發(fā)布時間：2017-04-05 22:03

  本文關(guān)鍵詞：1.免疫無應(yīng)答HIV患者血漿中雷公藤3個單體成分藥物濃度及其與異常免疫激活關(guān)系初探 2.高效液相色譜法測定血清、腦脊液及胰液中利奈唑胺藥物濃度，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景自20世紀(jì)90年代開始應(yīng)用高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療(highly-active antiretroviral treatment, HAART)以來,艾滋病(acquired immune deficiency syndrome, AIDS)的治療取得了突破性的進(jìn)展。HAART可以有效抑制人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)的復(fù)制,使HIV患者CD4+T細(xì)胞逐漸恢復(fù)至正常,從而達(dá)到免疫功能重建。臨床觀察發(fā)現(xiàn)約有20% HIV患者經(jīng)過長期]HAART治療,病毒復(fù)制被有效抑制,但CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)卻未能恢復(fù)至最佳水平,仍然表現(xiàn)為免疫無應(yīng)答,這類患者被稱為免疫無應(yīng)答者(immunologic non-responders, INRs)。免疫無應(yīng)答導(dǎo)致患者機(jī)會性感染、腫瘤、心血管疾病、肝臟疾病等的發(fā)病率和病死率顯著升高。鑒于此,尋找高效低毒的藥物治療免疫無應(yīng)答HIV患者已成為重大課題。在免疫無應(yīng)答的各種影響因素中,異常免疫激活占據(jù)主導(dǎo)地位[2]。雷公藤為中國的傳統(tǒng)中藥,已有幾百年的歷史,藥理學(xué)研究表明其具有抗炎、抗腫瘤、免疫抑制等作用,臨床上廣泛用于自身免疫性疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid arthritis, RA)、皮膚病等的治療,并收到預(yù)期的良好效果,號稱“中藥皮質(zhì)激素”。對雷公藤部分單體成分體外及動物體內(nèi)藥理學(xué)研究表明,雷公藤甲素、雷公藤紅素、雷公藤內(nèi)酯酮、去甲澤拉木醛、雷醇內(nèi)酯等具有顯著的抗炎和免疫抑制活性。北京協(xié)和醫(yī)院感染科對免疫無應(yīng)答HIV患者(n=19)高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒治療加用雷公藤多苷片的預(yù)實(shí)驗(yàn)也初步證實(shí)了雷公藤多苷片對恢復(fù)免疫無應(yīng)答HIV患者免疫功能的作用。遺憾的是,上市的雷公藤制劑主要是雷公藤片、雷公藤多苷片及昆明山海棠片,均為復(fù)方制劑,含數(shù)十個單體成分。能使免疫無應(yīng)答HIV患者恢復(fù)免疫功能的單體成分是什么?其作用機(jī)制又是什么?為初步回答上述2個問題,本研究選擇雷公藤紅素、雷公藤甲素、雷醇內(nèi)酯為研究對象,試圖初步考察上述3個單體是否為使免疫無應(yīng)答HIV患者CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)恢復(fù)至正常水平的單體成分；進(jìn)一步考察上述3個單體是否能通過抑制CD38、HLA-DR免疫激活分子抑制細(xì)胞免疫激活。研究目的本研究分別建立測定雷公藤紅素、雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯的超高液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜 (ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric,UPLC-MS/MS)方法,測定健康受試者和免疫無應(yīng)答HIV患者口服雷公藤多苷片后雷公藤紅素、雷公藤甲素、雷醇內(nèi)酯的血藥濃度,Winnonlin 1.5非房室模型計(jì)算3個單體在健康受試者中的藥代動力學(xué)參數(shù)。同時探究HIV患者中3個單體血藥濃度與所測定的CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長率,CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長量及免疫激活指標(biāo)CD38(%)和HLA-DR(%)改變量的相關(guān)性。旨在發(fā)現(xiàn)恢復(fù)免疫不應(yīng)答HIV患者免疫功能的可能單體成分及其作用機(jī)制,促進(jìn)單體藥物的基礎(chǔ)研究和研發(fā),為雷公藤的臨床廣泛使用提供參考。研究對象與方法首先建立測定人血漿中雷公藤紅素、雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯藥物濃度的UPLC-MS/MS方法。測定雷公藤多苷片中雷公藤3個單體含量。健康受試者單劑量口服雷公藤多苷片20 mg后0、0.5、1、2、3、4、6、8、12、24 h采集血漿樣本,測定血藥濃度,Winnonlin 1.5非房室模型計(jì)算藥代動力學(xué)參數(shù)。免疫無應(yīng)答HIV患者(n=19)多劑量口服雷公藤多苷片10 mg或20 mg,tid,采集谷濃度血漿樣本,應(yīng)用UPLC-MS/MS方法測定血漿中雷公藤紅素、雷公藤甲素、雷醇內(nèi)酯的藥物濃度,應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析免疫無應(yīng)答HIV患者血漿中雷公藤3個單體藥物濃度與患者CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長率、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長量、免疫激活指標(biāo)CD38(%)和HLA-DR(%)改變量之間的相關(guān)性。研究結(jié)果建立了電噴霧正離子(electronic spray ion with positive ionization ions, ESI+)、多反應(yīng)監(jiān)測(multiple reaction monitoring, MRM)模式測定雷公藤紅素的UPLC-MS/MS方法,建立了ESI+、MRM模式同時測定雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯的UPLC-MS/MS方法。雷公藤多苷片中雷公藤紅素、雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯平均含量分別為22.941(15.163～31.755)μg/片、7.649(3.598～14.495)ng/片和1423.475(817.895～2233.433)ng/片。健康受試者單劑量口服雷公藤多苷片20 mg,對血藥濃度測定值進(jìn)行非房室模型分析顯示,血漿中雷公藤紅素峰濃度Cmax為0.52ng·mL-1,達(dá)峰時間Tmax為3.0 h,半衰期t1/2為16.76 h；所有時間點(diǎn)雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯的血藥濃度均低于最低定量限(the lowest limit of quantification, LLOQ)。HIV患者(n=19)多劑量口服雷公藤多苷片10 mg或20 mg, tid,血漿中雷公藤紅素濃度為(0.28-4.01) ng·mL-1,血漿中雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯濃度均低于LLOQ。SPSS統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果：對HIV患者雷公藤紅素血藥濃度、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長率、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長量、CD38(%)和HLA-DR(%)改變量進(jìn)行Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn),p0.05,均符合正態(tài)分布。對CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長率、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長量、CD38(%)和HLA-DR(%)玫變量與雷公藤紅素血藥濃度進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析,相關(guān)系數(shù)分別為0.072、-0.211、0.310、0.424,相關(guān)性假設(shè)檢驗(yàn)p值分別為0.798、0.445、0.261、0.116,均0.05,均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性。按不同劑量20 mg,tid組和10 mg, tid組分組分析,對兩組血藥濃度、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長率、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長量、CD38(%)和HLA-DR(%)改變量進(jìn)行獨(dú)立樣本T檢驗(yàn),結(jié)果均未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。根據(jù)CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長率分組比較兩組血藥濃度差異,兩組血藥濃度統(tǒng)計(jì)學(xué)上未見顯著差異。研究結(jié)論研究結(jié)果顯示雷公藤紅素與CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長率、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)增長量、CD38(%)和HLA-DR(%)改變量統(tǒng)計(jì)學(xué)上不具有相關(guān)性。不同劑量組,上述指標(biāo)統(tǒng)計(jì)學(xué)上未見顯著差異。因本研究混雜因素較多,樣本量較少,尚不能證實(shí)雷公藤紅素是否為恢復(fù)免疫無應(yīng)答HIV患者免疫功能的雷公藤單體成分。雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯因血漿藥物濃度低于LLOQ,未能分析其與免疫無應(yīng)答HIV患者免疫重建的關(guān)系。研究背景革蘭氏陽性球菌(Gram-positive bacterial, G+)是社區(qū)和醫(yī)院感染的重要病原菌,其中較為常見的有金黃色葡萄球菌、腸球菌、鏈球菌等。G+菌進(jìn)入血液循環(huán)或腦組織,引起菌血癥、敗血癥或顱內(nèi)感染,患者預(yù)后較差。近年來,隨著抗生素廣泛應(yīng)用,細(xì)菌耐藥情況日趨嚴(yán)重。對耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA)等陽性菌敏感的萬古霉素等抗G+菌的抗菌藥物敏感性也逐漸下降。利奈唑胺以其廣譜強(qiáng)效的抗G+菌活性,良好的脂溶性和組織穿透率等特征著稱,且不導(dǎo)致腎臟毒性。目前,國內(nèi)外尚無利奈唑胺在胰腺組織中的穿透性及藥代動力學(xué)研究。此外,國內(nèi)尚無利奈唑胺在重癥感染患者及多藥耐藥患者中藥代動力學(xué)和藥效動力學(xué)的研究。鑒于此,建立測定血清、腦脊液(cerebrospinal fluid, CSF)和胰液(pancreatic juice, PJ)中利奈唑胺濃度的方法學(xué),為進(jìn)一步研究利奈唑胺在胰腺組織的穿透性、在中國重癥感染患者、多藥耐藥患者中藥代動力學(xué)-藥效動力學(xué)特征提供方法學(xué)基礎(chǔ),為臨床合理使用該藥提供參考。研究目的建立同時測定人血清、腦脊液、胰液中利奈唑胺藥物濃度的高效液相色譜(high-performance liquid chromatographic, HPLC)方法學(xué)。研究方法以利培酮為內(nèi)標(biāo)物,在0.1 mol·L-1 NaOH堿性條件下甲基叔丁基醚：正丙醇=90：10(v/v)液液提取,Shima-pack CLC-ODS-C18 (150 mm × 6.0 mm,5 μm)色譜柱分離,流動相為甲醇：乙腈：磷酸緩沖溶液(0.02 mol·L1 KH2PO4, H3PO4調(diào)pH=3.5)=20: 16:64 (v/v/v),流速1.0 mL·min-1,柱溫35℃,檢測波長254 nm條件下測定。研究結(jié)果血清中利奈唑胺在(0.25～40.0)mg·L-1內(nèi)線性良好(r=0.999),定量限為0.25mg.L-1,低、中、高(0.8、8.0、25.0 mg·L-1)3個濃度質(zhì)控樣本的批內(nèi)相對標(biāo)準(zhǔn)誤差(RSD)為1.64%～2.38%(n=5),批間RSD為4.53%～6.34%(n=5),方法學(xué)回收率為93.781%～97.393%(n=5),提取回收率為72.861%～77.539%(n=5)；腦脊液中利奈唑胺在(0.1～20.0)mg·L-1內(nèi)線性良好(r=0.999),定量限為0.1 mg·L-1,低、中、高(0.2、2.0、15.0 mg·L-1)3個濃度質(zhì)控樣本的批內(nèi)RSD為3.84%～4.83%(n=5),批間RSD為6.04%～8.16%(n=5),方法學(xué)回收率為106.910%～110.971%(n=5)提取回收率為73.226%～79.754%(n=5)；胰液中利奈唑胺在(0.1～20.0)mg·L-1內(nèi)線性良好(r=0.999),定量限為0.1 mg·L-1,低、中、高(0.2、2.0、15.0 mg·L-1)3個濃度質(zhì)控樣本的批內(nèi)RSD為2.96%～5.30%(n=5),批間RSD為4.68%～6.40%(n=5),方法學(xué)回收率為97.178%-105.072%(n=5),提取回收率73.333%～76.010%(n=5)。內(nèi)標(biāo)提取回收率87%。研究結(jié)論本方法靈敏度高,準(zhǔn)確性好,簡便快捷,應(yīng)用液液提取處理樣本去除更多雜峰于擾,更廣泛適用于臨床,適用于多種合并用藥患者生物標(biāo)本中利奈唑胺藥物濃度的測定。
【關(guān)鍵詞】：雷公藤紅素 雷公藤甲素 雷醇內(nèi)酯 藥代動力學(xué) 免疫無應(yīng)答 HIV患者 CD4~+T細(xì)胞計(jì)數(shù) CD38(%) HLA-DR(%) 利奈唑胺 血清藥物濃度 腦脊液藥物濃度 胰液藥物濃度 高相液相色譜法
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R969.1
【目錄】：

• 第一部分 免疫無應(yīng)答HIV患者血漿中雷公藤3個單體成分藥物濃度及其與異常免疫激活關(guān)系初探5-90
• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 第一節(jié) 建立測定人血漿中雷公藤紅素的UPLC-MS/MS方法14-26
• 摘要14
• ABSTRACT14-15
• 1 儀器與試藥15-16
• 2 方法16-20
• 3 結(jié)果20-23
• 4 討論23-25
• 5 小結(jié)25-26
• 第二節(jié) 建立同時測定人血漿中雷公藤甲素和雷醇內(nèi)酯UPLC-MS/MS方法26-39
• 摘要26
• ABSTRACT26-27
• 1 儀器與試藥27-28
• 2 方法28-31
• 3 結(jié)果31-35
• 4 討論35-38
• 5 小結(jié)38-39
• 第三節(jié) UPLC-MS/MS測定雷公藤多苷片中雷公藤3個單體含量均勻度39-47
• 摘要39
• ABSTRACT39-40
• 1 儀器與試藥40
• 2 方法40-43
• 3 結(jié)果43-45
• 4 討論45-46
• 5 小結(jié)46-47
• 第四節(jié) 健康受試者體內(nèi)雷公藤3個單體藥代動力學(xué)初探47-54
• 摘要47
• ABSTRACT47-48
• 1 儀器與試藥48
• 2 方法48-49
• 3 結(jié)果49-50
• 4 討論50-53
• 5 小結(jié)53-54
• 第五節(jié) 免疫無應(yīng)答HIV患者血漿中雷公藤3個單體藥物濃度與異常免疫激活關(guān)系探討54-67
• 摘要54
• ABSTRACT54-56
• 1 儀器與試劑56
• 2 方法56-58
• 3 結(jié)果58-64
• 4 討論64-66
• 5 小結(jié)66-67
• 參考文獻(xiàn)67-71
• 總結(jié)71-73
• 論文相關(guān)綜述一 雷公藤抗炎免疫調(diào)節(jié)活性單體的研究發(fā)展73-79
• 參考文獻(xiàn)76-79
• 論文相關(guān)綜述二 雷公藤抗HIV活性及其研究中的機(jī)遇和挑戰(zhàn)79-90
• 參考文獻(xiàn)86-90
• 第二部分 高效液相色譜法測定人血清、腦脊液和胰液中利奈唑胺藥物濃度90-127
• 英文縮略詞表90-91
• 中文摘要91-93
• ABSTRACT93-95
• 第一節(jié) 高效液相色譜法測定人血清、腦脊液和胰液中利奈唑胺濃度95-112
• 1 儀器與試藥95-96
• 2 方法96-99
• 3 結(jié)果99-106
• 4 討論106-111
• 5 小結(jié)111-112
• 第二節(jié) 利奈唑胺臨床藥效學(xué)初探112-117
• 摘要112
• ABSTRACT112
• 1 儀器與試藥112
• 2 方法112-113
• 3 結(jié)果113-115
• 4 討論115-116
• 5 小結(jié)116-117
• 參考文獻(xiàn)117-119
• 總結(jié)119-120
• 論文相關(guān)綜述 利奈唑胺組織穿透性及在感染組織中的藥效學(xué)120-127
• 參考文獻(xiàn)125-127
• 附錄一 研究生期間發(fā)表的文章題錄127-128
• 附錄二 致謝128-129

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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  本文關(guān)鍵詞：1.免疫無應(yīng)答HIV患者血漿中雷公藤3個單體成分藥物濃度及其與異常免疫激活關(guān)系初探 2.高效液相色譜法測定血清、腦脊液及胰液中利奈唑胺藥物濃度，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：287735