本文關鍵詞：小鼠瞳孔對光反射觀察方法的建立及其應用研究

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【摘要】：瞳孔對光反射（pupillary light reflex，PLR）與視覺系統(tǒng)、丘腦、腦干系統(tǒng)及自主神經系統(tǒng)有著密切的關系[1]，其在視覺系統(tǒng)[2-5]、神經系統(tǒng)[6,7]及精神心理相關疾病[8,9]的診斷和評價中有著重要意義。臨床上通常采用光照法直接觀察瞳孔口徑及其變化，簡單、實用，但是影像學方法能夠客觀記錄瞳孔的細節(jié)變化和動態(tài)變化，因此后者被廣泛用于研究工作。為進一步探索PLR指標在視覺生理和眼科臨床研究中的應用，本文建立了小鼠PLR影像學檢測方法，探討了刺激光顏色、強度、麻醉藥物、束縛等因素對小鼠瞳孔對光反射的影響。同時結合視網膜電圖（electroretinogram,ERG）觀察了一種快速視網膜退行性變（retinal degeneration fast，rdf/B6）小鼠的PLR，以進一步探索視網膜功能客觀評價方法。 材料和方法 1.成年雄性C57BL/6小鼠（SPF級，購自第四軍醫(yī)大學實驗動物中心）40只用于預實驗和實驗研究。rdf/B6小鼠（SPF級）20只由第四軍醫(yī)大學航空航天醫(yī)學系動物屏障實驗室提供。 2.采用遠紅外攝像鏡頭拍攝瞳孔，通過圖像處理程序分析瞳孔圖像動態(tài)變化的原理，建立了動物PLR檢查系統(tǒng)，并用于觀察不同顏色光及其強度刺激下小鼠PLR的動態(tài)變化以及麻醉、束縛的影響；采用12通道心電圖記錄儀（ECG6511, Inc, NihonKohden）記錄束縛及麻醉狀態(tài)下小鼠的心率；采用RETIport系統(tǒng)（Roland Consult，德國）記錄ERG。 3.采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件對各實驗數據進行統(tǒng)計分析。 結果 1.刺激光強度對正常C57BL/6小鼠PLR的影響 在從2cd/m~2至256cd/m~2五個光亮度等級的白、紅、綠及藍色光刺激下，瞳孔收縮潛伏期（pupillary constriction latency,CL）無顯著變化。瞳孔收縮幅度（constrictionamplitude，CA）與白、綠和藍色的刺激光強度呈直線正相關（P0.01），而與紅色光強度無明顯相關。瞳孔收縮速度（constriction velocity，CV）及瞳孔復張速度（re-dilationvelocity，RV）與白光、綠光及藍光亮度等級呈直線負相關（P0.01），與紅色光強度無明顯相關。 2.刺激光顏色與正常C57BL/6小鼠PLR動態(tài)分析曲線參數的關系 在弱光強（2cd/m~2）刺激時，紅色光刺激時的CL較其他顏色光略有延長（P0.05）其他三種光之間無明顯差異；紅色光刺激引起的CA明顯小于白光（P0.001），但是白光與綠色光與藍色光刺激引起的CA變化之間無明顯差異；CV、RV的變化與刺激光的顏色無關。 在光強為8cd/m~2、32cd/m~2、128cd/m~2、256cd/m~2時，紅色光刺激引起的PLR的CA明顯小于白光（P0.05），藍色光刺激引起的CA值明顯大于白光（P0.05），綠色光刺激的CA與白光無明顯差異（P0.05）；紅色光引起的CV稍大于白光（P0.05），藍色光引起的CV明顯小于白光（P0.05），綠色光與白色光刺激引起的CV無明顯差異（P0.05）；紅色光引起的RV均大于白光（P0.05），藍色光引起的RV小于白光（P0.05）,綠光與白光刺激引起的RV無明顯差異（P0.05）。 3.束縛適應與麻醉藥物對小鼠PLR的影響 在束縛適應1d、2d和7d時，小鼠瞳孔直徑自主調節(jié)幅度之間無顯著差異，而在3d、4d和5d時，瞳孔直徑自主調節(jié)幅度明顯小于其他4天（P0.05）。束縛適應5天后，束縛組小鼠瞳孔初始直徑（initial pupil diameter，IPD）與塞拉嗪組小鼠之間無明顯差異，但是大于氯胺酮麻醉組及氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組（P0.01）。氯胺酮組與氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組二者之間的IPD無明顯差異；束縛組小鼠的瞳孔收縮最小值（minimum pupil diameter。minPD）與氯胺酮麻醉組及氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組相比均無明顯差異。 在強度為200cd/m~2，波長為625nm光刺激下，塞拉嗪麻醉組表現為PLR消失，瞳孔直徑未見變化。束縛組PLR的CL值小于氯胺酮組及氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組（P0.05），CA值大于后兩組（P0.01），而后兩組間無明顯差異；束縛組CV值則小于氯胺酮麻醉組CV（P0.01），氯胺酮麻醉組大于氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組（P0.01）；三組間的RV值無明顯差異。 在束縛適應的7d中小鼠心率無明顯改變。麻醉后，氯胺酮組、塞拉嗪組與氯胺酮聯(lián)合塞拉嗪麻醉組三者之間的心率無明顯差異，但均小于束縛組（P0.01），其中氯胺酮組部分小鼠出現心律不齊。 4. C57BL/6小鼠、rdf/B6小鼠彩色光ERG比較 在暗適應條件下，紅色光刺激引起C57BL/6小鼠的暗適應視桿細胞反應和最大混合反應的b波幅值較白、綠和藍光低（P0.01），潛伏期稍有延長（P0.01）；明適應后，紅色光刺激未誘發(fā)出明顯的視錐細胞反應及閃爍ERG（20Hz Flicker），藍光刺激誘發(fā)ERG的波幅值均明顯大于白光和綠光ERG的值（P0.01），后兩者之間無明顯差異。不同強度顏色光刺激rdf/B6小鼠，未誘發(fā)出任何ERG波形。 5. rdf/B6小鼠的PLR特點 在rdf/B6小鼠，30cd/m~2光強度刺激下僅藍光可以誘發(fā)出明顯PLR，且CA小于野生型小鼠（C57BL/6）（P0.01）；500cd/m~2光強度下藍、綠、白光可以誘發(fā)PLR，其CA幅值分別是藍綠白，其中藍、綠光下的CA與野生型（C57BL/6）小鼠間無明顯差異，，白光誘發(fā)PLR的CA則小于野生型小鼠（P0.05）；上述強度紅光刺激rdf/B6小鼠未記錄到明顯的PLR。 結論 1.所建立動物PLR檢查系統(tǒng)可以動態(tài)觀察有色素小鼠PLR變化，PLR的相關參數與刺激光強度和光顏色有密切關系。 2.適應性束縛可在一定程度保持C57BL/6小鼠PLR各參數值穩(wěn)定，而麻醉藥物（氯胺酮、塞拉嗪或聯(lián)合應用）對相關參數有影響，提示在麻醉條件下研究PLR時應當注意排除這些影響。 3.不同顏色光刺激下rdf/B6小鼠的PLR有明顯區(qū)別，與野生型小鼠間也有顯著的差異，提示ERG波形起源與PLR不完全相同，后者的起源更復雜。
【關鍵詞】：瞳孔對光反射 測量 刺激光亮度 刺激光顏色 內在感光性視網膜神經節(jié)細胞 小鼠 快速視網膜變性小鼠
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R85
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-16
• 文獻回顧16-32
• 第一部分 C57BL/6 小鼠 PLR 測量方法建立32-48
• 1 材料32-34
• 2 方法34-36
• 3 結果36-44
• 4 討論44-48
• 第二部分 束縛適應及麻醉藥物對 C57BL/6 小鼠瞳孔對光反射的影響48-56
• 1 材料48-49
• 2 方法49-50
• 3 結果50-54
• 4 討論54-56
• 第三部分 瞳孔對光反射檢查在快速視網膜變性小鼠視覺功能評價中的應用56-71
• 1 材料56-57
• 2 方法57-58
• 3 結果58-67
• 4 討論67-71
• 小結71-73
• 參考文獻73-84
• 附錄84-85

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前7條

1 曾濤;施云濤;彭權兵;陳南暉;馬原野;;阿片類藥物成癮者瞳孔光反射的檢測和特征提取[J];動物學研究;2010年04期

2 閆果林;吳有盛;郭群;安晶;劉新平;張作明;;昆明種小鼠與C57BL/6J小鼠磷酸二酯酶β亞單位編碼基因pde6b序列特點的比較分析[J];細胞與分子免疫學雜志;2008年02期

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6 王爭;李緒明;鄭子生;賀奇才;;瞳孔孔徑動態(tài)測量軟件的開發(fā)[J];中山大學學報論叢;2007年03期

7 汪育文;保金華;呂帆;;三種瞳孔直徑測量方法在不同測量狀態(tài)下測量結果的比較和分析[J];眼視光學雜志;2009年03期

本文編號：790155