本文關鍵詞：體外適宜溫熱刺激絡脈相關血管內皮細胞后啟動“通絡行血”效應的細胞生物學機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：以絡脈相關血管內皮細胞為研究載體,在灸法作用本質的適宜溫熱刺激作用下,觀察血管內皮細胞分泌血管舒縮調控物質ET-1、TM、PGI2含量的變化,進一步探討絡脈“感受刺激”后啟動“通絡行血”基本細胞生物學機制。 方法：運用靜脈灌注酶消化法進行人臍靜脈血管內皮細胞的體外培養(yǎng),應用(Ⅷ因子)免疫細胞化學染色法鑒定人臍靜脈血管內皮細胞。將人臍靜脈血管內皮細胞分為正常組和適宜溫熱刺激組,(適宜溫熱為40℃,此溫度根據本系列課題前期研究獲得),適宜溫熱刺激組以40-C刺激30min,每日2次,連續(xù)刺激3日。倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的動態(tài)變化。用ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測定)法檢測血管內皮細胞釋放ET-1、TM的含量,用EIA(酶免疫分析)法檢測血管內皮細胞釋放PGI2的含量。 結果：1.細胞形態(tài)變化：原代人臍靜脈血管內皮細胞(Human umbilical venous endothelial cells,HUVECs)的形態(tài)多是小多角形、短梭形或者球形,細胞均是單層生長且互不重疊。融合后的人臍靜脈血管內皮細胞為扁平的多角形,多呈典型的鋪路石或鵝卵石樣排列,邊界清楚；細胞核清晰,細胞核多為橢圓形或圓形,細胞核內染色質稀疏且空亮,核仁1-2個。傳代的人臍靜脈血管內皮細胞多呈典型的鋪路石或鵝卵石樣排列,邊界清楚,細胞核清晰,細胞核多為橢圓形或圓形,細胞核內染色質稀疏且空亮,核仁1-2個；傳至3-4代的人臍靜脈血管內皮細胞生長速度減慢,出現折光性增加、胞體增大、胞突變細、胞漿內顆粒和空泡增加、細胞核分裂相減少等一系列衰老征象。適宜溫熱刺激后,人臍靜脈血管內皮細胞形態(tài)發(fā)生變化,多數細胞輪廓變圓,細胞間隙增大,呈鋪路石樣排列,邊界清楚,細胞核清晰,細胞核多為圓形,細胞核內染色質稀疏且空亮。人臍靜脈血管內皮細胞采用DAB免疫細胞化學Ⅷ因子染色,封片后光鏡下觀察到胞漿中有棕黃色的顆粒。 2.適宜溫熱刺激后絡脈相關血管內皮細胞ET-1的含量較正常組有所降低,且差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P0.05)；TM的含量較正常組有所升高,且差異具有極顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)；PGI2的含量較正常組有所升高,且差異具有極顯著統(tǒng)計學意義(P0.01)。 結論：1.體外適宜溫熱刺激可能通過降低絡脈相關血管內皮細胞中ET-1的含量,發(fā)揮舒張血管作用,實現絡脈“通絡行血”的作用。 2.體外適宜溫熱刺激促進絡脈相關血管內皮細胞TM的釋放,可能通過其抗凝維持血液正常運行的作用,實現絡脈“行血”的作用。 3.體外適宜溫熱刺激能夠促進絡脈相關血管內皮細胞PGI2的釋放,一方面可能通過促進血管擴張達到“通”,另一方面可能通過抑制血小板聚集達到“行血”作用。 4.在體外適宜溫熱刺激作用下,絡脈“通絡行血”功效的產生可能通過促進血管內皮細胞釋放TM、PGI2,抑制ET-1分泌,以維持血液正常運行及血管正常舒縮功能而達到“通絡行血”作用。
【關鍵詞】：絡脈 灸法 適宜溫熱刺激 人臍靜脈血管內皮細胞 內皮素1(ET-1) 血栓調節(jié)蛋白(TM) 前列環(huán)素(PGI_2)
【學位授予單位】：貴陽中醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R245
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• Abstracts8-11
• 引言11-13
• 1 材料13-16
• 1.1 臍帶來源13
• 1.2 主要試劑13-14
• 1.3 主要儀器設備14
• 1.4 主要實驗用液成分及配制14-16
• 2 方法16-25
• 2.1 人臍靜脈血管內皮細胞的原代、傳代培養(yǎng)及鑒定16-20
• 2.2 體外適宜溫熱刺激對絡脈相關血管內皮細胞相關因子表達的影響20-24
• 2.3 統(tǒng)計分析24-25
• 3 結果25-27
• 3.1 人臍靜脈血管內皮細胞的形態(tài)變化25
• 3.2 鑒定結果25
• 3.3 體外適宜溫熱刺激對絡脈相關血管內皮細胞ET-1含量的影響25-26
• 3.4 體外適宜溫熱刺激對絡脈相關血管內皮細胞TM含量的影響26-27
• 3.5 體外適宜溫熱刺激對絡脈相關血管內皮細胞PGI_2含量的影響27
• 4 討論27-35
• 4.1 絡脈與血管的相關性27-29
• 4.2 血絡與血管內皮細胞的相關性29-30
• 4.3 灸法“溫通”作用機制及適宜溫度確定30-31
• 4.4 適宜溫熱刺激對絡脈相關血管內皮細胞ET-1含量的影響31
• 4.5 適宜溫熱刺激對絡脈相關血管內皮細胞TM含量的影響31-32
• 4.6 適宜溫熱刺激對絡脈相關血管內皮細胞PGI_2含量的影響32
• 4.7 絡脈“通絡行血”功效與血管內皮細胞、血管舒縮物質的相關性32-34
• 4.8 體外適宜溫熱刺激啟動絡脈相關血管內皮細胞產生“通絡行血”作用的機理探討34-35
• 5 結論35-36
• 問題與展望36-37
• 參考文獻37-40
• 附錄一：中英文對照縮略詞表40-41
• 附錄二41-69
• 綜述一41-51
• 參考文獻46-51
• 綜述二51-69
• 參考文獻60-69
• 附錄三：致謝69-70
• 附錄四：個人簡歷70-71
• 附錄五：實驗圖片71-72

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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  本文關鍵詞：體外適宜溫熱刺激絡脈相關血管內皮細胞后啟動“通絡行血”效應的細胞生物學機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：292019