本文關鍵詞：QIC2抑制CBS表達誘導肝癌細胞凋亡的研究

  更多相關文章： QIC2化合物 CBS/H_2S體系 抗肝癌活性 氧化應激

【摘要】：目的:探究胱硫醚-β-合酶(cystathionine-β-synthase,CBS)在肝癌細胞中的作用及QIC2誘導肝癌細胞凋亡的作用及機制。方法:RT-PCR及Western blot方法檢測CBS在肝癌及肝正常細胞中的表達水平;MTT及EdU檢測下調CBS的表達或抑制CBS的活性對肝癌細胞生長增殖的影響;流式細胞儀分析下調CBS的表達對肝癌細胞凋亡的影響;Western blot檢測下調CBS的表達對凋亡相關蛋白及HO-1蛋白表達的影響;通過Western blot及MTT法從化合物QICs(QIC0,QIC1,QIC2和QIC3)中篩選具有抗肝癌活性的CBS抑制劑;應用MTT方法檢測篩選出的QIC2對肝癌SMMC-7721細胞的抗癌活性,以阿霉素和蘇尼替尼為陽性對照;采用EdU實驗檢測QIC2對肝癌SMMC-7721細胞增殖的影響;流式細胞儀分析QIC2對肝癌SMMC-7721細胞周期及細胞凋亡的影響;Western blot方法檢測QIC2對肝癌SMMC-7721細胞中CBS、HO-1以及凋亡相關蛋白表達的影響;DCF法檢測細胞內ROS水平;DTNB法檢測細胞內GSH水平。結果:1、RT-PCR及Western blot結果顯示,與人正常肝細胞比較,在肝癌SMMC-7721及HepG2細胞中CBS mRNA和蛋白水平均呈過表達。2、下調CBS表達或抑制CBS活性可抑制肝癌SMMC-7721細胞的生長和增殖。3、下調CBS表達或抑制CBS活性可誘導肝癌SMMC-7721細胞凋亡,增加凋亡相關蛋白Bax/Bcl-2比值,激活caspase-3級聯(lián)反應。4、下調CBS表達可抑制肝癌SMMC-7721細胞中HO-1表達,并增加細胞內的ROS水平。5、QICs類化合物中,QIC2明顯抑制肝癌SMMC-7721細胞中CBS的表達及肝癌SMMC-7721細胞的生長。6、QIC2對肝癌SMMC-7721細胞的抑制活性明顯強于陽性對照蘇尼替尼,但弱于陽性對照阿霉素。7、QIC2可抑制肝癌SMMC-7721細胞增殖。8、QIC2可誘導肝癌SMMC-7721細胞凋亡,激活caspase 3級聯(lián)反應。9、QIC2可抑制肝癌SMMC-7721細胞中HO-1表達,增加細胞中ROS水平,降低細胞中GSH水平,由此增加細胞的氧化應激。結論:1、CBS可調控肝癌細胞的生長、增殖及凋亡。2、CBS對肝癌細胞凋亡的調控作用可能與氧化應激有關。3、QIC2可能通過下調CBS的表達,抑制肝癌SMMC-7721細胞的生長及增殖。4、QIC2可能通過增加細胞的氧化應激來誘導肝癌SMMC-7721細胞的凋亡。
【關鍵詞】：QIC2化合物 CBS/H_2S體系 抗肝癌活性 氧化應激
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 第一章 引言11-13
• 第二章 CBS在肝癌細胞中的生物學作用13-33
• 2.1 實驗材料13-20
• 2.1.1 主要儀器13-14
• 2.1.2 細胞株14
• 2.1.3 藥品和試劑14-16
• 2.1.4 試劑與藥品的配制16-20
• 2.2 實驗方法20-24
• 2.2.1 細胞培養(yǎng)20
• 2.2.2 RT-PCR20-21
• 2.2.3 siRNA轉染21-22
• 2.2.4 Western Blot22
• 2.2.5 MTT檢測細胞活性22-23
• 2.2.6 Edu assay23
• 2.2.7 細胞凋亡檢測23-24
• 2.2.8 活性氧檢測24
• 2.2.9 內源性硫化氫的檢測24
• 2.2.10 統(tǒng)計學分析24
• 2.3 實驗結果24-30
• 2.3.1 CBS在肝正常細胞和肝癌細胞中的表達水平24-25
• 2.3.2 抑制CBS的表達及活性對肝癌細胞內源性硫化氫的釋放及細胞生長的影響25-27
• 2.3.3 抑制CBS的表達對肝癌細胞增殖的影響27-28
• 2.3.4 抑制CBS對凋亡及凋亡相關蛋白的影響28-29
• 2.3.5 抑制CBS對HO-1 蛋白以及氧化應激的影響29-30
• 2.4 討論30-31
• 2.5 小結31-33
• 第三章 QIC2對肝癌細胞的作用與機制研究33-51
• 3.1 實驗材料33-39
• 3.1.1 主要儀器33-34
• 3.1.2 細胞株34
• 3.1.3 藥品和試劑34-35
• 3.1.4 試劑與藥品的配制35-39
• 3.2 實驗方法39-42
• 3.2.1 細胞培養(yǎng)39
• 3.2.2 Western Blot39-40
• 3.2.3 MTT檢測細胞活性40
• 3.2.4 Edu assay40
• 3.2.5 活性氧檢測40-41
• 3.2.6 GSSG和GSH檢測41
• 3.2.7 內源性硫化氫的檢測41-42
• 3.2.8 細胞凋亡檢測42
• 3.2.9 統(tǒng)計學分析42
• 3.3 實驗結果42-48
• 3.3.1 AOAA對肝癌細胞和肝正常細胞生長的影響42-43
• 3.3.2 C類化合物對肝癌SMMC-7721細胞中CBS表達及細胞活性的影響43-44
• 3.3.3 QIC2對肝癌SMMC-7721細胞生長的影響44
• 3.3.4 QIC2對肝癌SMMC-7721細胞增殖的影響44-45
• 3.3.5 QIC2對肝癌SMMC-7721細胞凋亡的影響45-46
• 3.3.6 QIC2對肝癌細胞CBS /硫化氫系統(tǒng)和氧化應激影響46-48
• 3.4 討論48-50
• 3.5 小結50-51
• 參考文獻51-55
• 附錄55-57
• 致謝57-59
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文59-60

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