本文關鍵詞：索拉菲尼聯(lián)合沙利度胺對肝癌細胞增殖及雞胚尿囊膜血管生成的影響

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【摘要】：背景:原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我國是一種常見的惡性腫瘤疾病,由于我國乙肝、丙肝感染人數(shù)基數(shù)大,部分地區(qū)衛(wèi)生條件較差,致使我國肝癌發(fā)病率約占全球的一半以上。因其發(fā)病具有隱匿性,約有90%的病例在發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)錯過手術時機。另外統(tǒng)計顯示,即便是肝癌患者及時行手術切除其5年復發(fā)率最高可達61.5%。因此,尋找一種針對手術無法切除和轉移的晚期肝癌患者的治療方案,是醫(yī)療工作者亟需解決的難題。惡性腫瘤生長迅速,其生長依賴于腫瘤新生血管血管提供的營養(yǎng),靶向藥物抗肝癌細胞增殖及腫瘤血管形成成為當今肝癌非手術治療的研究熱點。索拉菲尼(Sorafenib)是由德國拜耳公司研制的新型靶向治療藥物,已被美國FDA批準用于肝癌的臨床系統(tǒng)治療。索拉菲尼具有雙重抗腫瘤作用:1、阻斷Ras/Raf/MEK/ERK信號傳導通路,直接地抑制腫瘤細胞的增殖;2、抑制與VEGF相應的酪氨酸激酶受體(VEGFR)的活性,通過阻斷腫瘤血管生成,間接地抑制腫瘤細胞的生長。沙利度胺(Thalidomide)最初作為鎮(zhèn)靜藥控制孕婦妊娠反應,因導致嚴重致畸事件而被停用,但近年來研究發(fā)現(xiàn)沙利度胺具有抗血管生成、抑制腫瘤生等特點,已有學者將其運用于實體瘤的治療。在腫瘤的治療中,單獨用藥往往效果有限,為了達到更好的治療效果及更少的副作用,越來越多的研究集中在聯(lián)合用藥上,如索拉菲尼聯(lián)合5-FU、阿霉素,沙利度胺聯(lián)合紫杉醇對晚期肝癌的治療等。但關于索拉菲尼、沙利度胺聯(lián)合應用于肝癌的治療研究卻鮮見于報道。目的:本實驗通過觀察索拉菲尼、沙利度胺單獨用藥、聯(lián)合用藥對人肝癌細胞組體外生長及雞胚絨毛尿囊膜血管生長的影響,來證實二者聯(lián)合應用在抗腫瘤生長及抗血管生成方面是否更具有優(yōu)勢。為進一步臨床試驗及治療提供理論依據(jù)。方法:1、聯(lián)合用藥對肝癌細胞增殖的影響:以人肝癌細胞組BEL7402為實驗對象,將索拉菲尼試劑制作成不同濃度工作液,分別給藥后通過MTT法測得索拉菲尼抑制率,并求得其IC50值,同樣方法測得沙利度胺抑制率及其IC50值。然后取對數(shù)生長期的BEL7402人肝癌細胞調(diào)制成0.2×105個/ml,組鋪設96孔板,每孔200ml,共分為4組,在沙利度胺和索拉菲尼各自IC50值以下選取適宜濃度分別組成:空白對照組,索拉非尼組,沙利度胺組,聯(lián)合用藥組,每組設5個復孔,共鋪5塊96孔板。孵化24小時后分別給藥后放入孵化箱孵育,每過12小時隨機取出1塊96孔板,并進行MTT實驗,運用酶標儀測定每組的平均A值,進而計算出每組細胞生長抑制率,最后繪制出生長曲線并評價聯(lián)合用藥的效果。2、聯(lián)合用藥對雞胚尿囊膜血管生成的影響:選取7日齡活胚蛋100枚,隨機分為4組(空白對照組,索拉非尼組,沙利度胺組,聯(lián)合用藥組),每組25個。制作假氣室暴露CAM膜,分組加藥。加藥后用無菌封口膜封窗,繼續(xù)孵育2天。孵育完畢后,每組選取存活的CAM模型,打開封口膜,加入固定液,室溫下固定并制作CAM標本,陰干后顯微鏡下觀察并拍照,通過圖象處理軟件計算血管覆蓋率。經(jīng)統(tǒng)計學處理評價聯(lián)合用藥是否具有優(yōu)越性。結果:1、索拉非尼、沙利度胺對BEL7402細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50):1.5、3、6、12、24μΜ/L的索拉非尼作用于BEL7402細胞48小時后的抑制率分別為12.5%、22.2%、34.9%、49.2%、65.1%,6.25、12.5、25、50、100μg/ml的沙利度胺作用于肝癌細胞系BEL7402 48小時后的抑制率分別為18.2%、29.1%、38.2%、58.2%、69.1%。索拉非尼、沙利度胺對BEL7402細胞的半數(shù)抑制濃度(IC50值)分別為11.9μΜ/L、36.9μg/ml。2、聯(lián)合用藥對BEL7402細胞抑制作用:沙利度胺(25μg/ml)與索拉菲尼(3μΜ/L)聯(lián)合用藥作用于BEL7402細胞時,其效果相對于單藥組差別具有統(tǒng)計學意義(p0.05),并且聯(lián)合用藥組效果大于于單藥組藥效代數(shù)和。3、聯(lián)合用藥對雞胚尿囊膜血管生成的影響:鏡下觀察顯示:空白對照組血管呈葉脈樣生長,粗壯密集,分支較多。加藥組血管數(shù)明顯少于對照組,并且血管較細,分支少,部分血管萎縮、斷裂,其中以聯(lián)合用藥組最為明顯。經(jīng)圖像分析軟件計算:沙利度胺和索拉菲尼組相對于空白對照組血管覆蓋率有明顯差異[(30.2±2.9)vs(38.3±2.7),q=17.05,p0.05;(26.5±2.1)vs(38.3±2.7),q=24.59,p0.05],聯(lián)合用藥組與沙利度胺、索拉菲尼組對比,差異有統(tǒng)計學意義[(12.6%±1.5%)vs(30.2%±2.9%),q=36.68,p0.05;(12.6%±1.5%)vs(26.5%±2.1%),q=28.67,p0.05]。結論:1、索拉菲尼、沙利度胺對BEL7402細胞均有明顯的增殖抑制作用,并具有明顯的量效關系,而二者聯(lián)合應用對BEL7402細胞的增殖抑制作用更加明顯,呈協(xié)同作用。2、索拉菲尼、沙利度胺均有良好的抗血管生成效果,而聯(lián)合用藥可使抗血管效果更加顯著。
【關鍵詞】：索拉菲尼 沙利度胺 雞胚尿囊膜 肝癌 抗血管生成
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 內(nèi)容摘要4-7
• Abstract7-14
• 第1章 緒論14-18
• 第2章 實驗材料和方法18-22
• 2.1 實驗材料18-19
• 2.2 實驗方法19-22
• 2.2.1 不同用藥方式對BEL7402細胞增殖抑制作用19-21
• 2.2.2 不同用藥方式對雞胚尿囊膜血管生成的影響21
• 2.2.3 統(tǒng)計學處理21-22
• 第3章 實驗結果22-26
• 第4章 討論26-29
• 第5章 結論29-30
• 參考文獻30-35
• 作者簡介及發(fā)表論文35-36
• 致謝36

【參考文獻】

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本文編號：1011648