發(fā)布時間：2017-04-12 19:13

  本文關鍵詞：EZH2通過抑制NKG2D的表達調控NK細胞的發(fā)育及功能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討組蛋白甲基化酶EZH2調控NK細胞發(fā)育及功能的作用和作用機制。方法:第一部分:從C57BL6小鼠BM中分選出HSCs,體外誘導分化為NK細胞,加入抑制劑以抑制EZH2活性,western blotting檢測分化細胞中H3K27me3表達量,流式分析不同分化階段細胞免疫表型;從人臍帶血(umbilical cord blood,UCB)中分離出CD34+HSCs,體外誘導分化為NK細胞,加入抑制劑以抑制EZH2活性,western blotting檢測分化細胞中H3K27me3表達量,流式分析在不同分化階段細胞免疫表型。第二部分:流式分析C57BL6小鼠及人UCB CD34+HSCs在體外分化不同階段細胞表面NKG2D表達量;ChIP-qPCR檢測抑制EZH2活性前后,體外分化的NK細胞中NKG2D啟動子區(qū)H3K27me3修飾水平變化;細胞殺傷實驗檢測體外分化的NK細胞的殺傷能力。結果:第一部分:小鼠HSCs體外分化實驗的結果顯示,抑制EZH2活性后,NK細胞發(fā)育進程加快;人UCB CD34+HSCs體外分化結果也顯示,抑制EZH2活性后NK細胞發(fā)育進程加快。第二部分:小鼠和人HSCs在體外分化不同階段NKG2D表達量檢測結果顯示,抑制EZH2活性后,NKG2D的表達量明顯上升;ChIP-qPCR實驗結果顯示,抑制EZH2活性后,NKG2D基因H3K27me3修飾水平明顯下降;細胞殺傷實驗顯示,抑制EZH2活性后,NK細胞的殺傷能力明顯下降,且殺傷能力同NKG2D密切相關。結論:1、EZH2可以調控小鼠NK細胞發(fā)育。抑制EZH2活性后,可以明顯促進小鼠NK細胞發(fā)育。2、EZH2可以調控人NK細胞發(fā)育。抑制EZH2活性后,可以明顯促進人NK細胞發(fā)育進程。3、EZH2通過調控NKG2D基因H3K27me3修飾水平以調節(jié)其表達,從而促進NK細胞的發(fā)育及其功能。4、抑制EZH2活性后,小鼠或人NK細胞殺傷能力明顯增加,且同NKG2D密切相關。
【關鍵詞】：NK細胞 EZH2 NKG2D H3K27me3 NK細胞發(fā)育 NK細胞功能
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語10-15
• 前言15-18
• 研究現狀、成果15-17
• 研究目的、方法17-18
• 一、EZH2對NK細胞發(fā)育的影響18-36
• 1.1 對象和方法18-29
• 1.1.1 實驗材料18
• 1.1.2 實驗藥物18-19
• 1.1.3 主要實驗試劑19-21
• 1.1.4 主要溶液和緩沖液配制21-23
• 1.1.5 主要實驗儀器23-24
• 1.1.6 實驗方法24-29
• 1.1.7 統(tǒng)計學分析29
• 1.2 結果29-33
• 1.2.1 EZH2抑制劑對小鼠NK細胞體外發(fā)育的影響29-31
• 1.2.2 EZH2抑制劑對人NK細胞體外發(fā)育的影響31-33
• 1.3 討論33-35
• 1.4 小結35-36
• 二、EZH2影響NK細胞發(fā)育及功能作用機制研究36-60
• 2.1 對象和方法36-47
• 2.1.1 實驗動物36
• 2.1.2 細胞株36
• 2.1.3 主要實驗試劑36-37
• 2.1.4 主要溶液和緩沖液配制37-39
• 2.1.5 主要實驗儀器39-40
• 2.1.6 實驗方法40-47
• 2.1.7 統(tǒng)計學分析47
• 2.2 結果47-54
• 2.2.1 定量PCR引物檢測結果47-49
• 2.2.2 小鼠HSC體外分化NK細胞表面NKG2D表達量檢測49-50
• 2.2.3 人臍帶血HSC體外分化NK細胞表面NKG2D表達量檢測50-51
• 2.2.4 體外分化NK細胞中NKG2D基因H3K27me3修飾水平檢測51-52
• 2.2.5 EZH2抑制活性后對NK細胞殺傷能力的檢測52-54
• 2.3 討論54-59
• 2.4 小結59-60
• 全文結論60-61
• 參考文獻61-70
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明70-71
• 綜述 NK細胞發(fā)育及功能的研究71-91
• 綜述參考文獻84-91
• 致謝91

【共引文獻】

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  本文關鍵詞：EZH2通過抑制NKG2D的表達調控NK細胞的發(fā)育及功能，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：301952