本文關鍵詞：氟西汀對NLRP3炎癥小體激活的抑制作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：氟西汀（fluoxetine）是一種選擇性五羥色胺（serotonin，5-HT）再攝取抑制劑（selective serotonin reuptake inhibitors，SSRIs），能選擇性地抑制突觸前膜對5-HT的再攝取，從而增加突觸間隙5-HT水平，達到治療抑郁癥的目的。氟西汀因具有順應性、安全性、有效性等優(yōu)點，一直是抑郁癥治療的首選藥物。新近研究發(fā)現(xiàn)，氟西汀還具有神經(jīng)保護、抗腫瘤、抗炎等藥理作用。對全身性炎癥（如感染性休克）模型動物的研究發(fā)現(xiàn)，氟西汀能有效抑制小膠質(zhì)細胞活化以及炎癥因子分泌；氟西汀還可通過減少炎癥相關細胞、抑制白介素-1β（interleukin-1beta，IL-1β）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-alpha，TNF-α）的釋放而發(fā)揮抗炎作用。但是，氟西汀調(diào)節(jié)中樞和外周炎癥反應的分子機制目前尚未闡明。 抑郁癥是一種常見的精神類疾病，主要臨床表現(xiàn)為情緒低落，興趣減低，悲觀，缺乏主動性，自責自罪，飲食、睡眠差，嚴重者可出現(xiàn)自殺念頭和行為。世界衛(wèi)生組織預測，到2020年抑郁癥將成為繼高血壓之后第二大臨床慢性疾病。目前關于抑郁癥發(fā)病機制的研究假說包括單胺假說、受體假說、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子假說、神經(jīng)內(nèi)分泌假說以及免疫炎性假說等。1995年，Maes首次提出了抑郁癥免疫反應假說：即抑郁癥伴有免疫系統(tǒng)的激活和炎性反應。近年來研究表明炎癥因子，尤其是IL-1β在抑郁癥的病理過程中發(fā)揮非常重要的作用：臨床研究發(fā)現(xiàn)抑郁癥患者腦脊液和外周血中IL-1β、TNF-α等炎癥因子的表達水平顯癥藥物能顯著降低血清中IL-1β水平；長期溫和應激和足電擊習得性無助致抑郁的模型動物中腦內(nèi)和外周IL-1β升高，應激前腦內(nèi)注射IL-1受體拮抗劑，能阻斷動物的抑郁樣行為的產(chǎn)生。因此，，抑郁癥和炎癥相關性以及抗抑郁藥物抗炎作用的研究成為近年來基礎和臨床研究的熱點。 IL-1β主要產(chǎn)生于外周單核巨噬細胞和中樞小膠質(zhì)細胞，并依賴NLRP3炎癥小體的激活。NLRP3炎癥小體（inflammasome）是由NLRP3（也稱NALP3或者cryopyrin）、胱冬肽酶（cysteiny aspartate-specific protease，caspase-1）前體和構架蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD，ASC）組裝而成的多蛋白復合物，是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分。NLRP3屬于胞漿內(nèi)模式識別受體（pattern recognition receptors，PRRs），能識別病原相關分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）或者宿主來源的危險信號分子（damage-associated molecular patterns，DAMPs），招募和激活促炎癥蛋白酶胱冬肽酶-1（caspase-1），活化的caspase-1切割pro-IL-1β和pro-IL-18，最終生成成熟的IL-1β和IL-18。近年來研究發(fā)現(xiàn)，NLRP3炎癥小體活化與多種疾病諸如糖尿病和Alzheimer病的發(fā)生發(fā)展相關，然而其與抑郁癥的發(fā)生以及抗抑郁藥氟西汀的治療作用是否相關目前尚未見報道。 因此，本文應用C57BL/6J小鼠制備慢性溫和應激（chronic mild stress，CMS）誘導的小鼠抑郁癥模型，研究NLRP3炎癥小體介導的炎癥反應是否參與抑郁癥發(fā)病過程及其對氟西汀治療作用的影響；應用RAW264.7巨噬細胞株，研究、闡明抗抑郁癥藥物氟西汀對NLRP3炎癥小體激活的調(diào)節(jié)作用及其機制，揭示氟西汀抗抑郁作用的新機制，也為抑郁癥的治療提供新思路。 目的：研究氟西汀對NLRP3炎癥小體激活的影響及其機制。 方法：1.應用C57BL/6J小鼠，建立CMS小鼠抑郁癥模型，給予氟西汀治療，共分為三組：對照組、CMS抑郁模型組、CMS抑郁模型+氟西汀給藥組；通過糖水偏愛實驗、懸尾試驗以及強迫游泳試驗確證CMS抑郁模型是否成功。 2.應用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blotting）檢測上述三組小鼠海馬NLRP3炎癥小體各組分（NLRP3、caspase-1、IL-1β）的表達。3.分離并培養(yǎng)上述三組小鼠骨髓源性巨噬細胞（bone marrow-derived macrophages，BMDM），應用Western blotting方法檢測NLRP3炎癥小體各組分的表達（NLRP3、caspase-1）；應用酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的方法檢測分泌入細胞上清的IL-1β水平。4.應用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）/尿酸鹽晶體（monosodium urate，MSU）處理小鼠源性小膠質(zhì)細胞株BV2及小鼠源性巨噬細胞株RAW264.7，應用Western blotting檢測caspase-1、NLRP3的表達量，ELISA法檢測細胞上清液中IL-1β分泌量，觀察氟西汀對NLRP3炎癥小體激活的影響。5.應用ROS探針H2DCF-DA進行熒光定量實驗，檢測氟西汀對LPS+ATP誘導RAW264.7細胞中ROS生成的影響。6.應用Western blotting方法檢測氟西汀對ERK1/2、p38及JNK的磷酸化影響以及對核因子p65的表達變化。7.應用免疫共沉淀方法觀察氟西汀對TXNIP/PKR與NLRP3結合的影響。 結果： 1.氟西汀抑制CMS誘導的小鼠海馬及外周NLRP3炎癥小體的激活CMS誘導的小鼠抑郁癥模型中，海馬腦組織和外周骨髓源性巨噬細胞（bonemarrow-derived macrophages，BMDM）的NLRP3炎癥小體顯著激活；氟西汀能抑制CMS誘導的海馬組織和BMDM中NLRP3炎癥小體的激活。 2.氟西汀抑制LPS+ATP/MSU對NLRP3炎癥小體的激活作用氟西汀抑制LPS+ATP/MSU誘導的小膠質(zhì)細胞株BV2細胞NLRP3的表達（P 0.05）、caspase-1的活化（P 0.01）以及IL-1β的分泌（P 0.05）；同時氟西汀也能抑制巨噬細胞株RAW264.7細胞NLRP3的表達（P 0.01）、caspase-1的活化（P 0.01）以及IL-1β的分泌（P 0.01），表明氟西汀能抑制LPS+ATP/MSU誘導的NLRP3炎癥小體的激活。 3.氟西汀通過減少ROS的生成及PKR、MAPK的磷酸化而抑制NLRP3炎癥小體的激活ROS探針熒光定量分析結果顯示，氟西汀減少LPS+ATP誘導的RAW264.7細胞ROS的生成（P 0.05）；氟西汀抑制LPS+ATP誘導的RAW264.7細胞p65核移位，抑制ERK1/2、p38、JNK（MAPK）和PKR的磷酸化（P 0.05）；并且，氟西汀抑制TXNIP和NLRP3、PKR和NLRP3的相互作用，從而抑制NLRP3炎癥小體的激活。 結論： 1. NLRP3炎癥小體介導的炎癥反應與抑郁癥相關。 2.氟西汀通過抑制中樞和外周NLRP3炎癥小體激活而發(fā)揮抗炎作用。 本文工作的創(chuàng)新之處： 1.揭示NLRP3炎癥小體介導的炎癥反應與抑郁癥相關性，提示NLRP3炎癥小體可能是抑郁癥治療的新靶點； 2.闡明氟西汀抑制NLRP3炎癥小體激活而發(fā)揮抗炎作用的新機制，揭示了抗抑郁藥物的新的藥理作用。
【關鍵詞】：氟西汀 NLRP3炎癥小體 IL-1β 外周炎癥 抑郁癥
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R96
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-12
• ABSTRACT12-15
• 前言15-25
• 材料與方法25-30
• 結果30-42
• 討論42-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-56
• 綜述56-72
• 參考文獻65-72
• 攻讀碩士期間發(fā)表文章情況72-73
• 致謝73

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：氟西汀對NLRP3炎癥小體激活的抑制作用及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：336804