本文關鍵詞：黃芪甲苷對肝細胞放射損傷的防護作用及機制研究

  更多相關文章： 黃芪甲苷 電離輻射 輻射防護 活性氧 Nrf2 L-02

【摘要】：目的:觀察黃芪甲苷對肝細胞L-02的輻射防護作用,并對其相關機制進行研究,為開發(fā)新輻射防護藥物提供實驗依據。方法:實驗分為對照組、黃芪甲苷組、輻照組、黃芪甲苷+輻照組。采用MTT法檢測黃芪甲苷對肝細胞L-02在不同時間的毒性作用,選出合適的黃芪甲苷濃度;給予0、0.5、1、2、4、6、8 Gy的137Cs-γ射線照射后24、48、72 h采用MTT法檢測電離輻射對細胞存活率的影響,選出合適的輻照劑量;通過MTT法檢測黃芪甲苷對輻照后細胞存活率的影響;克隆形成實驗觀察黃芪甲苷對輻照后L-02細胞克隆形成的影響;生長曲線法觀察黃芪甲苷對L-02細胞的增殖能力的影響;DCFH-DA法檢測活性氧(ROS)含量;微板法檢測丙二醛(MDA)含量及還原型谷胱甘肽(GSH)活力;WST-1法檢測總超氧化物歧化酶(SOD)活力;流式細胞術檢測黃芪甲苷對輻照后L-02細胞凋亡率及細胞周期的影響;羅丹明123熒光探針檢測黃芪甲苷對輻照后L-02細胞線粒體膜電位的改變的影響;免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察γH2AX焦點數(shù);Western Blot檢測各組Nrf2、HO-1、NQO1的蛋白表達。結果:1.MTT結果顯示不同濃度的黃芪甲苷作用L-02細胞不同時間后,細胞存活率無顯著差異;輻照后細胞存活率隨受照劑量增大而降低,隨輻照后時間增長而降低。黃芪甲苷能夠恢復輻射損傷后L-02細胞的增殖能力,抑制輻射所致的胞內ROS和MDA含量升高,同時使胞內SOD和GSH活力有所恢復。2.流式細胞術檢測細胞凋亡結果顯示輻照后細胞凋亡率隨著藥物濃度的增加而降低;細胞周期結果顯示黃芪甲苷能有效的緩解電離輻射引起的細胞G2期阻滯;羅丹明123染色結果顯示,黃芪甲苷+輻照組細胞線粒體膜電位均高于輻照組。3.激光共聚焦顯微鏡結果顯示黃芪甲苷+輻照組γH2AX焦點數(shù)明顯少于輻照組。4.Western Blot結果顯示:輻照組細胞內Nrf2、HO-1及NQO1表達升高,黃芪甲苷+輻照組Nrf2、HO-1及NQO1表達則是隨著藥物濃度增加而降低。結論:1.電離輻射誘導L-02細胞DNA損傷、G2期阻滯,細胞存活率降低。2.終濃度為20-80μg/mL的黃芪甲苷對L-02細胞沒有明顯的細胞毒性,并且具有較好的輻射防護效果。3.黃芪甲苷可能是通過清除輻照后L-02細胞內升高的自由基、增高細胞線粒體膜電位、恢復抗氧化酶活力、減少G2/M期阻滯比例降低γ射線誘發(fā)的氧化損傷發(fā)揮輻射防護作用。4.黃芪甲苷可通過Nrf2途徑來減輕電離輻射所致的損傷。
【關鍵詞】：黃芪甲苷 電離輻射 輻射防護 活性氧 Nrf2 L-02
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 前言13-19
• 第2章 材料與方法19-33
• 2.1 實驗材料19-23
• 2.1.1 實驗細胞及其培養(yǎng)19
• 2.1.2 實驗藥物的配制及其分組19-20
• 2.1.3 輻照參數(shù)20
• 2.1.4 主要試劑20-21
• 2.1.5 主要儀器21
• 2.1.6 主要試劑的配制21-23
• 2.2 實驗方法23-31
• 2.2.1 MTT檢測細胞存活率23-24
• 2.2.2 生長曲線法觀察黃芪甲苷對L-02細胞增殖能力的影響24
• 2.2.3 細胞克隆形成實驗檢測黃芪甲苷對L-02細胞的輻射防護作用24-25
• 2.2.4 檢測L-02細胞內活性氧（ROS）含量的改變25
• 2.2.5 檢測L-02細胞中的超氧化物歧化酶（SOD）活力改變25-27
• 2.2.6 檢測L-02細胞中的還原型谷胱甘肽（GSH）活性的改變27
• 2.2.7 檢測L-02細胞中的丙二醛（MDA）含量的改變27-28
• 2.2.8 流式細胞術檢測L-02細胞凋亡28
• 2.2.9 熒光分光光度法檢測線粒體膜電位（MMP）28-29
• 2.2.10 流式細胞術檢測L-02細胞的周期分布29
• 2.2.11 免疫熒光法觀察γH2AX29-30
• 2.2.12 Western Blot法檢測細胞內Nrf2、HO-1、NQO1蛋白的表達30-31
• 2.3 統(tǒng)計分析31-33
• 第3章 結果33-47
• 3.1 黃芪甲苷與電離輻射對L-02細胞存活率的影響33-35
• 3.2 黃芪甲苷對L-02細胞增殖能力的影響35
• 3.3 克隆形成實驗檢測黃芪甲苷對L-02細胞的輻射防護作用35-36
• 3.4 L-02細胞的ROS含量改變36-37
• 3.5 L-02細胞的GSH和SOD活力及MDA含量的改變37-38
• 3.6 流式細胞術檢測黃芪甲苷對輻照后L-02細胞凋亡的影響38-39
• 3.7 黃芪甲苷對輻照后L-02細胞線粒體膜電位的影響39
• 3.8 流式細胞術檢測黃芪甲苷對輻照后L-02細胞周期的影響39-41
• 3.9 黃芪甲苷對輻照后L-02細胞γH2AX免疫熒光foci的影響41-42
• 3.10 Western Blot檢測細胞內蛋白的表達42-47
• 3.10.1 黃芪甲苷對輻照后L-02細胞Nrf2表達的影響42-43
• 3.10.2 黃芪甲苷對輻照后L-02細胞HO-1 表達的影響43
• 3.10.3 黃芪甲苷對輻照后L-02細胞NQO1表達的影響43-47
• 第4章 討論47-55
• 4.1 黃芪甲苷與電離輻射對L-02細胞生長增殖的影響48
• 4.2 黃芪甲苷對輻射后L-02細胞抗氧化能力的影響48-49
• 4.3 黃芪甲苷對L-02細胞凋亡及線粒體膜電位的影響49-51
• 4.4 黃芪甲苷對輻照后L-02細胞周期改變的影響51-52
• 4.5 黃芪甲苷對L-02細胞DNA損傷后γH2AX foci形成的影響52
• 4.6 黃芪甲苷對L-02細胞Nrf2相關蛋白表達的影響52-55
• 第5章 結論55-57
• 參考文獻57-65
• 綜述65-73
• 參考文獻70-73
• 附錄73-75
• 作者攻讀學位期間的科研成果75-77
• 致謝77

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前10條

1 賈永峰;王德文;;電離輻射和非電離輻射復合作用的生物學效應[J];中華勞動衛(wèi)生職業(yè)病雜志;2006年12期

2 王小玲;;術中使用C型臂X線機電離輻射的防護[J];河南外科學雜志;2008年06期

3 王家富;;醫(yī)學中電離輻射對人體的危害[J];吉林醫(yī)學;2010年12期

4 于雯淼;李t煴，

本文編號：725588