發(fā)布時(shí)間：2017-09-30 03:08

  本文關(guān)鍵詞：基于膽堿能抗炎通路的艾灸治療實(shí)驗(yàn)性RA作用機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 艾灸 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 膽堿能抗炎通路 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

【摘要】：目的： 本研究依據(jù)“艾灸治療RA抗炎效應(yīng)明確,膽堿能抗炎通路對(duì)全身和局部炎癥均具有明顯的抑制作用”的基本事實(shí),以針灸理論為指導(dǎo),艾灸家兔“腎俞”、“足三里”治療實(shí)驗(yàn)性RA,圍繞滑膜炎癥關(guān)鍵病理環(huán)節(jié),選擇膽堿能抗炎通路作為研究切入點(diǎn),以“艾灸刺激一膽堿能抗炎通路一抗炎效應(yīng)”為研究主線,運(yùn)用神經(jīng)阻斷、免疫組化、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等方法技術(shù),探索膽堿能抗炎通路在艾灸治療RA抗炎效應(yīng)中的作用機(jī)制,對(duì)于深化艾灸治療RA的原理研究、豐富灸法的科學(xué)內(nèi)涵具有重要的價(jià)值和意義。 方法： 將日本大耳白兔隨機(jī)分為正常對(duì)照組、RA模型組、艾灸治療組、艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組、艾灸治療假手術(shù)組,用福氏完全佐劑塑造RA疾病模型,運(yùn)用頸部左側(cè)迷走神經(jīng)干切斷術(shù)作為干預(yù)手段,艾灸“腎俞”、“足三里”治療。1.觀察RA家兔的整體狀況、體重、膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)、滑膜組織炎癥病理形態(tài)；2.采用Elisa法檢測(cè)滑膜液中TNF-α、IL-1、IL-6、HMGB1含量；3.采用Elisa法檢測(cè)血清中a7nAChR和ChAT的含量；分別采用免疫組化法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)滑膜組織中a7nAChR、ChAT的蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)。4.采用免疫組化法檢測(cè)滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、IκBα、IKKβ的表達(dá)。 結(jié)果： 1.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以明顯改善RA家兔全身狀況、膝關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)滑膜炎癥病理變化,而在切斷迷走神經(jīng)的情況下其作用顯著降低。 2.滑膜液中細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較,RA模型組關(guān)節(jié)滑膜液中TNFα、IL-1、IL-6、HMGB1含量顯著增高(P0.01)；與RA模型組比較,艾灸治療組、艾灸治療假手術(shù)組關(guān)節(jié)滑膜液中TNFα、IL-1、IL-6、 HMGB1含量顯著降低(P0.01),而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明顯降低((P0.05)；與艾灸治療組比較,艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組滑膜液中TNFα、IL-1、 IL-6、HMGB1含量顯著增高(P0.01),但艾灸治療假手術(shù)組無(wú)明顯增高(P0.05)。 3.α7nAChR、ChAT表達(dá)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較,模型組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.01)；與模型組比較,艾灸組和假手術(shù)組血清中α7nAChR、 ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)均顯著增高(P0.01),而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明顯增高(P0.05)；與艾灸組比較,艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組血清中α7nAChR、ChAT含量、滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達(dá)和mRNA表達(dá)均顯著降低(P0.01),但假手術(shù)組無(wú)明顯降低(P0.05)。 4.①NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ表達(dá)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較,模型組滑膜組織中NF-κBp65、NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的表達(dá)顯著增高(P0.01)；與模型組比較,艾灸組和假手術(shù)組滑膜組織中NF-κBp65、 NF-KBp50、p-IκBα、IKKβ的表達(dá)顯著降低(P0.01),而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明顯降低(P0.05)；與艾灸組比較,艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組滑膜組織中NF-KBp65、NF-κBp50、p-IKBα、IKKβ的表達(dá)顯著增高(P0.01),但假手術(shù)組無(wú)明顯增高(P0.05)。 ②IκBα表達(dá)結(jié)果顯示：模型組與正常對(duì)照組相比較,模型組滑膜組織中IκBα的表達(dá)顯著降低(P0.01)；與模型組比較,艾灸組和假手術(shù)組滑膜組織中IκBα的表達(dá)顯著增高(P0.01),而艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組無(wú)明顯增高(P0.05)；與艾灸組比較,艾灸治療迷走神經(jīng)切斷組滑膜組織中IκBα的表達(dá)顯著降低(P0.01),但假手術(shù)組無(wú)明顯降低(P0.05)。 結(jié)論： 1.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以明顯改善實(shí)驗(yàn)性RA家兔全身狀況、膝關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)滑膜炎癥病理變化,表明艾灸具有明確的抗炎消腫、抑制滑膜炎癥作用,而在切斷迷走神經(jīng)的情況下其抗炎作用顯著降低,提示艾灸治療RA的抗炎效應(yīng)可能與興奮膽堿能抗炎通路密切相關(guān)。 2.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以抑制實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜液中細(xì)胞因子TNF-α、IL-1、IL-6和HMGB1水平,但在切斷迷走神經(jīng)的情況下其作用顯著下降,提示興奮膽堿能抗炎通路可能是艾灸抑制實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞分泌促炎細(xì)胞因子的重要機(jī)制之一。 3.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以上調(diào)ChAT在RA家兔外周血和滑膜組織中的表達(dá),激活免疫系統(tǒng)的固有膽堿能系統(tǒng),但在切斷迷走神經(jīng)的情況下其作用顯著降低,提示艾灸可能通過(guò)興奮迷走神經(jīng)釋放ACh,并與免疫細(xì)胞表面的a7nAChR結(jié)合,從而激活免疫細(xì)胞的固有膽堿能系統(tǒng),轉(zhuǎn)化為免疫系統(tǒng)內(nèi)彌散的、持續(xù)的免疫調(diào)節(jié)。 4.艾灸家兔“腎俞”、“足三里”可以抑制RA家兔滑膜組織中NF-κBp65、 NF-κBp50、p-IκBα、IKKβ的蛋白表達(dá),上調(diào)IκBα的蛋白表達(dá),但在切斷迷走神經(jīng)的情況下其作用顯著降低,因此推測(cè)艾灸可能通過(guò)抑制IKK/IκB/NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活化,改善RA家兔滑膜NF-κB的高調(diào)控狀態(tài),抑制滑膜細(xì)胞炎性細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)的合成和分泌,從而實(shí)現(xiàn)其抗炎效應(yīng),膽堿能抗炎通路在其中具有重要作用。
【關(guān)鍵詞】：艾灸 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 膽堿能抗炎通路 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R245
【目錄】：

• 中文摘要2-5
• Abstract5-9
• 目錄9-13
• 中英文縮略詞表13-15
• 引言15-18
• 第一部分 切斷迷走神經(jīng)對(duì)艾灸治療實(shí)驗(yàn)性RA家兔抗炎效應(yīng)的影響18-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物18
• 1.2 主要試劑18-19
• 1.3 實(shí)驗(yàn)藥品19
• 1.4 主要儀器19
• 1.5 主要試劑的配置19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-23
• 2.1 動(dòng)物分組20
• 2.2 頸迷走神經(jīng)干切斷術(shù)20
• 2.3 RA模型塑造20-21
• 2.4 艾灸治療方法21
• 2.5 滑膜組織取樣21
• 2.6 檢測(cè)指標(biāo)方法21-23
• 2.6.1 一般情況觀察21-22
• 2.6.2 膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)測(cè)定22
• 2.6.3 滑膜組織形態(tài)學(xué)檢測(cè)22-23
• 2.7 統(tǒng)計(jì)處理方法23
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析23-31
• 3.1 動(dòng)物一般情況比較23-24
• 3.2 各組家兔體重增長(zhǎng)情況24-25
• 3.3 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)的影響25-28
• 3.3.1 各組家兔右膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)的比較25-26
• 3.3.2 各組家兔左膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)的比較26-28
• 3.4 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜病理形態(tài)的影響28-31
• 3.4.1 光鏡下滑膜組織病理形態(tài)28-29
• 3.4.2 光鏡下滑膜組織病變程度與積分29-31
• 第二部分 切斷迷走神經(jīng)對(duì)艾灸調(diào)控實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞分泌功能的影響31-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料31-32
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物31
• 1.2 主要試劑31
• 1.3 主要儀器31-32
• 2 實(shí)驗(yàn)方法32-33
• 2.1 動(dòng)物分組及處理32
• 2.2 滑膜液的取樣32
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)方法32-33
• 2.3.1 各組家兔滑膜液中TNF-α含量的檢測(cè)32-33
• 2.3.2 各組家兔滑膜液中IL-1含量的檢測(cè)33
• 2.3.3 各組家兔滑膜液中IL-6含量的檢測(cè)33
• 2.3.4 各組家兔滑膜液中HMGB1含量的檢測(cè)33
• 2.4 統(tǒng)計(jì)處理方法33
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析33-38
• 3.1 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜液TNF-α含量的影響33-34
• 3.2 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜液IL-1含量的影響34-35
• 3.3 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜液IL-6含量的影響35-36
• 3.4 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜液HMGB1含量的影響36-38
• 第三部分 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔膽堿能神經(jīng)功能及相關(guān)受體的影響38-59
• 1 實(shí)驗(yàn)材料38-40
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38
• 1.2 主要試劑38-39
• 1.3 主要儀器39-40
• 2 實(shí)驗(yàn)方法40-49
• 2.0 動(dòng)物分組及處理40
• 2.1 血清的取樣40
• 2.2 滑膜組織取樣40
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)方法40-49
• 2.3.1 各組家兔血清中α7nAChR、ChAT含量的檢測(cè)40-41
• 2.3.2 各組家兔滑膜組織中α7nAChR、ChAT蛋白表達(dá)的檢測(cè)41-43
• 2.3.3 各組家兔滑膜組織中α7nAChRmRNA和ChATmRNA表達(dá)水平檢測(cè)43-49
• 2.3.3.1 組織總RNA的抽提43-44
• 2.3.3.2 組織總RNA的鑒定與評(píng)估44-46
• 2.3.3.3 RNA逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA46
• 2.3.3.4 引物設(shè)計(jì)46-47
• 2.3.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)47-48
• 2.3.3.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)結(jié)果分析48-49
• 2.4 統(tǒng)計(jì)處理方法49
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析49-59
• 3.1 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔血清中α7nAChR含量的影響49-50
• 3.2 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔血清中ChAT含量的影響50-51
• 3.3 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜組織α7nAChR蛋白表達(dá)的影響51-52
• 3.4 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜組織中ChAT蛋白表達(dá)的影響52-53
• 3.5 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜組織α7nAChRmRNA表達(dá)水平的影響53-56
• 3.5.1 滑膜組織α7nAChRmRNART-PCR擴(kuò)增曲線及熔解曲線分析53-55
• 3.5.2 滑膜組織α7nAChRmRNA表達(dá)水平55-56
• 3.6 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜組織ChATmRNA表達(dá)水平的影響56-59
• 3.6.1 滑膜組織ChATmRNA RT-PCR擴(kuò)增曲線及熔解曲線分析56-57
• 3.6.2 滑膜組織ChATmRNA表達(dá)水平57-59
• 第四部分 切斷迷走神經(jīng)對(duì)艾灸調(diào)控實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響59-68
• 1 實(shí)驗(yàn)材料59-60
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物59
• 1.2 主要試劑59
• 1.3 主要儀器59-60
• 2 實(shí)驗(yàn)方法60-63
• 2.1 動(dòng)物分組及處理60
• 2.2 滑膜組織的取樣60
• 2.3 指標(biāo)檢測(cè)方法60-62
• 2.3.1 RA家兔滑膜組織中NF-κBp65蛋白表達(dá)的檢測(cè)61
• 2.3.2 RA家兔滑膜組織中NF-κBp50蛋白表達(dá)的檢測(cè)61-62
• 2.3.3 RA家兔滑膜組織中IκBα蛋白表達(dá)的檢測(cè)62
• 2.3.4 RA家兔滑膜組織中ρ-IκBα蛋白表達(dá)的檢測(cè)62
• 2.3.5 RA家兔滑膜組織中IKKβ蛋白表達(dá)的檢測(cè)62
• 2.4 免疫組化結(jié)果的圖象分析62
• 2.5 統(tǒng)計(jì)處理方法62-63
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析63-68
• 3.1 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜組織NF-κBp65表達(dá)的影響63-64
• 3.2 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜組織NF-κBp50表達(dá)的影響64-65
• 3.3 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜組織IκBα表達(dá)的影響65-66
• 3.4 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜組織ρ-IκBα表達(dá)的影響66-67
• 3.5 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔關(guān)節(jié)滑膜組織IKKβ表達(dá)的影響67-68
• 討論68-104
• 1 中醫(yī)對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的認(rèn)識(shí)68-71
• 1.1 中醫(yī)對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病名的認(rèn)識(shí)68-69
• 1.2 中醫(yī)對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)69-71
• 1.2.1 正氣虧虛,腠理空虛是痹證發(fā)生的根本內(nèi)在因素69-70
• 1.2.2 感受外邪是致痹的重要條件70-71
• 1.2.3 “痰瘀凝結(jié),經(jīng)脈不通”是痹癥發(fā)病的病理關(guān)鍵71
• 2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)RA的認(rèn)識(shí)71-75
• 2.1 滑膜炎癥72
• 2.2 細(xì)胞因子72-74
• 2.3 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路74-75
• 3 膽堿能抗炎通路與炎癥75-78
• 3.1 膽堿能抗炎通路的炎癥調(diào)節(jié)機(jī)制75-77
• 3.2 膽堿能抗炎通路對(duì)炎癥因子合成與釋放的影響77
• 3.3 膽堿能抗炎通路的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)77-78
• 3.4 膽堿能抗炎通路調(diào)控炎癥性疾病78
• 4 動(dòng)物模型的選擇78-80
• 5 灸法使用與穴位的選擇80-83
• 6 膽堿能抗炎通路在艾灸治療實(shí)驗(yàn)性RA家兔抗炎效應(yīng)中的作用83-86
• 6.1 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔整體狀況及體重的影響83
• 6.2 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)的影響83-84
• 6.3 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜組織病理形態(tài)的影響84-86
• 7 膽堿能抗炎通路在艾灸調(diào)控實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞分泌功能中的作用86-92
• 7.1 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜液TNF-α含量的影響及其意義86-88
• 7.2 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜液IL-1含量的影響及其意義88-89
• 7.3 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜液IL-6含量的影響及其意義89-90
• 7.4 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜液HMGB1含量的影響及其意義90-92
• 8 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔膽堿能神經(jīng)功能及相關(guān)受體的影響92-95
• 8.1 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔血清及滑膜組織中α7nAChR表達(dá)的影響及其意義93-94
• 8.2 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔血清及滑膜組織中ChAT表達(dá)的影響及其意義94-95
• 9 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的影響及其膽堿能神經(jīng)的調(diào)控95-104
• 9.1 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞NF-κBp65、NF-κBp50表達(dá)的影響及其膽堿能神經(jīng)的調(diào)控99-100
• 9.2 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞ρ-IκBα、IκBα含量的影響及其膽堿能神經(jīng)的調(diào)控100-102
• 9.3 艾灸對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA家兔滑膜細(xì)胞IKKβ含量的影響及其膽堿能神經(jīng)的調(diào)控102-104
• 結(jié)論104-105
• 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)105-106
• 問(wèn)題與展望106-107
• 致謝107-108
• 參考文獻(xiàn)108-118
• 附件118-137
• 附件1：綜述118-128
• 參考文獻(xiàn)124-128
• 附件2：附圖128-137
• 1. 頸左側(cè)迷走神經(jīng)干切斷術(shù)128-129
• 2. 兔滑膜組織病理圖譜129-130
• 3. 兔滑膜組織免疫組化圖片130-137
• 在讀期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、專著及科研成果137-138

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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7 蔡青,韓星海,孟濟(jì)明;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病理生理及生物學(xué)治療進(jìn)展[J];中華風(fēng)濕病學(xué)雜志;2000年03期

8 胡森;宋琪;石德光;呂藝;盛志勇;;興奮膽堿能抗炎通路對(duì)內(nèi)毒素致心肌損害的保護(hù)作用[J];感染.炎癥.修復(fù);2008年03期

9 田易軍;王磊;耿世佳;包呈梅;金芳;胡森;;電針足三里穴減輕大鼠術(shù)后腹腔粘連的實(shí)驗(yàn)研究[J];感染.炎癥.修復(fù);2008年03期

10 胡森;;興奮膽堿能抗炎通路干預(yù)炎癥與缺血引起的器官損害[J];感染.炎癥.修復(fù);2008年04期

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