本文關(guān)鍵詞：一類新藥HZZ112的代謝、酶誘導(dǎo)抑制和蛋白結(jié)合研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：HZZ112是治療肺癌的化藥1.1類候選新藥,其一級活性代謝物HZZ1018能夠抑制角質(zhì)細(xì)胞增生,并能進一步代謝生成二級代謝產(chǎn)物HZZ1005。本文對其臨床前藥物代謝動力學(xué)進行研究,主要考察了其生物轉(zhuǎn)化和血漿蛋白結(jié)合情況,比較了不同物種間代謝動力學(xué)行為,探究了HZZ112及其活性代謝物HZZ1018和HZZ1005對主要的CYPs的抑制和誘導(dǎo)作用,并對介導(dǎo)HZZ112和HZZ1018代謝的酶系做了初步驗證,為HZZ112進一步開展臨床前藥物代謝動力學(xué)研究,藥效學(xué)和毒理學(xué)研究動物模型的選取等提供參考信息。1 HZZ112活性代謝物分析目的 考察HZZ112在大鼠體內(nèi)是否產(chǎn)生活性代謝物HZZ1018和HZZ1005,以及通過體外實驗分析其化學(xué)結(jié)構(gòu)。方法收集大鼠灌胃給予HZZ112后的血漿和尿液,采用HPLC-Q-TOF/MS方法獲得HZZ112在大鼠血漿和尿液中的代謝物的一級和二級質(zhì)譜圖；通過體外比格犬血細(xì)胞孵育HZZ112和人肝微粒孵育HZZ1018等試驗,進行代謝物分析。結(jié)果 給藥后,大鼠血漿和尿液中均能檢測到HZZ1018和HZZ1005分子離子峰,并且其質(zhì)譜二級碎裂圖符合兩種化合物的碎裂規(guī)律。在體外實驗中,HZZ112在比格犬血細(xì)胞中生成活性代謝物HZZ1018,而HZZ1018在人肝微粒體中經(jīng)羰基還原生成HZZ1005,未發(fā)現(xiàn)α,β-不飽和醛酮C=C雙鍵還原產(chǎn)物。結(jié)論 通過體內(nèi)和體外實驗證明,HZZ112的活性代謝物主要為HZZ1018和HZZ1005。HZZ1018在人肝微粒體中主要發(fā)生羰基還原生成HZZ1005,沒有檢測到C=C雙鍵還原產(chǎn)物HZZ1018*(HZZ1018的二氫呋喃態(tài))。2 HZZ1018在不同物種肝微粒體及肝胞漿中的代謝動力學(xué)目的 比較HZZ1018在小鼠、大鼠、犬、豬和人不同物種肝微粒體及肝胞漿中代謝生成HZZ1005的代謝動力學(xué)行為的差異。方法 建立靈敏、簡便的肝微粒體中測定HZZ1005的HPLC方法；對HZZ1018體外孵育實驗的酶濃度和孵育時間進行優(yōu)化；以不同底物濃度下產(chǎn)物生成速率繪制酶動力學(xué)曲線,采用米氏方程擬合酶動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果 建立了HPLC方法用于測定孵育體系中的還原產(chǎn)物HZZ1005,并且優(yōu)化了HZZ1018的體外孵育時間和酶濃度。為了保證底物HZZ1018的消耗量不大于20%,并避免蛋白質(zhì)的非特異性吸附,同時滿足HPLC檢測的靈敏度,最終確定HZZ1018在體外孵育系統(tǒng)中的條件：蛋白濃度為0.4 mg/mL,孵育時間為40 min。HZZ1018轉(zhuǎn)化為HZZ1005的代謝動力學(xué)均符合經(jīng)典米氏方程。通過比較包括Km,Vmax和Clint在內(nèi)的動力學(xué)參數(shù),小型豬肝微粒體中的代謝與人肝微粒體中的代謝最為相似,其他物種均有很大不同；而在胞漿中的代謝,不同物種間差異很小。另外,值得注意的是,胞漿中代謝的清除率數(shù)值是肝微粒體中的一百多倍,這提示我們HZZ1018的代謝的主要發(fā)生在胞漿中。結(jié)論小型豬肝微粒體的代謝與人較為相似,不同物種間的胞漿代謝差異很小。HZZ1018在胞漿中的清除率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于在微粒體中的清除率。3 參與HZZ112和HZZ1018代謝的酶研究目的 篩查介導(dǎo)HZZ112酯鏈斷裂和HZZ1018羰基還原的酶系。方法 1)通過加入CYPs的特異性抑制劑和利用FMOs的高溫失活的特性,考察HZZ112和HZZ1018是否由CYPs和FMOs代謝,并確定是否依賴于NADP-NADPHo 2)用相關(guān)性分析實驗考察HZZ1018的代謝與主要的CYPs亞族是否有關(guān)。3)采用雙香豆素、華法林與HZZ1018在胞漿中共孵育方法,觀察HZZ1018的雙鍵是否能被還原。4)通過一系列體外孵育實驗和重組酶實驗,考察HZZ112的代謝與乙酰膽堿酯酶、丁酰膽堿酯酶、羧酸酯酶、對氧磷酶的關(guān)系。結(jié)果1)HZZ1018的代謝與FMOs無關(guān),與CYPs有關(guān),但CYPs不是主要的代謝酶,并且HZZ1018的代謝依賴于NADP-NADPH(輔酶)的參與;HZZ112在肝微粒體和肝胞漿中均無代謝。2)相關(guān)性分析實驗結(jié)果顯示,HZZ1018的代謝與幾種CYP亞型探針底物代謝活性的相關(guān)性較差,提示它們都不是HZZ1018代謝為HZZ1005的主要代謝酶。3)香豆素類藥物對HZZ1018的代謝沒有顯著性抑制作用。4)HZZ112在比格犬血漿中(高表達乙酰膽堿酯酶、丁酰膽堿酯酶和對氧磷酶)和大鼠肝微粒體(高表達羧酸酯酶)中末發(fā)生明顯代謝。5)重組酯酶rhCE1、 hCE2、rhPON1和BChE對HZZ112無代謝。6)HZZ112在血漿中無代謝,在血細(xì)胞中有代謝。結(jié)論1)HZZ112在各不同物種的肝微粒體及肝胞漿中均無代謝,但其在全血中有代謝,代謝物HZZ1018主要在血細(xì)胞中生成。HZZ1018在胞漿中的代謝速率要遠(yuǎn)大于其在微粒體中的代謝,其代謝與CYPs有關(guān),但CYPs并不是其最主要的代謝酶。2)HZZ112的代謝很可能與血細(xì)胞中的特異性酯酶有關(guān),而HZZ1018的代謝則可能與胞漿中AKR1C家族有關(guān)。4 HZZ112及其代謝物對主要CYPs的抑制作用目的 通過檢測HZZ112及其代謝物對主要CYPs的抑制作用,考察HZZ112潛在的藥物-藥物相互作用。方法 采用雞尾酒法,在人肝微粒體孵育體系中,將HZZ112或其代謝物與多種CYP酶探針底物共孵育,通過探針底物的代謝速率變化評價待測物對主要藥物代謝酶活性的影響。研究了HZZ112及其代謝物對細(xì)胞色素P450同工酶CYP1A2、 2B6、2C8、2C9、2C19、2D6和3A4/5的抑制作用。結(jié)果本實驗建立了快速靈敏的HPLC-MS/MS方法同時檢測微粒體孵育液中CYP酶探針底物的代謝物。實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),HZZ112對CYP1A2,2B6,2C8,2C9,2C19,2D6和3A4/5都沒有明顯的抑制作用,IC50100μmol/L(50 μg/mL);而HZZ1018和HZZ1005對CYP1A2,2B6,2C8,2C9,2C19,2D6和3A4/5都表現(xiàn)出很強的抑制作用。結(jié)論HZZ112對CYP1A2,2B6,2C8,2C9,2C19,2D6和3A4/5無明顯抑制作用,而其代謝物HZZ1018和HZZ1005對它們都表現(xiàn)出很強的抑制作用。5 HZZ112及其代謝物對CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6的誘導(dǎo)作用目的考察HZZ112及其代謝物對CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6有無誘導(dǎo)作用。方法 本文首先通過雙熒光素酶報告基因法研究HZZ112、HZZ1018和HZZ1005對CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6的可能誘導(dǎo)作用,然后采用real-time PCR法考察它們對人肝癌細(xì)胞HepG2中CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6mRNA表達的影響以及小鼠經(jīng)多次給藥后肝組織中三種酶同工酶mRNA表達量的變化。結(jié)果 雙熒光素酶報告基因測定結(jié)果顯示,除了HZZ112高劑量組有弱的通過激活人芳烴受體(hAhR)誘導(dǎo)CYP1A2的作用外,其他藥物均不表現(xiàn)出誘導(dǎo)作用。real-time PCR實驗結(jié)果顯示,在HepG2細(xì)胞中,高劑量的HZZ112會誘導(dǎo)CYP1A2 mRNA表達水平增加,高劑量的HZZ1018弱誘導(dǎo)CYP2B6,高劑量的HZZ1005弱誘導(dǎo)CYP3A4;給藥HZZ112的小鼠肝組織中的CYP1A2 mRNA水平也有增高,CYP3A11和CYP2B10基因的mRNA表達水平?jīng)]有改變。結(jié)論HZZ1018和HZZ1005對CYP3A4、CYP1A2和CYP2B6沒有誘導(dǎo)作用。高劑量的HZZ112對CYP1A2的mRNA表達有較弱的誘導(dǎo)作用,對CYP3A4和CYP2B6沒有誘導(dǎo)作用。6 HZZ112和HZZ1018的血漿蛋白結(jié)合目的考察HZZ112和HZZ1018與人、犬、大鼠血漿的蛋白結(jié)合情況。方法 采用超速離心法考察三種藥物的蛋白結(jié)合率。人、大鼠和犬血漿中HZZ112或HZZ1018的濃度分別為2,20和200μmol/L,在4℃下,以500,000 g離心17h,撥開上層脂蛋白取中層澄清液體,處理后檢測即得游離藥物濃度,進而計算得出HZZ112和HZZ1018的血漿蛋白結(jié)合率。結(jié)論HZZ112和HZZ1018在人、犬、大鼠血漿中均有很高的蛋白結(jié)合率(大于95%)。
【關(guān)鍵詞】：藥物代謝 誘導(dǎo) 抑制 藥物相互作用 血漿蛋白結(jié)合
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 致謝4-5
• 摘要5-10
• Abstract10-15
• 縮略詞15-20
• 1 前言20-24
• 1.1 臨床前藥物代謝動力學(xué)20
• 1.2 藥物的生物轉(zhuǎn)化20-21
• 1.3 藥物相互作用21-22
• 1.4 藥物的血漿蛋白結(jié)合22
• 1.5 研究內(nèi)容和實驗方案22-24
• 2 HZZ112活性代謝產(chǎn)物鑒定24-37
• 2.1 引言24
• 2.2 實驗儀器與材料24-25
• 2.3 實驗方法25-28
• 2.4 實驗結(jié)果28-36
• 2.5 小結(jié)與討論36
• 2.6 結(jié)論36-37
• 3 HZZ112和HZZ1018不同物種的代謝輪廓比較37-49
• 3.1 引言37
• 3.2 實驗儀器與材料37-40
• 3.3 實驗方法40-43
• 3.4 實驗結(jié)果43-48
• 3.5 小結(jié)與討論48
• 3.6 結(jié)論48-49
• 4 介導(dǎo)HZZ112和HZZ1018生物轉(zhuǎn)化的酶系研究49-62
• 4.1 引言49
• 4.2 實驗儀器與材料49-50
• 4.3 實驗方法50-55
• 4.4 實驗結(jié)果55-60
• 4.5 小結(jié)與討論60-61
• 4.6 結(jié)論61-62
• 5 HZZ112及其活性代謝物對CYPs的抑制作用62-71
• 5.1 引言62
• 5.2 實驗儀器與材料62-63
• 5.3 實驗方法63-65
• 5.4 實驗結(jié)果65-70
• 5.5 討論70
• 5.6 結(jié)論70-71
• 6 HZZ112及其活性代謝物對CYPs的誘導(dǎo)作用71-87
• 6.1 引言71
• 6.2 實驗儀器與材料71-73
• 6.3 實驗方法73-78
• 6.4 實驗結(jié)果78-85
• 6.5 小結(jié)與討論85-86
• 6.6 結(jié)論86-87
• 7 HZZ112和HZZ1018在血漿中的蛋白結(jié)合情況87-95
• 7.1 引言87
• 7.2 實驗儀器與材料87-88
• 7.3 實驗方法88-90
• 7.4 實驗結(jié)果90-94
• 7.5 小結(jié)與討論94
• 7.6 結(jié)論94-95
• 本研究的總結(jié)95-96
• 本研究的創(chuàng)新點96-97
• 參考文獻97-100
• 綜述100-113
• 參考文獻110-113
• 作者簡歷113

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張景園,施善平;乙酰膽堿酯酶的別構(gòu)作用——某些膽堿能效應(yīng)劑與鈣離子激活作用的關(guān)系[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;1982年05期

  本文關(guān)鍵詞：一類新藥HZZ112的代謝、酶誘導(dǎo)抑制和蛋白結(jié)合研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：304874