本文關鍵詞：LukS-PV通過miR-125a-3p調控白血病細胞凋亡的機制研究

  更多相關文章： PV-殺白細胞毒素 白血病細胞 凋亡 miR-125a-3p 細菌毒素

【摘要】：目的：LukS-PV是由金黃色葡萄球菌分泌的PV-殺白細胞素(PVL)雙組分之一,本課題組經(jīng)前期研究發(fā)現(xiàn)重組LukS-PV在體內外具有促進急性髓細胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)細胞株HL-60凋亡和分化的作用,并且能夠在體外促進AML細胞株THP-1的分化。本實驗進一步研究LukS-PV對人單核細胞白血病細胞THP-1是否有促凋亡作用以及對AML病人細胞是否有抗白血病作用,并探討其作用機制,為尋求白血病新的靶向治療藥物奠定基礎。方法：(1)體外培養(yǎng)THP-1細胞至對數(shù)生長期,分別加入0.25,0.50,1.00μMLukS-PV作用THP-1細胞,24h后流式細胞術檢測細胞凋亡率。(2)收集培養(yǎng)AML病人的原代細胞,加入1.00 μM LukS-PV,24h后流式細胞術檢測細胞凋亡率。(3)使用1.00 μM LukS-PV刺激不同來源的AML病人的原代細胞和THP-1細胞,24h后實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測miR-125a-3p的表達量。(4)構建miR-125a-3p過表達和抑制表達慢病毒載體并轉染THP-1細胞,使用1.00 μM LukS-PV刺激轉染后的THP-1細胞,24h后Western blotting檢測細胞凋亡相關蛋白。(5)采用生物信息學預測技術對miR-125a-3p的靶基因進行預測,篩選凋亡相關基因,使用雙熒光素酶報告基因實驗對篩選的靶基因進行驗證。結果：(1) LukS-PV促進THP-1細胞的凋亡,并且凋亡作用呈劑量依賴性。(2)LukS-PV能夠促進AML病人的原代細胞的凋亡。(3)經(jīng)過LukS-PV刺激之后,THP-1細胞和AML病人的原代細胞中miR-125a-3p的表達量顯著升高。(4)miR-125a-3p的過表達可以促進THP-1細胞的凋亡。(5) miR-125a-3p的低表達可以減少LukS-PV引起的THP-1細胞的凋亡。(6)雙熒光素酶報告基因實驗證實Bcl-2是miR-125a-3p的直接靶基因。結論：(1) LukS-PV可以促進THP-1細胞的凋亡并呈劑量依賴性。(2) LukS-PV可以促進急性髓系白血病原代細胞的凋亡。(3)LukS-PV可能通過miR-125a-3p/Bcl-2通路調控急性髓系白血病細胞的凋亡。
【關鍵詞】：PV-殺白細胞毒素 白血病細胞 凋亡 miR-125a-3p 細菌毒素
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733.7
【目錄】：

• 中英文縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 1 前言11-13
• 2 材料和方法13-22
• 2.1 實驗材料13-16
• 2.1.1 實驗儀器13-14
• 2.1.2 主要試劑14-15
• 2.1.3 主要試劑配置15-16
• 2.2 臨床材料16
• 2.3 實驗方法16-22
• 2.3.1 THP-1細胞的培養(yǎng)16
• 2.3.2 AML病人原代細胞的分離和培養(yǎng)16-17
• 2.3.3 LukS-PV蛋白表達和純化17-18
• 2.3.4 Bradford蛋白濃度測定18
• 2.3.5 Annexi nV/PI熒光雙染—流式細胞儀檢測細胞凋亡18
• 2.3.6 RNA的提取,miR-125a-3p的逆轉錄和熒光定量PCR18-19
• 2.3.7 慢病毒的構建和轉染19-20
• 2.3.8 caspase3活性檢測20
• 2.3.9 Western blotting檢測凋亡相關蛋白20-21
• 2.3.10 miR-125a-3p靶基因預測和驗證(雙熒光素酶報告基因)21-22
• 2.4 統(tǒng)計學處理22
• 3 結果22-34
• 3.1 LukS-PV促進THP-1細胞凋亡的檢測22-23
• 3.2 LukS-PV促進AML原代細胞凋亡的檢測23-26
• 3.3 LukS-PV刺激AML細胞株和AML原代細胞后miR-125a-3p表達量的檢測26-28
• 3.4 miR-125a-3p的過表達可以促進THP-1細胞的凋亡28-30
• 3.5 miR-125a-3p的低表達可以減少LukS-PV引起的THP-1細胞的凋亡30-31
• 3.6 雙熒光素酶報告基因實驗證實Bcl-2是miR-125a-3p的直接靶基因31-34
• 4 討論34-39
• 5 結論39-40
• 參考文獻40-44
• 附錄44-45
• 致謝45-46
• 綜述46-54
• 參考文獻51-54

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;用生物工程分子防治白血病[J];浙江中醫(yī)雜志;2000年11期

2 殷慧君,劉樂宇;殘留白血病細胞的定量檢測及其臨床意義[J];中國小兒血液;2000年04期

3 ;白血病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年03期

4 陸道培;根治白血病的道路[J];中華內科雜志;2001年04期

5 ;白血病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年02期

6 ;白血病[J];國外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年08期

7 ;中國科學家探索出白血病調控治療新模式[J];科技廣場;2002年05期

8 ;白血病重要致病因素被發(fā)現(xiàn)[J];發(fā)明與創(chuàng)新;2003年11期

9 余蓮,陳隆天;白血病患者血清腫瘤特異性生長因子水平及其與治療效果的關系[J];臨床血液學雜志;2003年01期

10 ;白血病[J];微量元素與健康研究;2003年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陸化;丁燁;盧瑞南;吳雨潔;張建富;仇海榮;劉澎;李建勇;;骨髓間充質干細胞對急性淋巴細胞白血病小鼠體內白血病細胞生長的影響[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

2 夏駿;周永烈;邱蓮女;高瑞蘭;;四嗪二甲酰胺阻滯白血病細胞周期及其機制的研究[A];2013年國家級“惡性血液系統(tǒng)疾病診治新進展”學習班暨學術年會資料匯編[C];2013年

3 李慶華;藺亞妮;龐天翔;;RNA結合蛋白Sam68在白血病細胞中表達研究[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

4 陳幸華;梁雪;張曦;高蕾;張誠;孔佩艷;彭賢貴;龔奕;王慶余;;人臍血源基質細胞新型微環(huán)境對殘留白血病細胞的作用及機制探討[A];第12屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2009年

5 歐陽仁榮;;21世紀初期治愈白血病?——白血病研究回顧與展望[A];中國臨床腫瘤學教育專輯（2001）——中國抗癌協(xié)會臨床腫瘤學協(xié)作中心（CSCO）第五屆年會論文集[C];2001年

6 許小平;費新紅;高磊;江千里;;多藥耐藥微小殘留白血病模型的建立[A];第九屆全國實驗血液學會議論文摘要匯編[C];2003年

7 陳立君;孫明艷;馬軍;;流式細胞儀雙色免疫熒光技術分析微量殘留白血病細胞的研究[A];慶祝黑龍江省免疫學會成立十周年（1993—2003）論文集[C];2003年

8 張忠玲;宋宇;李國忠;周晉;;白血病致顱內靜脈竇血栓形成15例報告[A];中華醫(yī)學會第七次全國神經(jīng)病學學術會議論文匯編[C];2004年

9 岑建農(nóng);陳子興;李振江;邱橋成;;骨髓間充質干細胞對白血病細胞的作用[A];2005年華東六省一市血液病學學術會議暨浙江省血液病學學術年會論文匯編[C];2005年

10 李建勇;錢思軒;吳漢新;張閏;洪鳴;仇海榮;肖冰;;急性淋巴細胞白血病異基因造血干細胞移植后供者源白血病[A];2005年華東六省一市血液病學學術會議暨浙江省血液病學學術年會論文匯編[C];2005年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃衍強;治療白血病中藥不是“預備役”[N];健康報;2007年

2 記者 胡德榮;腺花素可誘導白血病細胞分化[N];健康報;2012年

3 記者 夏茂盛;捷克白血病研究獲重大進展[N];光明日報;2013年

4 心;什么是白血病[N];中國教育報;2001年

5 黃衍強 張利鋒;治療白血病不能見好就收[N];健康報;2003年

6 范程程;如何治療白血病問答[N];健康報;2004年

7 盧晶、余寧寧;我科研人員發(fā)現(xiàn)白血病“元兇”[N];人民日報;2005年

8 時仲省;白血病貧血千萬別補鐵[N];健康時報;2006年

9 慕乃強 謝曉輝;白血病患者為何這么多[N];焦作日報;2006年

10 山東省淄博市紅十字會血液病醫(yī)院院長、副主任中醫(yī)師 黃衍強;治療白血病中藥亦有優(yōu)勢[N];上海中醫(yī)藥報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄭曉輝;白血病細胞ADRM1的表達及其作用研究[D];福建醫(yī)科大學;2014年

2 莊泳;轉錄因子AIOLOS在急性B淋巴細胞白血病中的表達及其功能的研究[D];山東大學;2015年

3 許益笑;經(jīng)體外環(huán)路光動力療法對白血病細胞的殺傷作用及機制研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

4 王魯群;鼠尾草酸逆轉白血病細胞多藥耐藥的體內實驗研究[D];山東大學;2015年

5 張帆;共同抑制哺乳動物雷帕霉素靶復合物2和熱休克蛋白90對白血病細胞的殺傷作用[D];中南大學;2012年

6 丁光生;電磁輻射凈化自體造血干細胞移植物中殘留白血病細胞的機制研究[D];華南理工大學;2002年

7 張鵬霞;齊墩果酸對人類白血病細胞的抑制作用及其機制的探討[D];吉林大學;2008年

8 趙克溫;磷脂爬行酶1的表達調控及其在白血病細胞分化中的作用研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2005年

9 許文林;白血病細胞血管內皮生長因子自分泌鏈作用的實驗研究[D];蘇州大學;2004年

10 郭萌;低氧和低氧模擬化合物誘導白血病細胞分化和凋亡的實驗研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2007年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 金文東;白細胞和白血病細胞熒光光譜特征研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

2 林黎明;白血病微環(huán)境中成骨細胞與白血病細胞相互作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2014年

3 李亞飛;CD58在兒童B-ALL中的表達及其用于MRD檢測的可行性研究[D];鄭州大學;2015年

4 李齊;白血病細胞糖代謝產(chǎn)物的分析[D];復旦大學;2014年

5 柳曉春;一種南極真菌來源的ETP類化合物HDN-1抗白血病作用與機制研究[D];中國海洋大學;2014年

6 鐘錦潮;生物活性肽HP7抑制白血病細胞增殖的作用研究[D];福州大學;2014年

7 孫曉曦;LukS-PV通過miR-125a-3p調控白血病細胞凋亡的機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2016年

8 王建玲;骨髓間充質干細胞分泌的exosomes在白血病細胞耐藥性中的作用研究[D];山東大學;2016年

9 段寶敏;妊娠合并白血病22例臨床病例分析[D];山東大學;2016年

10 陳亞;兒童白血病合并水痘臨床特征分析[D];重慶醫(yī)科大學;2016年

，

本文編號：1001367