本文關(guān)鍵詞：鏈霉菌BOR-0331產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物Borrelidin的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本實驗旨在對鏈霉菌BOR-0331菌株的發(fā)酵產(chǎn)物進行分離純化,希望從中得到結(jié)構(gòu)新穎、藥理活性多樣的化合物。血管的形成在腫瘤生長過程中具有舉足輕重的意義,阻止該過程是一個有前途的治療方法。目前臨床上的血管生成抑制劑主要集中的大分子生物制劑方面,研究小分子血管生成抑制劑具有很重要的意義。本實驗在一株鏈霉菌BOR-0331發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)了具有生物活性的組分,TLC行為提示組分含大環(huán)內(nèi)酯類化合物。由于發(fā)酵效價極低,針對產(chǎn)生菌的進行紫外誘變,并采用響應(yīng)面設(shè)計等方法對高產(chǎn)株進行發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化。初步設(shè)計出了該菌株的優(yōu)勢發(fā)酵條件,發(fā)酵效價達到35.3mg/L。采用大孔吸附樹脂柱層析、硅膠柱層析、Sephadex LH-20凝膠柱層析、半制備HPLC等分離手段對菌株的次級代謝產(chǎn)物進行分離純化,分離到1個化合物。對獲得的化合物進行紫外、紅外、質(zhì)譜、核磁等方法分析,證實與文獻中報道的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素疏螺旋體素(borrelidin)同質(zhì)。本研究從一株鏈霉菌BOR-0331產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物中分離到borrelidin,具有較廣泛的生物活性。該化合物有潛力成為小分子血管內(nèi)皮生長因子抑制劑的先導(dǎo)化合物,對于研究抗腫瘤新藥、抗菌藥物具有很大的意義,經(jīng)過誘變育種和發(fā)酵條件優(yōu)化,單位效價達到較高水平為工業(yè)化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：鏈霉菌 疏螺旋體素 誘變育種 響應(yīng)面法 發(fā)酵優(yōu)化 分離純化 結(jié)構(gòu)鑒定
【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R915
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 縮略詞表8-9
• 前言9-12
• 第一部分 鏈霉菌BOR-0331的菌種選育12-18
• 1 實驗材料12-14
• 1.1 主要實驗設(shè)備與儀器12-13
• 1.2 主要試劑與原材料13
• 1.3 實驗菌株13
• 1.4 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件13-14
• 2 實驗方法14-15
• 2.1 誘變育種14
• 2.2 菌株篩選14-15
• 2.3 實驗菌株穩(wěn)定性試驗15
• 2.4 菌種保藏15
• 3 結(jié)果與討論15-17
• 3.1 自然選育結(jié)果15
• 3.2 菌株篩選結(jié)果15-16
• 3.3 篩選菌株穩(wěn)定性實驗結(jié)果16-17
• 4 小結(jié)17-18
• 第二部分 鏈霉菌BOR-0331發(fā)酵工藝優(yōu)化18-33
• 1 實驗材料18-19
• 1.1 主要實驗設(shè)備與儀器18
• 1.2 主要試劑與原材料18-19
• 1.3 實驗菌株19
• 1.4 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件19
• 2 實驗方法19-24
• 2.1 單因素實驗設(shè)計19-21
• 2.2 Plackett-Burman實驗21
• 2.3 最陡爬坡實驗21-22
• 2.4 響應(yīng)面優(yōu)化22-23
• 2.5 發(fā)酵過程的影響因素及其控制23-24
• 3 結(jié)果與討論24-32
• 3.1 單因素實驗設(shè)計24-26
• 3.2 Plackett-Burman實驗26-27
• 3.3 最陡爬坡實驗27
• 3.4 響應(yīng)面優(yōu)化27-29
• 3.5 發(fā)酵條件優(yōu)化29-32
• 3.6 優(yōu)化效率討論32
• 4 小結(jié)32-33
• 第三部分 鏈霉菌BOR-0331次級代謝產(chǎn)物的提取及分離純化33-39
• 1 實驗材料33-34
• 1.1 主要實驗設(shè)備與儀器33
• 1.2 主要試劑與耗材33-34
• 2 實驗方法34-36
• 2.1 分析制備方法34
• 2.2 發(fā)酵產(chǎn)物的提取和純化34-36
• 3 結(jié)果與討論36-38
• 3.1 發(fā)酵液HPLC分析36
• 3.2 TLC分析36-37
• 3.3 發(fā)酵產(chǎn)物的提取與純化37-38
• 4 小結(jié)38-39
• 第四部分 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定39-45
• 1 實驗儀器及材料39
• 2 實驗方法39-40
• 2.1 紫外光譜分析39
• 2.2 質(zhì)譜分析39
• 2.3 紅外光譜分析39-40
• 2.4 NMR分析40
• 3 結(jié)果與討論40-44
• 3.1 紫外光譜分析40
• 3.2 質(zhì)譜分析40-41
• 3.3 紅外光譜分析41
• 3.4 核磁共振譜分析41-43
• 3.5 目標化合物的結(jié)構(gòu)鑒定43-44
• 4 小結(jié)44-45
• 結(jié)語45-46
• 參考文獻46-48
• 附圖48-53
• 附表53-55
• 綜述 血管生成抑制劑及Borrelidin的研究進展55-65
• 參考文獻63-65
• 致謝65

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1 ;鏈霉菌鑒定法[J];抗菌素;1976年04期

2 陳耀鴻;;由橄欖變異鏈霉菌生物合成產(chǎn)物中分離得到的新抗生素——變易霉素B[J];國外藥學(抗生素分冊);1982年06期

3 D.A.Hopwood;K.F.Chater;還連棟;;鏈霉菌分子遺傳學研究的新進展[J];國外藥學(抗生素分冊);1986年03期

4 薛禹谷;我國鏈霉菌遺傳學研究的回顧和展望[J];中國抗生素雜志;1990年03期

5 鄧子新;鏈霉菌基因表達分子研究的新進展[J];中國抗生素雜志;1990年03期

6 Даниленко.В.Н;唐建國;;鏈霉菌遺傳不穩(wěn)定性的機理[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);1990年02期

7 孫勝;;鏈霉菌的菌種保藏[J];國外醫(yī)藥(抗生素分冊);1990年02期

8 張聰恪,Lee Xingting;藍色鏈霉菌對麥秸桿的降解和酶活性測定[J];實用預(yù)防醫(yī)學;2004年06期

9 宋友禮;;質(zhì)粒DNA在鏈霉菌中的高頻率轉(zhuǎn)化[J];國外藥學(抗生素分冊);1981年03期

10 劉華珍;科科魯鏈霉菌產(chǎn)生的新的蛋白質(zhì)α-淀粉酶抑制劑[J];國外藥學(抗生素分冊);1985年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 呂和平;刑仁昌;吳紅宇;鄭應(yīng)華;;空間效應(yīng)對紅多孢鏈霉菌的影響[A];中國空間科學學會第16屆空間生命學術(shù)研討會論文摘要集[C];2005年

2 鄧名榮;郭俊;朱紅惠;;粵藍鏈霉菌中聚酮合酶基因的初步研究[A];2008年中國微生物學會學術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

3 鄧名榮;郭俊;朱春華;朱紅惠;;粵藍鏈霉菌中生物活性物質(zhì)的初步研究[A];2008年中國微生物學會學術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

4 黃璐瑤;江雅莉;李愛英;;來自天藍色鏈霉菌的一個小調(diào)控蛋白的研究[A];2013年湖北省暨武漢微生物學會會員代表大會暨學術(shù)年會論文摘要集[C];2013年

5 周敏;覃重軍;;天藍色鏈霉菌基因組的改造工程[A];2010年第四屆全國微生物遺傳學學術(shù)研討會論文摘要集[C];2010年

6 榮曉瑩;郭銀平;黃英;;多位點序列分析及聚酮合酶應(yīng)用于鏈霉菌系統(tǒng)學的研究[A];2008年中國微生物學會學術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

7 田宇清;譚華榮;;一個非常規(guī)的應(yīng)答調(diào)控因子在天藍色鏈霉菌孢子形成的不同階段控制分化的進程[A];第二屆中國青年學者微生物遺傳學學術(shù)研討會論文集[C];2006年

8 李梅;王磊;;細胞色素P450與鏈霉菌次生代謝產(chǎn)物的生物合成[A];科技創(chuàng)新與綠色植�！袊参锉Ｗo學會2006學術(shù)年會論文集[C];2006年

9 張桂敏;周秀芬;鄧子新;;透明顫菌血紅蛋白基因在抗生素產(chǎn)生菌—鏈霉菌中的表達[A];中國生物工程學會第三次全國會員代表大會暨學術(shù)討論會論文摘要集[C];2001年

10 袁紅莉;王風芹;陳文新;;微生物降解法提高褐煤中黃腐酸的含量[A];第九屆全國土壤微生物學術(shù)討論會論文摘要[C];2001年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 記者鄭曉春;英破譯藍色鏈霉菌基因[N];科技日報;2002年

2 王小龍;藍色鏈霉菌中篩選出活性基因簇[N];科技日報;2010年

3 ;中比菌類合作研究[N];科技日報;2000年

4 王迪;細菌抗癌引人注目[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王月月;工業(yè)鏈霉菌中磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶的研究及應(yīng)用[D];浙江大學;2015年

2 尚廣東;牲畜鏈霉菌調(diào)節(jié)基因的克隆及生技霉素穩(wěn)定型基因工程菌的構(gòu)建[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1999年

3 黃曦;鏈霉菌FR-008與灰色鏈霉菌IMRU3570及其代謝產(chǎn)物的比較研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學;1999年

4 張華;人的可溶性白細胞介素1受體I型（hsIL-1RI）在鏈霉菌中的表達[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1999年

5 王駿;鏈霉菌產(chǎn)生的新型纖溶酶的純化、性質(zhì)和基因克隆的研究以及溶栓機制的初步探討[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;1997年

6 張渤;位點特異性重組在鏈霉菌的遺傳改造及抗生素基因簇的克隆上的應(yīng)用[D];復(fù)旦大學;2013年

7 姜自彬;人可溶性血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1（sFlt-1）基因在鏈霉菌及甲醇酵母中的克隆表達及分離純化研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

8 劉天罡;南昌鏈霉菌中聚醚抗生素釋放機制的研究[D];上海交通大學;2008年

9 劉春平;人血管內(nèi)皮生長因子受體-2基因（KDR）在鏈霉菌和大腸桿菌的克隆表達及其抑制劑篩選模型的構(gòu)建研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

10 令楨民;Streptomyces griseus胰蛋白酶的分子改造[D];江南大學;2013年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 歐陽昌鑫;變鉛鏈霉菌基因磷硫修飾蛋白DndE的表達純化與結(jié)晶初步探討[D];揚州大學;2015年

2 徐鐘;利用轉(zhuǎn)座誘變研究天藍色鏈霉菌A3（2）的功能基因組[D];華中農(nóng)業(yè)大學;2011年

3 田淑翠;產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的茂源鏈霉菌的誘變篩選和發(fā)酵研究[D];華東師范大學;2016年

4 鹿小詩;拮抗冬棗黑斑病鏈霉菌K14固態(tài)發(fā)酵和菌劑的初步研究[D];曲阜師范大學;2016年

5 陳維斌;恰塔努加鏈霉菌L10中Ⅱ型硫酯酶生物學功能研究[D];浙江大學;2015年

6 成雪晴;藤黃生孢鏈霉菌次級代謝產(chǎn)物生物合成初探[D];上海交通大學;2015年

7 陳宏;鏈霉菌BOR-0331產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物Borrelidin的研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

8 馬騰博;灰色鏈霉菌胰蛋白酶基因在變鉛青鏈霉菌及枯草芽孢桿菌中的表達[D];江南大學;2013年

9 李亞南;基于代謝組學的始旋鏈霉菌代謝產(chǎn)物的研究[D];上海師范大學;2015年

10 李善振;恰塔努加鏈霉菌磷酸雙組份系統(tǒng)功能研究[D];浙江大學;2011年

  本文關(guān)鍵詞：鏈霉菌BOR-0331產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物Borrelidin的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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