢癌組織以及細胞系均能通過上調(diào)CD46分子降低Cetuximab誘導的CDC效應對其產(chǎn)生的殺傷作用。Ad35K++是一種突變的Ad35型纖毛突蛋白,與野生型的Ad35型纖毛突蛋白相比對CD46分子具有更強的親和力。體外實驗證明,應用Ad35K++與多種腫瘤細胞共同孵育可以引起CD46分子的降解以及胞內(nèi)轉(zhuǎn)移。綜上所述,我們希望能通過體外實驗,探討Ad35K十+對卵巢癌細胞系表面CD46分子的作用。進而研究抑制卵巢癌表面CD46分子對Cetuximab誘導的CDC效應的增強效果。探索Ad35K++增強Cetuximab誘導的CDC效應其作用于卵巢癌細胞系的具體作用機制。研究方法：1.卵巢癌腫瘤細胞系體外正常傳代培養(yǎng)。2.通過流式細胞術(shù)檢測卵巢癌細胞系SK-OV-3以及A2780表面EGFR分子的表達水平。3.運用流式細胞術(shù)檢測SK-OV-3細胞與Ad35K++共同孵育在15min、1、8、24、48h后細胞表面CD46分子表達水平。4.通過MTT比色法測定卵巢癌細胞體外增殖抑制率。5.通過流式細胞術(shù)檢測卵巢癌細胞凋亡率。6. Western blotting法檢測卵巢癌凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、c-caspase3 、c-PARP的表達情況。研究結(jié)果：1.流式結(jié)果顯示,SK-OV-3細胞表面EGFR平均表達水平明顯高于A2780細胞。2.Ad35K++與SK-OV-3細胞共同孵育后,CD46分子表達水平明顯降低,在孵育8h后CD46水平降到最低。3.Ad35K++通過增強Cetuximab誘導的CDC效應顯著抑制SK-OV-3細胞增殖。4.Ad35K++增強Cetuximab誘導的CDC效應,從而引起更多細胞發(fā)生凋亡細胞凋亡比例明顯上升。5.Ad35K++聯(lián)合Cetuximab與NHS組相較于其他組Bax, c-caspase3以及c-PARP表達水平明顯上調(diào),Bcl-2表達水平明顯下調(diào)。研究結(jié)論：Ad35K++能顯著抑制卵巢癌細胞系SK-OV-3細胞表面的CD46分子水平,進而增強Cetuximab對SK-OV-3的抗腫瘤效應。體外與Ad35K++共同孵育8h后,能明顯增加Cetuximab介導的CDC效應對卵巢癌細胞的增殖抑制效應。同時,單獨將Ad35K++與卵巢癌細胞進行孵育并沒有產(chǎn)生明顯的增殖抑制效應,提示Ad35K++有較好的安全性。聯(lián)合應用Ad35K++與Cetuximab相對于單用Cetuximab顯著增加SK-OV-3細胞的凋亡比例,說明聯(lián)合應用Ad35K++能使得Cetuximab誘發(fā)的CDC效應增強,誘導更多的細胞發(fā)生凋亡。聯(lián)合應用Ad35K++和Cetuximab相較于單獨應用Cetuximab,促凋亡蛋白Bax, c-caspase3以及c-PARP表達水平明顯上升,Bcl-2表達水平明顯下調(diào)。Bcl-2/Bax比例明顯下降,說明聯(lián)合應用Ad35K++能使得Cetuximab誘發(fā)的CDC效應增強,細胞主要通過線粒體介導的細胞凋亡途徑發(fā)生凋亡。綜上所述,Ad35K++能在體外狀態(tài)下安全有效地增強Cetuximab對卵巢癌細胞的抑制作用。我們的實驗為探索卵巢癌免疫治療方法提供新思路。
【關(guān)鍵詞】：CDC效應 西妥昔單抗 卵巢癌 Ad35K++ CD46分子
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R737.31
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 前言13-16
• 材料和方法16-28
• 實驗結(jié)果28-31
• 討論31-35
• 實驗結(jié)論35-36
• 附圖36-41
• 參考文獻41-46
• 綜述46-55
• 參考文獻50-55
• 致謝55-56
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術(shù)論文56-57
• 學位論文評閱及答辯情況表57

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本文編號：1018081