本文關鍵詞：新型陽離子脂質體的制備及載運小干擾核酸能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：基因治療是通過糾正或者沉默靶基因來治療疾病的治療方法,然而基因治療的臨床應用由于缺乏安全高效的基因遞送載體而受到極大限制。因此,研發(fā)新型安全高效的基因遞送載體成為了臨床應用基因治療的關鍵,其中陽離子脂質體成為載體研究的焦點之一。精胺是在真核細胞代謝中涉及的多胺并帶有四價正電荷,可作為陽離子載體,但由于其分子量太小導致其無法高效的運載RNA或DNA進入細胞內(nèi)。針對這一問題,本研究合成了五種較大分子量的新型精胺衍生物。隨后將五種新型精胺衍生物與膽固醇(摩爾比為1:1)共用制備成陽離子精胺脂質體。并通過改變制備溶劑中乙醇的含量(體積比分別為50%,25%,12.5%),探討了乙醇含量對精胺脂質體顆粒穩(wěn)定性的影響。實驗表明溶劑中乙醇含量為12.5%的精胺脂質體較其它濃度更為理想,即脂質體YY-1-12.5,YY-2-12.5,YY-3-12.5,YY-4-12.5,YY-5-12.5。本文對比了精胺脂質體包裹小干擾核酸(small interfering RNA,si RNA)前后粒徑電位和形貌的變化,并選取lipofactamine 2000轉染試劑作為陽性對照,從下面幾個方面比較這五種脂質體的優(yōu)劣:(1)通過測定五種精胺脂質體的包封率,分析五種精胺脂質體結合并包裹si RNA的能力;(2)通過細胞熒光轉染試驗,初步探討這五種精胺脂質體是否可以運載si RNA進入細胞,以及轉染效率;(3)通過靶基因敲低實驗,進一步證明這五種精胺脂質體的轉染效率以及釋放效率;(4)測定五種精胺脂質體對細胞的毒性大小。結果表明,YY-1-12.5,YY-2-12.5,YY-3-12.5,YY-4-12.5,YY-5-12.5這五種精胺脂質體具有很強的包載si RNA的能力,可以安全高效的轉染進入Hela細胞,有望成為新型安全高效的基因載體。
【關鍵詞】：精胺 精胺衍生物 siRNA 脂質體
【學位授予單位】：華南理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R943
【目錄】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-11
• 縮略詞表11-12
• 第一章 緒論12-21
• 1.1 基因治療現(xiàn)狀12
• 1.2 基因載體的分類12-17
• 1.2.1 病毒基因載體12-13
• 1.2.2 非病毒基因載體13-17
• 1.3 脂質體構建的研究現(xiàn)狀17-18
• 1.4 研究意義和研究內(nèi)容18-21
• 1.4.1 研究意義18-19
• 1.4.2 研究內(nèi)容19-21
• 第二章 精胺衍生物的合成21-35
• 2.1 引言21-22
• 2.2 實驗試劑22-23
• 2.3 實驗方法23-32
• 2.3.1 N,N'-二-(3-氨基-丙基)-N,N'-二9十八烯基- 1,4-丁二胺（化合物 1）的合成方法24-25
• 2.3.2 3-((3-氨基-丙基)-{4-[(3-氨基-丙基)-(2-十八碳9烯氧基羰基-乙基)-氨基]-丁基}-氨基)-丙酸9十八烯基酯（化合物 2）的合成方法25
• 2.3.3 9-十八烯酸 (3-氨基-丙基)-{4-[(3-氨基-丙基)-十八碳9烯酰-氨基]-丁基}-酰胺（化合物 3）的合成方法25-26
• 2.3.4 N, N'-二-(3-氨基-丙基)-N, N'-二-(3-十八碳9烯氧基-丙基)-1, 4-丁二胺（化合物 4）的合成方法26
• 2.3.5 N, N'-二-(3-氨基-丙基)-N, N'-二-(3-十八烷氧基-丙基)-1, 4-丁二胺（化合物5）的合成方法26-27
• 2.3.6 {3-[4-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基氨基)-丁基氨基]-丙基}-氨甲酸叔丁基酯（化合物 6）的合成方法27
• 2.3.7 1-溴9十八烯（化合物 7）的合成方法27-28
• 2.3.8 [3-({4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)9十八烯基-氨基]-丁基}9十八烯基-氨基)-丙基]-氨甲酸叔丁基酯（化合物 8）的合成28
• 2.3.9 丙烯酸9十八烯基酯（化合物 9）的合成28-29
• 2.3.10 3-((3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-{4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-(2-十八碳9烯氧基羰基-乙基)-氨基]-丁基}-氨基)-丙酸9十八碳烯基酯（化合物 10）的合成29
• 2.3.11 [3-({4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-9 十八烯酰氨基]-丁基}9十八烯�；�)-丙基]-氨甲酸叔丁基酯（化合物 11）的合成29-30
• 2.3.12 1-[3- (9-十八烯氧基)]-丙醇（化合物 12）的合成30
• 2.3.13 1-(3-溴-丙氧基)9十八烯（化合物 13）的合成30-31
• 2.3.14 {3-[{4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-(4-十七碳9烯氧基-丁基)-氨基]-丁基}-(3-十八碳9烯氧基-丙基)-氨基]-丙基}-氨甲酸叔丁基酯（化合物 14）的合成31
• 2.3.15 1-（3-十八烷氧基）-丙醇（化合物 15）的合成31-32
• 2.3.16 1-(3-溴-丙氧基)-十八烷(化合物 16)的合成32
• 2.3.17 {3-[{4-[(3-叔-丁氧基羰基氨基-丙基)-(4-十七烷氧基-丁基)-氨基]-丁基}-(3-十八烷氧基-丙基)-氨基]-丙基}-氨甲酸叔丁基酯(化合物 17)的合成32
• 2.4 實驗結果與討論32-34
• 2.5 本章小結34-35
• 第三章 精胺脂質體的制備與包封率測定35-52
• 3.1 引言35
• 3.2 實驗儀器35-37
• 3.2.1 馬爾文納米粒度儀35-36
• 3.2.2 掃描電子顯微鏡36
• 3.2.3 熒光酶標儀36-37
• 3.3 實驗方法37-40
• 3.3.1 精胺脂質體制備及包封率測定實驗方法流程圖37
• 3.3.2 精胺脂質體制備方法37-38
• 3.3.3 精胺脂質體包裹siRNA前后的粒徑電位測量38-39
• 3.3.4 精胺脂質體包裹siRNA前后顆粒的形態(tài)表征39
• 3.3.5 精胺脂質體的包封率測定方法39-40
• 3.4 結果與討論40-51
• 3.4.1 精胺脂質體制備結果與討論40-41
• 3.4.2 精胺脂質體粒徑及表面電位結果與討論41-45
• 3.4.3 精胺脂質體形態(tài)表征結果與討論45-48
• 3.4.4 精胺脂質體包封率結果與討論48-51
• 3.5 本章小結51-52
• 第四章 精胺脂質體載運siRNA的體外細胞學評價52-67
• 4.1 引言52
• 4.2 實驗試劑及耗材52-53
• 4.3 實驗儀器53-54
• 4.3.1 倒置熒光顯微鏡53
• 4.3.2 實時熒光定量PCR儀53-54
• 4.4 實驗方法54-59
• 4.4.1 精胺脂質體體外細胞學評價實驗流程圖54
• 4.4.2 細胞培養(yǎng)方法54-55
• 4.4.3 熒光轉染實驗方法55-56
• 4.4.4 靶基因敲低實驗方法56-57
• 4.4.5 RNA提取方法（Omega試劑盒）57
• 4.4.6 反轉錄RT-PCR實驗方法（Takara，，PrimeScript? RT試劑盒）57-58
• 4.4.7 RT-qPCR實驗方法（Takara，PrimeScript? RT試劑盒）58-59
• 4.4.8 精胺脂質體的細胞毒性測定實驗方法59
• 4.5 結果與討論59-66
• 4.5.1 熒光轉染實驗結果與討論59-63
• 4.5.2 靶基因敲低實驗結果與討論63-65
• 4.5.3 精胺脂質體細胞毒性測定65-66
• 4.6 本章小結66-67
• 總結與展望67-69
• 總結67-68
• 展望68-69
• 參考文獻69-75
• 附錄75-90
• 附錄 175-76
• 附錄 276-77
• 附錄 377-78
• 附錄 478-79
• 附錄 579-80
• 附錄 680-81
• 附錄 781-82
• 附錄 882-83
• 附錄 983-84
• 附錄 1084-85
• 附錄 1185-86
• 附錄 1286-87
• 附錄 1387-88
• 附錄 1488-89
• 附錄 1589-90
• 攻讀碩士學位期間取得的研究成果90-91
• 致謝91-92
• 附件92

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 唐明青;刁勇;許瑞安;;以殼聚糖為載體的口服基因藥物[J];中國生化藥物雜志;2009年02期

2 張夏華;吳廣通;李蓉;;基因治療現(xiàn)狀與前景[J];藥學實踐雜志;2009年01期

3 黃永焯;孫曉譯;梁文權;;DNA/陽離子脂質體復合物的構效關系[J];中國藥學雜志;2006年05期

  本文關鍵詞：新型陽離子脂質體的制備及載運小干擾核酸能力的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：312254